胃癌患者血清β-肌动蛋白和G 蛋白偶联受体-4 的表达及临床意义

王春梅 王彩生

1.呼和浩特市第二医院检验科，内蒙古呼和浩特 010010；2.内蒙古锡林郭勒盟中心医院感染性疾病科，内蒙古锡林浩特 010010

胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一，具有恶性度高、治愈率低及预后差等特点。胃癌早期临床症状无明显特异性，主要有恶心、呕吐等，晚期可出现上腹部不适、进食后饱胀、呕血、黑便等，严重可导致死亡[1-2]。大部分胃癌患者确诊时往往是中晚期，治疗效果较差。因此，探索胃癌发生的生物学机制，尽早诊断与治疗对延长胃癌患者的生存时间及预后具有至关重要的意义。G 蛋白偶联受体-4（LGR4）称为富含亮氨酸重复序列的GPCR4 或GPCR48，是G 蛋白偶联受体家族成员之一，也是重要的细胞膜受体之一，由18个外显子和17个内含子组成，在胚胎和成人各种组织中均广泛表达[3]，其具有多种生物学功能，如介导细胞信号传导与激活、促进器官发育，在卵巢癌的发生发展过程中起到促癌作用[4]。β-肌动蛋白（β-actin）是一种细胞骨架蛋白，与E-钙黏蛋白（E-cadherin）形成复合体，具有维持同型细胞的黏附、防止细胞移动的作用。当细胞质中存在过量的β-catenin 时，β-catenin便转移到细胞核中，充当细胞增殖分化过程的转录因子[5-6]。有研究显示，β-catenin 可通过调节Wnt 信号通路的表达，参与结肠癌的发生发展[7]。因此，本研究通过检测胃癌患者β-actin 与LGR4 的表达水平，初步探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018 年2 月—2020 年6 月于呼和浩特市第二医院以下简称“我院”住院治疗的胃癌患者103 例（观察组），纳入标准：①经胃镜活检确诊为胃癌；②均首次诊断为胃癌；③临床病理资料完整。排除标准：①患有其他消化系统疾病，如十二指肠溃疡、胃溃疡等；②患有其他恶性肿瘤，如肺癌、骨髓瘤等；③患有免疫系统疾病；④接受过抗肿瘤治疗。观察组男59 例，女44 例；年龄45～71 岁，平均（55.2±6.3）岁；≥55 岁55 例，＜55 岁48 例；根据胃癌病理组织分化结果，中低分化51 例，高分化52 例；TNM 分期：Ⅰ期64 例，Ⅱ期27 例，Ⅲ期8 例，Ⅳ期4 例；有淋巴结转移40 例；肿瘤 直 径＜2.5 cm 65 例，≥2.5 cm 38 例；TNM 分期及病理分化程度参考第8 版美国癌症联合会标准[8]。另选同期我院住院的胃良性肿瘤患者52 例为对照组，①经术后病理检查明确诊断为胃良性肿瘤。②首次诊断胃良性肿瘤。③患者临床病理资料完整。排除标准：①患有其他消化系统疾病，如胃炎、慢性肠炎等。②患有心、脑系统疾病。③患有免疫功能缺陷疾病。对照组男30 例，女22 例；年龄47～68 岁，平均（54.7±2.1）岁。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P ＞0.05），具有可比性。本研究患者均自愿参与，获医院医学伦理协会审核通过。

1.2 研究方法

所有受试者晨起空腹抽取静脉血约4 mL，加入到肝素促凝血管中，3000 r/min 离心15 min，离心半径12.5 cm，分离血清进行实验。采用ELISA 法检测各组患者血清中LGR4 与β-actin 的浓度（试剂盒购于上海生工生物工程有限公司，批号：20180115），操作步骤按照试剂盒的说明书逐步进行。

1.3 统计学方法

采用SPSS 22.0 统计软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（）表示，组间比较采用t 检验；计数资料以例数表示，采用χ2检验；应用ROC 曲线评价LGR4 与β-actin 的表达在胃癌中的诊断能力。以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组β-actin 与LGR4 表达水平比较

观察组患者血浆中β-actin 与LGR4 表达均高于对照组（P ＜0.05）。见表1。

表1 两组β-actin 与LGR4 表达水平比较（pg/mL，）

表1 两组β-actin 与LGR4 表达水平比较（pg/mL，）

注：β-actin：β-肌动蛋白；LGR4：G 蛋白偶联受体-4

2.2 观察组患者血清中β-actin 与LGR4 的表达水平与临床病理特征的关系

血清β-actin、LGR4 在低～中分化、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期及无淋巴结转移胃癌患者的表达高于高分化、Ⅰ～Ⅱ分期和有淋巴结转移患者（P ＜0.05），而在患者不同年龄、性别及肿瘤直径中表达比较，差异无统计学意义（P ＞0.05）。见表2。

表2 胃癌组患者血清中β-actin 与LGR4 的表达与临床病理特征的关系（pg/mL，）

表2 胃癌组患者血清中β-actin 与LGR4 的表达与临床病理特征的关系（pg/mL，）

注：β-actin：β-肌动蛋白；LGR4：G 蛋白偶联受体-4

2.3 胃癌患者血清中β-actin 与LGR4 的表达对胃癌的诊断价值

绘制ROC 曲线结果显示：β-actin、LGR4 对胃癌均有较好的诊断能效，最佳截断值分别为3.21、47.62 pg/mL，ROC-AUC 分别为0.747（95%CI：0.726，0.785，P ＜0.001）、0.782（95%CI：0.751，0.803，P ＜0.001）。血清中β-actin 与LGR4 联合检测胃癌的ROC-AUC为0.869（95%CI：0.837，0.914，P ＜0.001），联 合检测的ROC-AUC 高于β-actin、LGR4 单一检查，差异有统计学意义（Z=2.153、2.365，P=0.005、0.003）。见图1。

图1 β-actin 联合LGR4 检测诊断胃癌的ROC 曲线

3 讨论

胃癌是世界上常见的恶性肿瘤之一，好发年龄在50 岁以上，男女发病率比例约为2∶1。相关文献显示，胃癌是世界范围内癌症相关死亡原因的第五大原因[9-10]，且发病率居高不下，恶性度和死亡率高。尽管现代社会的医学检查及治疗方法都取得了较大进步，但全世界内胃癌的死亡率并未明显降低，确诊病例数仍在持续增加，严重威胁着人们的身心健康。因此，探寻灵敏的胃癌生物标志物，对于胃癌患者的早诊断早治疗、提高患者的生存时间有着重要的意义。

LGR4 是G 蛋白偶联受体家族的重要成员之一，其染色体位置为11 号染色体长臂，分子质量约为104 000，并在人体多种组织中均有表达，如胰腺、肾脏及心脏组织等[11]。研究显示，LGR4 可介导多种细胞信号的转导过程，如参与免疫反应及自主神经的调节等[12]；同时，LGR4 亦参与多种病理过程，如LGR4 通过调节细胞代谢使得白色脂肪组织增多、棕色脂肪组织减少，进而导致肥胖的发生[13-14]，同时还可通过促进Snail 蛋白、下调E-钙黏蛋白的表达水平，进而促进了上皮-间质转化（EMT），参与前列腺癌的发生发展过程[15-16]。本研究发现胃癌患者血清中LGR4 的水平升高，并且与胃癌患者的TNM 分期、细胞分化程度及淋巴转移相关，提示LGR4 可能参与了胃癌的发生发展过程。相关文献显示，LGR4 是R-spongdin 蛋白的受体，具有较高的亲和力，当LGR4 与R-spongdin 蛋白结合后，激活Wnt/β 联蛋白信号通路，上调β 联蛋白的表达水平，高表达的β 联蛋白进入细胞核内，进而促进了基因的转录及翻译，加速了肿瘤细胞的生长周期，抑制肿瘤细胞的凋亡，进一步促进肿瘤细胞的增殖及分化，提高肿瘤细胞的恶性程度，进而影响胃癌的进展[17]；此外，LGR4 还可促进Wnt/β 联蛋白信号通路中的下游靶基因Dickkopf 相关蛋白1（DKK1）的表达，过表达的DKK1 分泌到细胞外，为肿瘤细胞的生长及分化提供了良好的微环境，促进了肿瘤细胞的生长、并向周围组织浸润，进一步提高肿瘤细胞的恶性程度[18-21]。

肌动蛋白是一种分子质量约为42 kDa 的多功能蛋白，是组成微丝的主要成分，肌动蛋白参与很多重要的细胞生物学过程，如肌肉的收缩、细胞分裂、细胞信号转导等[22-23]。肌动蛋白有3种亚型，分别为α-肌动蛋白、β-肌动蛋白及γ-肌动蛋白。β-肌动蛋白是细胞骨架的组成成分，在大多数的细胞中均有表达，在细胞器的细胞内转运、肌肉收缩及细胞迁移的过程中发挥了重要的作用[24]。有研究显示，β-actin 在肝癌组织中呈高表达现象，与病情的严重程度呈正相关，为肝癌的临床研究提供了新的靶点[25]。本研究发现胃癌患者血清中β-actin 的表达水平升高，并与胃癌患者的TNM 分期、细胞分化程度及淋巴转移相关，提示β-actin 亦可能参与了胃癌的发生发展过程。有研究显示，β-actin 单体有3个结合位点，一个是ATP 的结合位点，其余两个是肌动蛋白的结合位点[26]。当微丝成熟后，与β-actin 结合的ATP 水解并释放出大量的能量，为细胞的生长提供了有利的环境，促进了肿瘤细胞的增殖及分化，在肿瘤细胞的发生发展过程中发挥了重要作用。水解后的ATP 形成ADP-F-肌动蛋白，并经过一系列细胞过程再次形成ATP-肌动蛋白单体，而后ATP 水解释放能量，这种循环被称为“踏车运动”，可促进肿瘤细胞的迁移及转移过程[27]。ROC 分析显示，胃癌患者血清中β-actin 与LGR4 对胃癌具有一定的诊断价值，ROC-AUC 均＞0.7。二者联合应用时ROC-AUC 为0.869，高于两指标的单独诊断效能，提示二者联合使用时对胃癌的诊断具有更高的临床价值。

综上所述，胃癌患者患者血清中β-actin 与LGR4的表达水平均升高，且在低～中分化、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期及无淋巴结转移患者中高表达，二者联合检测有可能作为诊断胃癌的分子标志物。