手足口病样本类别间检测结果的差异比较

毛卉

（荆州市第三人民医院检验科，湖北 荆州 434000）

手足口病（hand,foot and mouth disease，HFMD）是由肠道病毒（enterovirus，EV）引起，儿童多发的传染性疾病，重症患儿多为＜3岁儿童[1-2]。患儿手、足、口腔通常会出现疱疹或皮疹，有低热、腹痛、哭闹拒食等表现[3]。已有研究[4]证明在手足口病的筛查中EV71T CV-A16型感染比例最高。手足口病实验室诊断一般是以肠道病毒的核酸检测为主，临床根据患者实际情况采集粪便、肛周拭子、咽部拭子、疱疹渗出液、血清、脑脊液等标本进行送检，最常见的有肛拭、咽拭子和疱疹渗出液。本研究选取2017年1月至2019年12月本院收治的385例手足口患儿为研究对象，统计并比较3种常见标本肠道病毒检测结果，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2017年1月至2019年12月本院收治的385例手足口患儿为研究对象，其中358例有接触史，占比92.9%。其中，男229例，女156例；年龄0～17岁，平均年龄（3.52±1.27）岁。纳入标准：患儿均有口痛、厌食、发热及表皮、口腔等部位出现疱疹或小溃疡的临床表现；符合《手足口病诊疗指南（2018年版）》诊断标准。

1.2 方法 对385例患儿每人配对采集两个类型标本，固定采集肛拭标本和根据患儿实际临床表现和患儿对标本采集的过程接受情况选择咽拭子或疱疹液标本1份。所有标本的采集均在发病急性期内完成。

1.2.1 临床标本的运送和保存 所有标本采集完成后均需检查标本采集容器是否密封好，防止在运送过程中标本干燥。不能及时送检的标本在4℃暂存并在12 h内冷链送至实验室。实验室收取标本后，若当天不能进行检测应按要求置于-20℃以下核酸检测专用格保存，记录标本相关信息，禁止与其他检测项目的标本混放。检测后需长期留存的标本应做好标记置于-80℃保存。

1.2.2 实验室检查 将采集的患儿标本进行病毒核酸提取处理，试剂为湖南圣湘生物技术有限公司生产的试剂盒。实时荧光定量逆转录多聚酶链反应过程使用ABI7300型实时荧光定量PCR仪。整个操作流程均严格按照试剂说明书来完成，操作过程符合实验室标准化程序文件要求。

1.2.3 结果判读 所有标本检测结果以CT值≤35（CT为达到设定域值的循环数）判断为阳性；检测结果35＜Ct≤38判断为可疑，此时应对该标本重新检测，必要时需重新采集标本；CT值＞38时还未检出，则判为阴性。

1.3 观察指标 比较第一对照组肛拭、咽拭子肠道病毒检测数据，第二组肛拭、疱疹液肠道病毒检测数据，两个对照组中肛拭标本的病毒检测数据，以肛拭组汇总数据为参照与疱疹液、咽拭子标本检出率比较。

1.4 统计学方法 采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析，计数资料以[n（%）]表示，比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 第一组肛拭、咽拭子肠道病毒检测数据比较 第一组共采集279例患儿共558份标本。肛拭标本中检出肠道病毒EV通用型226例、EV71型122例、CV-A16型85例、其他肠道病毒感染19例。同步检测的咽拭标本各型阳性例数依次为188例、96例、74例和18例。肛拭标本肠道病毒检测的EV通用型和EV71的阳性检出率均明显高于同步检测的咽拭标本，差异有统计学意义（P＜0.05）。但两种标本CA16型和肠道病毒其他类型的阳性率比较差异无统计学意义，见表1。

表1 肛拭和咽拭肠道病毒检测数据比较[n（%）]Table 1 Comparison of enterovirus test data between anal swab and pharynx swab[n(%)]

2.2 第二组肛拭、疱疹液肠道病毒检测数据比较 第二组共采集106例患儿共212份标本。肛拭标本中检出肠道病毒EV通用型84例、EV71型45例、CV-A16型32例、其他肠道病毒感染7例。同步检测的疱疹液标本各型阳性例数依次为98例、60例、31例和7例。肛拭标本肠道病毒EV通用型，EV71阳性检出率均明显低于同步检测的疱疹液标本，差异有统计学意义（P＜0.05）。但两种标本CV-A16型和肠道病毒其他类型的阳性率比较差异无统计学意义，见表2。

表2 肛拭和疱疹液肠道病毒检测数据比较[n（%）]Table 2 Comparison of enterovirus test data between anal swab and herpes fluid[n(%)]

2.3 两组中肛拭标本检测结果比较 两个对照组中肛拭标本检测结果比较差异无统计学意义。综合两个对照组数据，肛拭标本所测数据共385例，EV通用型核酸阳性310例，阳性率80.51%。其中检出EV71阳性167例，占43.37%，CVA16型阳性117例，占30.38%，其他类型阳性26例，占6.75%，见表3。

表3 两组肛拭标本肠道病毒检测数据比较[n（%）]Table 3 Comparison of enterovirus test data between two groups[n(%)]

2.4 以肛拭组汇总数据为参照与疱疹液、咽拭子标本检出率比较 3种类型标本的肠道病毒检出率比较差异有统计学意义（P＜0.05），其中肠道病毒通用型和EV71型比较差异有统计学意义（P＜0.01），检出率由高至低依次为疱疹液、肛拭、咽拭。两种标本CV-A16型和肠道病毒其他类型的阳性率比较差异无统计学意义，见表4。

表4 肛拭、咽拭、疱疹液肠道病毒检测数据比较[n（%）]Table 4 Comparison of enterovirus test data of anal swab,pharynx swab and herpes fluid[n(%)]

3 讨论

手足口病是由肠道病毒引起的季节性流行性疾病[5]，一般以确诊感染者或无症状感染者为传染源，可通过消化道和呼吸道传播[6]。多数感染者为轻症，但也因身体基础状况不同，有少数患儿会出现脑炎、神经源性肺水肿、肺出血等症状，危及患儿生命[7-9]。基于以上原因，如何选择合适的样本送检以保证肠道病毒检出率具有重要意义。

本研究结果显示，第一组279例患儿肛拭EV通用型、EV71、CV-A16和肠道病毒其他型阳性率为81.00%、43.72%、30.47%、6.81%，高于咽拭子的67.38%、34.40%、26.52%、6.45%；肛拭标本肠道病毒检测的EV通用型和EV71的阳性检出率均明显高于同步检测的咽拭标本，差异有统计学意义（P＜0.05）。第二组106例患儿肛拭EV通用型、EV71、CVA16和肠道病毒其他型阳性率为79.24%、42.45%、30.18%、6.60%，低于疱疹液的92.45%、56.60%、29.24%、6.60%，肛拭标本肠道病毒EV通用型，EV71阳性检出率均明显低于同步检测的疱疹液标本，差异有统计学意义（P＜0.05），检出率由高至低依次为疱疹液、肛拭、咽拭。分析原因为，除标本类型间本身的差别外，还有可能是由于采集此类标本的患儿出现疱疹典型症状和临床诊断标准符合率也最高所致。3种标本间CA16型和肠道病毒其他类型检出率比较差异无统计学意义。这可能与分析研究的样本量不足及两种类型感染占比较低相关。本研究与不同标本间肠道病毒检出率存在一定差异，肛拭子肠道病毒总体阳性检出率均高于咽拭子标本，与相关研究结果[10-13]基本一致。

综上所述，手足口病肠毒病毒核酸检测在肛拭子、咽拭子、疱疹三种类型标本间阳性检出率存在明显差异。为保证手足口患儿肠道病毒核酸检测阳性检出率利于辅助临床诊断，建议在患儿发病急性期同时采集两个类型的样本送检。标本类型的选择应在患者实际条件允许的情况下，尽量首选检出率高的疱疹液标本送检，肛周拭子标本次之，咽拭子为末选。