食用菌凝集素菌丝扭结促进剂对真姬菇栽培的影响*
2021-07-15林勇
林勇
（福建卫生职业技术学院，福建 福州 350101）
凝集素具有免疫调节和抑制肿瘤生长的作用，同时还参与生物体内的一些关键生理过程，是研究生物体内分化和分子识别等生理生化在生命规律重要功能作用，已成为生物研究的热点之一[1-4]。
从凝集素的研究来看，其显著地抑制人乳腺癌细胞、人眼成纤维细胞等多种细胞的增殖，并且这些抑制是可逆的而且其细胞学毒性不明显[5-9]，这些特殊的活性使其在未来可能成为治疗肿瘤和组织增生的新型药物。凝集素促进菌种菌丝分化扭结的情况的研究却很少，国内外对于食用菌凝集素的研究多在其分离纯化与其部分的理化性质上进行[10-13]，对其实际应用于菌种自身的研究较少，对凝集素作用于不同菌种的菌丝分化的则少有研究。主要的研究则针对的是从食用菌提取的凝集素混合促进剂并滴加在不同种菌种上所产生的促进菌丝分化的扭结情况，目的是为了在食用菌凝集素菌丝扭结剂的促进下可以让菌种提前出菇，从而缩短真姬菇商品化时间和成本降低[13-16]。
1 材料与方法
1.1 供试材料
正常袋栽长满菌丝的真姬菇菌袋。
1.2 试验方法
1.2.1 凝集素的分离纯化
参照张迪、林勇等分离纯化方法[11]，获得各峰值的凝血活性，然后对其进行冷冻干燥，收集得到双孢蘑菇2796凝集素纯品。
1.2.2 食用菌培养基的制备
固体琼脂PDA培养基，其冷却至一定温度（不能让其凝固）后开始在超净台上倒入PDA，然后等液体凝固后开始接种。
1.2.3 菌种接种
在真姬菇菌袋接入真姬菇菌丝菌块（长×宽：5 cm×1 cm，2条，接种过程要全程保持不染菌），放在25 ℃恒温培养箱培养，待菌丝布满整袋后，喷洒不同浓度（0、1、3、5、7、9 g/L重复，5次，即5个实验组，1个对照空白组）的凝集素菌丝扭结促进剂，同时继续放在培养室中黑暗培养10 d左右，然后将培养皿分别转移到10～15 ℃条件下，在不同的光源、不同CO2浓度培养料含水量、80%湿度继续培养，观察结果，每隔3 d拍1次照片记录过程。
2.1 凝集素促进剂处理真姬菇菌丝扭结的影响
由图1可知，通过食用菌凝集素促进剂处理的真姬菇经过20 d的观察，结果发现培养皿在浓度为5 mg/L有出现有扭结的迹象，菌丝有颜色加深和菌丝加粗的现象，也就说明有一定的促进扭结转色的情况发生。
图1 真姬菇菌丝的显微观察
2.2 食用凝集素促进剂真姬菇栽培工艺对真姬菇菌丝扭结影响
2.2.1 培养温度对真姬菇菌丝扭结影响
温度试验结果表明食用凝集素真姬菇的菌丝生长温度范围为10～15 ℃，适宜生长温度为13 ℃。
2.2.2 培养料含水量对真姬菇菌丝扭结影响
含水量试验结果：真姬菇的菌袋生长含水量范围为50%～65%，适宜生长含水量为60%。
表1 食用菌凝集素栽培真姬菇温度试验结果
表2 食用凝集素栽培真姬菇培养料含水量影响
表3 pH值对食用凝集素栽培真姬菇的影响
表4 不同光源对真姬菇的菌袋生长的试验结果
表5 真姬菇菌袋在紫光不同强度下的试验结果
2.2.3 酸碱度对真姬菇菌丝扭结影响
酸碱度试验表明食用凝集素栽培真姬菇pH值范围为4～9，适宜生长栽培料pH值为6～7。
2.2.4 不同光源同种强度下对食用凝集素栽培真姬菇菌丝扭结影响
不同光源在15 lux条件下试验结果表明，紫光、绿光比其他光更适合真姬菇，紫光更适合菌丝扭结。
2.2.5 紫光源不同强度对食用凝集素栽培真姬菇菌丝扭结影响
紫光源在5、10、15、20 lux强度下，食用菌凝集素栽培真姬菇试验结果表明，15～20 lux条件下，每个菌袋的扭结数量明显多于其它。
2.2.6 不同CO2浓度对食用菌凝集素栽培真姬菇菌丝扭结影响
不同CO2浓度（0.5%、1.0%、1.5%、2.0%）下的试验结果表明，CO2浓度0.5%、1.0%时每个菌袋的扭结数量高于1.5%、2.0%，说明CO2浓度0.5%、1.0%更适合其生长，出菇数量比较均匀。
表6 不同CO2浓度时真姬菇的菌袋生长的试验结果
2.2.7 食用菌凝集素菌丝扭结促进剂的综合因素对真姬菇菌袋的影响
通过食用菌凝集素菌丝扭结促进剂对真姬菇菌丝平板的菌丝扭结的营养的研究，发现总共2组6个重复中5 g/L以上浓度的凝集素处理点均出现了菌丝扭结点，6块平皿中累计出现了21个菌丝扭结点，1 g/L浓度处理点均未出现扭结点，3 g/L浓度的处理点只有50%出现了扭结点，且扭结点较小；5、7、9 g/L处理点出现的扭结原基大小均衡，未表现出明显差异。生产应用上将5 g/L的双孢蘑菇凝集素喷剂，待菌包开袋后喷洒于袋口菌丝表面，经处理后可加快菌丝扭结，进而缩短向子实体转化时间3～5 d，产量与未喷洒制剂的无显著差异。
由表7可以看出，在开袋时喷洒食用菌凝集素可以明显缩短真姬菇扭结时间，从而缩短生长时间。在浓度为1～5 g/L时，随着食用菌凝集素浓度的增加真姬菇生长时间缩短，但当食用菌凝集素再增加时，真姬菇生长时间缩短达稳定水平，缩短时间不明显。
表7 食用菌凝集素对真姬菇生长时间的影响
从表8中可以看出，喷洒食用菌凝集素对真姬菇产量没有明显影响，不会造成产量下降。因此，在真姬菇开袋时喷洒食用菌凝集素有助于真姬菇菌丝扭结，缩短生长时间，并且最佳的食用菌凝集素喷洒浓度为5 g/L。真姬菇开袋时喷洒5 g/L食用菌凝集素可以缩短生长时间3～4 d。
表8 食用菌凝集素（5 g/L）对真姬菇菌袋产量的试验结果（每个菌袋）
3 讨论与结论
⑴ 凝集素(lectin)在医学领域的免疫调节以及抑制病毒增殖方面得以应用，还参与生物体内的一些关键生理过程,且与食用真菌的菌丝发育和形态生长发育息息相关[12-16]。
⑵本实验探讨食用菌凝集素菌丝扭结促进剂对真姬菇工厂化生产的影响，研究不同的温度、培养料含水量、酸碱度、不同光源、不同CO2浓度对真姬菇菌丝扭结影响。机理研究还待进步深入。
