2020年新疆地区规模化猪场猪PCV2抗体检测与分析

2021-07-21党瑞莹张小玉王紫阳孙琼飞常军帅屈勇刚

中国猪业 2021年3期

党瑞莹张小玉王紫阳孙琼飞常军帅屈勇刚*李岩

（1石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003；2动物疾病防控兵团重点实验室，新疆石河子 832003；3新疆生产建设兵团畜牧兽医工作总站，新疆乌鲁木齐 830063）

猪圆环病毒属于圆环病毒科、圆环病毒属的DNA病毒，本病最早发现于20世纪70年代。迄今为止，猪圆环病毒共有3种血清型，为PCV1、PCV2、PCV3[1]。PCV1无致病性，PCV2有着强致病性[2]。PCV3主要侵害幼龄猪，临床表现呈多样性。PCV2是圆环病毒科一种无包膜、共价闭合、呈环状排列的单链DNA病毒，直径为14～25 nm，是已知的最小的动物病毒之一[3]。PCV2可致不同生长阶段的猪只发病，会严重损害猪的免疫系统，引起猪的免疫抑制。严重影响猪群的生长繁殖，且易继发多种猪传染病，包括猪呼吸道病综合征（PRDC）、猪增生性和坏死性肺炎（PNP）、猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪呼吸道病和母猪繁殖障碍等[4]。疫苗接种是本病预防控制的主要措施之一，抗体检测是保障疫苗免疫效果的关键。为了解2020年新疆地区规模化猪场PCV2免疫抗体水平，本试验选择新疆地区6个规模化猪场，针对不同日龄段的猪采集血清样品，采用PCV2 ELISA抗体检测方法进行抗体检测分析，以期为该地区PCV2的防控提供参考。

1 材料与方法

1.1 样品来源

试验样品来自新疆地区6个规模化猪场（A、B、C、D、E、F）不同日龄段的猪，共采集血清样品333份。其中，哺乳仔猪血清80份，保育猪血清49份、育肥猪血清39份，后备猪血清34份，经产母猪血清104份，种公猪血清27份。

1.2 材料和仪器

猪圆环病毒Ⅱ型抗体酶免检测试剂盒（哈尔滨元亨生物药业有限公司）、自动酶标仪（美国 Bio Tek）、微量移液枪（Eppendorf公司）、一次性兽用采血器（5 mL）、恒温培养箱等。

1.3 试验方法

1.3.1 样品采集

每头猪用5 mL的一次性兽用采血器一次性从猪的前腔静脉采血3～5 mL，分组做好标记。室温下静置待血液凝固后，放置有冰袋的采样箱里，带回实验室进行血清分离。

1.3.2 检测方法

将浓缩的洗涤液恢复至室温并摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。在抗原反应板的待检样品孔中直接加入80 μL样品稀释液后再加入20 μL的待检样品。阴阳对照原液不稀释直接加100 μL于待检孔中。微量振荡器上充分混匀5～10 s后，贴上封板膜，置恒温箱中37℃孵育30 min，重复洗涤 5次后，加入酶结合物 100 μL，贴上封板膜，置37℃孵育30 min，洗涤5次。随即加入底物液A 50 μL，再加入底物液B 50μL，轻轻震荡混匀，置37℃避光显色15 min。加入终止液50 μL，轻轻震荡混匀，置酶标仪450 nm波长处测定各孔OD450值。

1.3.3 试验结果判定

试验结果同时符合阴性对照OD450值≤0.15，阳性对照OD450值≥0.60。计算临界值：阳性对照OD450值×0.25。当被检样品OD450值小于临界值时，为PCV2抗体阴性，大于或等于临界值时为PCV2抗体阳性。

1.3.4 试验结果分析

用SPSS 20.0统计分析软件进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 不同地区猪场猪圆环病毒2型抗体检测结果

6家猪场共333份猪血清，有258份呈PCV2抗体阳性，平均阳性率为77.78%，OD450平均值为1.07。具体见表1。规模化猪场A、B、C、D、E、F的PCV2抗体阳性率分别为100.00%、53.13%、48.78%、85.71%、96.43%、72.50%。其中，A场的抗体阳性率最高为100.00%，但OD450平均值最高的是E场，为1.43。C场抗体阳性率最低为48.78%。A～F猪场检测的 OD450平均值分别为：1.40、0.82、0.79、1.09、1.43、0.71。使用SPSS软件进行单因素分析的结果表明A场和E场与B、C、D、F等4个场的抗体水平差异显著（P＜0.05）。F场与A、D、E等3个场的抗体水平差异显著（P＜0.05）。

表1 新疆地区6个规模化猪场PCV2抗体检测结果

2.2 试验猪场不同类别猪群的PCV2抗体水平

不同类别猪群的PCV2抗体水平见表2。哺乳仔猪、保育猪、育肥猪、后备猪、经产母猪、种公猪的PCV2抗体阳性率分别为67.5%、48.98%、89.74%、88.24%、86.54%、96.30%。其中，种公猪的抗体阳性率最高（96.30%），保育猪的抗体阳性率最低（47.92%）。哺乳仔猪、保育猪、育肥猪、后备猪、经产母猪、种公猪的PCV2抗体OD450平均值分别为：0.91、0.65、1.44、0.84、1.21、1.55。使用SPSS软件进行单因素分析的结果表明：种公猪与哺乳仔猪、保育猪、后备母猪和经产母猪的抗体水平差异显著（P＜0.05）。经产母猪与哺乳仔猪、保育猪、后备母猪、种公猪抗体水平差异显著（P＜0.05）。

表2 新疆地区6个规模化猪场不同日龄猪PCV2抗体检测结果

3 讨论

3.1 整体猪群的PCV2抗体水平分析

试验共采集333份血清样本，阳性样品为258份，阳性率为77.78%。张家瑞等[5]在2019年对新疆部分地区5家规模化猪场检测PCV2抗体，其平均阳性率为70.71%；刘秀清等[6]对西宁市部分规模化猪场检测PCV2抗体，平均阳性率为71.23%。马超峰等[7]对信阳部分规模化猪场检测PCV2抗体，平均阳性率为75.7%。顾绍锋等[8]对云南富源县部分规模化猪场进行PCV2抗体检测，平均阳性率为88.21%。以上结果表明，2020年新疆地区PCV2抗体水平与2019年相比有所提高，与大部分地区的抗体水平相当，较少地区的免疫抗体水平较低。在试验中，6家规模化猪场中有4家猪场的PCV2抗体阳性率在国家规定标准（70%）以上，只有2个猪场抗体阳性率低于国家标准。A场的抗体阳性率最高为100.00%，C场抗体阳性率最低为48.78%。其中A、D、E、F等4个PCV2抗体阳性率均高于国家规定水平（＞70%），但B场和C场PCV2型抗体平均阳性率（53.13%、48.78%）均低于国家规定水平，且差异较大。PCV2的免疫效果受诸多因素干扰，饲养管理水平、疫苗效力、免疫时间等都会影响抗体阳性率。因此，对于免疫效果不理想的猪场，需查明原因，优化免疫程序的同时提高饲养管理水平，加强生物安全措施。

3.2 不同类别猪的PCV2抗体水平分析

此次检测发现保育猪的抗体水平最低，同时保育仔猪阶段也是PCV2的高发期，所以需优化免疫程序，确保该阶段仔猪的抗体维持在有效保护水平。种公猪的PCV2抗体水平高达100.00%，有的可能是野毒感染或者反复免疫的结果，建议通过病原学检测排出野毒感染的可能。哺乳仔猪的PCV2抗体阳性率仅为67.50%，未达到70.00%的标准，该日龄段仔猪本身携带母源抗体，但相对日龄大一些的哺乳仔猪母源抗体水平比较薄弱，所以抗体水平不高，可在这一阶段根据猪场不同情况选取较合适的免疫日龄来改进；亦可通过怀孕母猪的加强免疫提高母源抗体的水平和维持时间。