SHCBP1 表达与宫颈癌患者预后相关性的研究

林莉香

在全球女性癌症患者中，宫颈癌的发病率及病死率均排名第四[1]，而其在发展中国家是仅次于乳腺癌的第二大最常见的癌症[2]。随着宫颈癌筛查的普及，尽早接受根治性切除术可极大地改善早期宫颈癌患者的预后，但中晚期患者接受治疗后的生存期仍不理想[3]。因此，有必要鉴定新的生物标记物以改善宫颈癌的诊断和预后。

SHCBP1（SHC SH2 结构域结合蛋白1）是一种最早在活化的淋巴细胞中被鉴定的蛋白质，可与衔接蛋白SHC 的SH2 结构域相互结合，可能在调控细胞周期进程的信号通路中发挥作用[4]。近年来，越来越多的证据揭示了SHCBP1 在癌症进展中的关键作用。例如，SHCBP1 被证实可促进胃癌的生长及侵袭[5]。此外，神经胶质瘤中SHCBP1 的高表达与患者较差的预后有关[6]。然而，尚未有研究报道SHCBP1在宫颈癌中的功能作用。本研究旨在揭示SHCBP1表达与宫颈癌患者预后的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床病例资料 选取2013 年3 月～2015 年10 月期间于中南大学湘雅医学院附属海口医院妇产科行手术治疗，且病理诊断为宫颈癌的病例61例（表1），收集所有病例的癌及癌旁组织样本并储存于液氮罐中，所有病例均签署患者知情同意书。所有病例入院后接受常规手术或以手术为主的综合治疗，术前均未接受过宫颈癌相关的手术治疗及放、化疗，出院后以电话、短信或查阅病案资料等进行定期随访调查，随访截止日期为2020 年10 月。

1.2 总RNA 提取及定量PCR 实验 将癌与癌旁组织样本在组织研磨仪（武汉赛维尔生物科技公司）中充分研磨后，利用总RNA 提取试剂盒（北京索莱宝科技公司）提取总RNA。应用核酸浓度测定仪（美国Bio-rad 公司）测定RNA 浓度后，再利用逆转录试剂盒（德国Qiagen 公司）合成cDNA。按比例配制PCR 反应体系，置于荧光定量PCR 仪（美国ABI 公司）中扩增40 个循环。将GAPDH 的mRNA表达水平用于进行标准化，利用2-ΔΔCT法计算相较于癌旁组织，宫颈癌组织中SHCBP1 的mRNA 表达量的相对倍数。将上述相对倍数的中位值作为区分癌组织中SHCBP1 高表达或低表达的界定值。引物由南京金斯瑞生物科技公司合成，具体序列如下：SHCBP1，上游：5′-GCTACCGTGATAAACCAGGTTC-3′，下游：5′-AGGCTCTGAATCGCTCATAGA-3′，GAPDH，上游：5′-TGGAGAAACCTGCCAAGTATG-3′，下游：5′-GGAGACAACCTGGTCCTCAG-3′。

1.3 统计学方法 应用非参数检验分析两个独立组或多个组之间SHCBP1 表达的差异。SHCBP1 表达与临床病理特征的相关性采用χ2检验。根据Kaplan-Meier法，并利用GraphPad Prism 7.0 软件构建生存曲线，应用Log-rank检验进行比较。应用Cox回归分析评估宫颈癌患者预后因素。统计学分析均使用SPSS 22.0 软件进行。P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈癌组织中SHCBP1 的表达情况 结果显示与癌旁组织相比，处于不同临床分期（Ⅰ～Ⅳ期）的宫颈癌组织样本中，SHCBP1 的mRNA 表达量均显著增加（P<0.01），并且随患者临床分期的增加而增加（图1A）。此外，相较于无淋巴结转移的患者，SHCBP1 在有淋巴结转移的宫颈癌患者样本中的mRNA 表达量显著增加（P<0.01）（图1B）。

图1 宫颈癌组织中SHCBP1 的表达情况

2.2 SHCBP1 表达与临床病理特征的相关性 结果显示与SHCBP1 表达显著相关的包括：组织分化程度（P=0.018）、淋巴结转移状态（P=0.002）以及临床分期（P=0.004），而无显著相关性的包括：组织学类型（P=0.612）、年龄（P=0.124）以及肿瘤大小（P=0.198），详见表1。

表1 SHCBP1 表达与临床病理特征的相关性

2.3 宫颈癌组织中SHCBP1 表达与患者生存期的相关性 结果显示SHCBP1 高表达组的宫颈癌患者的总生存期显著短于SHCBP1 低表达组（P=0.006），其中位生存期为46 个月（图2A）。此外，SHCBP1 高表达组的宫颈癌患者的无瘤生存期同样显著短于SHCBP1 低表达组（P=0.005），其中位生存期为40个月（图2B）。

图2 基于SHCBP1 表达的宫颈癌患者生存分析

2.4 宫颈癌患者预后因素分析 单因素Cox 回归分析结果显示，显著影响宫颈癌患者预后的因素包括：组织分化程度（HR=0.143，P<0.001）、SHCBP1表达水平（HR=2.808，P=0.009）、淋巴结转移状态（HR=7.350，P<0.001）以及临床分期（HR=6.434，P<0.001），而无显著影响的因素包括：肿瘤大小（HR=0.746，P=0.434）、组织类型（HR=0.459，P=0.445）及年龄（HR=0.566，P=0.146）。进一步的多因素分析结果显示，宫颈癌患者预后的危险因素包括：SHCBP1表达水平（HR=3.325，P=0.027）及临床分期（HR=5.683，P<0.001），保护因素包括组织分化程度（HR=0.186，P<0.001），而无显著影响的因素包括淋巴结转移状态（HR=2.135，P=0.107），详见表2。

表2 Cox 回归分析宫颈癌患者的预后因素

3 讨论

SHC 是一种细胞表面受体衔接蛋白，可以参与多种因子（如生长因子、细胞因子和整合素等）介导的信号通路，进而可参与调控细胞的存活、增殖、分化和迁移，并在血管生成和肿瘤发生中发挥作用[7]。SHCBP1 可通过与SHC 的SH2 结构域相互结合而发挥其生物学作用[8]。SHCBP1 在胚胎组织中及增殖旺盛的睾丸组织中强烈表达，而在心脏和骨骼肌等静止组织中呈低表达或不表达，这个结果提示SHCBP1 可能在细胞增殖的调控中发挥关键作用[4]。至今，越来越多的研究结果表明SHCBP1 在多种癌症组织（包括食管癌、阴茎癌、肺癌等）中呈现高表达的模式[9-11]。与这些研究结果一致的是，本研究中我们同样发现宫颈癌组织中SHCBP1 的表达显著上调。此外，本研究发现SHCBP1 在有淋巴结转移的宫颈癌患者样本中的表达量同样显著增加。并且

在进一步的统计学分析中，宫颈癌中SHCBP1 表达与淋巴结转移状态之间也被证实呈显著相关，这些结果提示拥有高表达SHCBP1 的宫颈癌患者更容易发生淋巴结转移。在前期关于阴茎癌及乳腺癌的研究报道中，SHCBP1 的表达被证实与患者的临床分期、组织分化程度及淋巴结转移状态等因素之间显著相关[12-13]。此外，与这些结果一致的是，本研究结果显示与宫颈癌中SHCBP1 表达显著相关的因素还包括组织分化程度和临床分期，而不包括组织病理类型、年龄以及肿瘤大小这些因素。然而，在前期关于甲状腺乳头状癌的研究报道中，SHCBP1 的表达被证实与患者的临床分期之间无相关性，而与患者的年龄显著相关[14]。这个结果差异提示在不同种类的癌症中SHCBP1 的表达模式并不一样，然而笔者也推测这个结果差异可能是由于不同研究的偏倚造成的。

前期研究报道SHCBP1 可通过靶向TGF-β1/Smad 信号通路而促进滑膜肉瘤细胞转移，并与患者的预后不良相关[15]。此外，SHCBP1 的表达水平还被证实与肺癌、胰腺癌及前列腺癌患者的生存期呈显著的负相关[16-18]，提示高表达水平的SHCBP1 可预示患者预后不良。在本研究中，生存分析结果显示高表达水平的SHCBP1 可显著缩短宫颈癌患者的总生存期及无瘤生存期，提示SHCBP1 是一个潜在的宫颈癌预后指标。与单纯的对数秩检验相比，Cox回归分析可用于分析生存时间与多个危险因素的回归关系。因此，本研究采用Cox回归分析进一步评估分析宫颈癌患者的预后因素。我们的结果显示不管是单因素还是多因素分析，SHCBP1 的表达水平及临床分期均是宫颈癌患者预后的危险因素，而组织分化程度是其保护因素。这个结果可为SHCBP1作为一个潜在的宫颈癌预后指标提供进一步佐证。而我们的结果同样显示，在单因素Cox回归分析时淋巴结转移状态的风险比为7.350，在多因素Cox回归分析时其风险比是2.135，前者具有显著统计学意义，然而后者差异不具有统计学意义，提示其可能不是危害宫颈癌患者预后的因素。然而笔者推测这个结果可能受到本研究的样本量较小这个因素的影响。同时，本研究认为样本量较小是本研究的局限性。

综上所述，本研究结果显示宫颈癌组织中SHCBP1 的表达显著上调，且SHCBP1 的表达水平与宫颈癌患者生存期呈显著的负相关，提示SHCBP1 是一个潜在的宫颈癌预后指标。但是，SHCBP1 对宫颈癌细胞增殖等特性的作用及其可能的分子机制尚需进一步的研究。