2020年新疆规模化猪场猪O型口蹄疫病毒抗体检测与分析

张小玉 屈勇刚* 常军帅 王紫阳 党瑞莹 孙琼飞 周海琴 李 岩

（1石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003；2动物疾病防控兵团重点实验室，新疆石河子 832003；3新疆生产建设兵团畜牧兽医工作总站，新疆乌鲁木齐 830063）

口蹄疫（Foot-and-mouth disease,FMD）俗称“口疮热”“蹄癀”，是一种由口蹄疫病毒（Foot-andmouth disease virus,FMDV）引起以侵害牛、羊、猪等70多种偶蹄类动物为主并具有传播速度快、传染性强、发病率高等特点的疫病，也可感染人。该病于1514年在意大利首次被发现，潜伏期通常为2～7 d，一年四季均可发生，患病动物初期临床表现为体温升高，口腔、蹄胛、乳房等部位出现米粒至蚕豆大小的水疱，动物因疼痛采食量减少，喜侧卧。随着病程延长，水疱破裂结痂，蹄胛脱落，怀孕母猪易流产，其他成年猪可耐受而自行康复，但幼猪因缺乏免疫力或保护性母源抗体，往往造成急性心肌炎而死亡，死亡率可达80%，病死猪剖检可见“虎斑心”[1]。在传播过程中，FMDV可随风传播至50 km以外，羊和牛分别是FMDV的“贮存器”与“指示器”，致使此病长期在全球范围内广泛流行，为养猪业带来了巨大危害，被世界动物卫生组织（OIE）列为必须报告的动物传染病，在我国将其规定为一类动物疫病和强制免疫的动物疫病之一[2,3]。由目前的流行趋势可推测，在FMDV的7个血清型中我国将长期流行O型（优势毒株为Mya-98），A型（优势毒株为Sea-97-G2）呈点发状流行，AsiaⅠ型趋于消亡，所以把消灭O型作为净化本病的重点工作[4]。此病尚无特效药，仍以疫苗免疫接种作为防控此病的重要手段之一，免疫效果常采用抗体检测来直观评估[5]。液相阻断酶联免疫吸附试验 （liquid-phaseblockingEnzyme-Linked Immunosorbent Assay,LPB-ELISA）是农业农村部规定且人们普遍认可的结构蛋白抗体检测方法，具有特异、敏感和可重复性强等特点，该方法虽然耗时、步骤繁琐，但使用仪器来进行结果判定，避免了操作人员主观误差[6,7]。本试验为了解2020年新疆规模化养猪场O型口蹄疫病毒抗体水平，采用O型口蹄疫病毒LPB-ELISA试剂盒对采集的469份样品血清进行检测。

1 材料与方法

1.1 样品

2020年1月至12月期间从新疆9个规模化养猪场，共采集469份样品血清。其中后备母猪血清27份、妊娠母猪血清27份、经产母猪血清35份、哺乳母猪血清5份。

1.2 材料和仪器

O型口蹄疫病毒LPB-ELISA抗体检测试剂盒，购自中国农业科学院兰州兽医研究所；兽用一次性采血器5 mL为武汉民生医用器材有限公司产品；微量移液器（Eppendorf）、自动酶标仪（美国BioTek公司生产）。

1.3 方法

1.3.1 样品处理

根据猪只日龄的不同从耳缘静脉或前腔静脉采集3～5 mL血液，室温中静置30 min，析出清亮、无溶血的血清，每份血清收集1 mL至无菌EP管中，依次编号，12 000 r/min离心5 min，离心后的血清可直接检测或置于4℃保存待检。

1.3.2 LPB-ELISA检测法与结果判定

根据O型口蹄疫病毒抗体LPB-ELISA检测试剂盒说明书进行严格操作。结果判定：酶标仪测定各孔OD450nm值，每板设有4孔O型口蹄疫病毒抗原对照，根据所得病毒抗原数值计算该组数据临界值（弃去4孔病毒抗原OD450nm值的最大值和最小值，剩余2孔平均值的二分之一为临界值）。当OD450nm值＞临界值为阴性；当OD450nm值≤临界值时为阳性。

1.3.3 数据分析

使用Excel软件和SPSS软件对所获数据进行统计学分析。

2 结果

2.1 9个规模化猪场O型口蹄疫病毒抗体水平检测结果

结果见表1，9个规模化猪场O型口蹄疫病毒抗体平均阳性率为88.06%（413/469），各个场中，除了A场的阳性率为56.70%，低于国家70%的标准，其余8个场的阳性率分别为82.68%、79.31%、94.23%、91.45%、95.00%、100.00%、95.45%和100.00%。

表1 9个规模化猪场O型口蹄疫病毒抗体检测结果

2.2 各类别猪群O型口蹄疫病毒抗体检测结果

由表2可知，在各类别猪群O型口蹄疫病毒抗体水平检测结果中，4种类别猪群O型口蹄疫病毒抗体水平的整体合格率为91.49%，各类别猪群O型口蹄疫病毒抗体水平均在85%以上，后备母猪抗体阳性率为85.19%，妊娠期母猪抗体阳性率为92.59%，经产母猪抗体阳性率为94.29%，哺乳母猪抗体阳性率为100.00%。

表2 各类别猪群口蹄疫O型抗体检测结果

3 讨论与分析

3.1 9个规模化养猪场免疫效果评价

新疆9个规模化养猪场的整体O型口蹄疫病毒抗体阳性率为88.06%，达到国家（70.00%）的要求标准[8]。2011年4月至2013年3月期间，席悦[9]曾对新疆奇台县43个猪场进行O型口蹄疫病毒抗体检测，阳性率为36.22%。刘鸽等[10]得出了2014年1月至2016年9月期间北疆5个地区的O型口蹄疫病毒抗体合格率为86.84%。陆民[11]曾对克拉玛依市的O型口蹄疫病毒抗体进行调查，发现该市5个区的O型口蹄疫抗体阳性率由2015年的75.96%上升至2018年的94.56%。以上数据说明随着口蹄疫强免工作的持续推进，O型口蹄疫病毒抗体合格率在新疆地区呈逐年上升和稳定的趋势，而本次检测得出的数据相比于2018年的94.56%有所下降，应引起相关猪场的重视。

9个规模化猪场中，仅有A场的O型口蹄疫病毒抗体阳性率低于70.00%，猪场人员应加强重视程度，从疫苗接种、生物安全、猪群健康状况等方面着手，找到造成阳性率低于国家标准的原因并积极解决，保障猪场更快更好发展。

3.2 各类别猪群抗体水平的差异

本次试验中，后备母猪、妊娠期母猪、经产母猪、哺乳期母猪的O型口蹄疫病毒抗体平均阳性率分别为85.19%、92.59%、94.29%、100.00%。虽然均达到国家标准，但后备母猪的抗体平均阳性率相对较低，应该引起重视。

3.3 口蹄疫的防控措施

口蹄疫的发病率近100%，被称为养猪业的“头号杀手”，猪场管理者要坚持防重于治的方针，应做好以下3点：⑴加强饲养管理，提高猪群整体免疫力。⑵免疫接种是保障，种猪每年进行3～4次高效免疫，商品猪通常免疫2次。⑶定期检测，科学评价是关键，通过定期对猪群进行抗体检测，可以更加科学地指导免疫程序，确保免疫防控的效果。