通山县某猪场猪链球菌分离株毒力特征及耐药性研究
2021-07-14吴三南
吴三南
摘要：对通山县某猪场猪链球菌（Streptococcus suis，SS）病料进行了毒力特征及耐药性研究。结果获得血清1型1株，血清2型12株，血清7型2株，血清9型3株。PCR检测epf、mrp和sly，结果显示epf+/mrp+/sly+型有7株，epf-/mrp+/sly+型有5株，epf-/mrp-/sly-型有6株。药敏试验结果显示其对头孢喹肟、青霉素和氨苄西林敏感，对其他类型抗生素均高度耐药。
关键词：猪链球菌（Streptococcus suis，SS）;血清型;毒力基因;耐药性
中图分类号：S858.28 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2021）04-0012-0
猪链球菌（Streptococcus suis，SS）主要引起猪败血症、脑膜炎、肺炎、多发性关节炎和多发性浆膜炎，在世界范围内影响巨大。当前主流趋势将其分成29 个血清型，其中SS2 型流行最广。猪链球菌的epf、mrp、sly是目前研究较多的主要毒力基因[1]。
近年来，猪链球菌病在不同地区均呈上升趋势，且经常与主要病毒性疾病猪圆环病毒病、猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪伪狂犬病等混合感染，更不利于猪的疾病诊断及防控，同时也造成了较大的经济损失。本研究通过收集通山县某猪场30份临床疑似猪链球菌病病料，对其毒力因子及其耐药性进行了研究。旨在揭示该猪场猪链球菌流行菌株优势血清型及其毒力因子特征和耐药性特征，为该猪场防控猪链球菌病提供基础研究数据。
1 材料与方法
1.1 病料
采集临床濒死期哺乳仔猪病料10份、保育猪病料20份（脑组织病料与关节液病料混合均匀后分离鉴定）。
1.2 病原的分离纯化
将采集的脑组织和关节液分别划线接种于含5%的新生牛血清TSA平板，置于37 ℃培养箱培养24 h，挑选可疑单个菌落进行纯化培养，随后进行革兰氏染色，镜检。
1.3 分离菌株的血清型鉴定
主要采用聚合酶链式反应（PCR）方法进行鉴定。参照文献[2]设计合成鉴定引物。
1.4 毒力基因检测
参照文献[2]合成SS 的3 种主要毒力基因epf、mrp、sly 的引物。取冻干保存的18株SS接种于含5 %小牛血清TSB 液体培养基中，37 ℃ 培养18 h后提取其基因组DNA作为模板，用于PCR 扩增SS 的epf、mrp、sly毒力基因。
1.5 药物敏感性试验
药敏试验采用纸片扩散法[3]。5大类8种抗生素包括头孢喹肟、青霉素、氨苄西林、卡那霉素、替米考星、四环素、土霉素、恩诺沙星等。
2 结果与分析
2.1 细菌血清型鉴定
本試验共获得18株猪链球菌，其中猪链球菌血清1型有1株，占5.6%;血清2型有12株，占66.7%;血清7型有2株，占11.1%;血清9型有3株，占16.7%。血清2型为当前该猪场流行优势菌株（图1）。
2.2 分离菌株3种毒力基因检测结果
PCR共检测出3种毒力基因类型，epf+/mrp+/sly+型有7株，占38.9%;epf-/mrp+/sly+型有5株，占27.8%，epf-/mrp-/sly-型有6株，占33.3%（表1）。
2.3 药敏试验结果
药敏试验结果（表2）表明，18株链球菌对头孢喹肟、青霉素和氨苄西林敏感性较高（敏感性分别为83.3%、77.8%、72.2%），对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类药物均表现出较高的临床耐药性。
3 小结与讨论
本试验对通山县某猪场疑似猪链球菌病例进行分离鉴定及血清型分型，发现血清2型为当前该猪场流行优势菌株。与国内其他地方报道较为一致[4]。
epf、mrp和sly与猪链球菌致病性强弱有关，epf+/mrp+/sly+被认为与高致病性菌株相关。本试验共检测出3种毒力基因类型，epf+/mrp+/sly+型占38.9%，占比最高，表明该猪场猪链球菌临床流行菌株以epf+/mrp+/sly+毒力类型为主。药敏试验结果显示只有头孢喹肟、青霉素和氨苄西林敏感性较高，在70%以上;其他5种抗生素均表现出了高度的耐药性。本试验对该猪场猪链球菌病流行菌株优势血清型及其毒力特征和耐药性特征的研究结果，可为该猪场针对猪链球菌病的防控提供基础研究数据。
参考文献：
[1] 宦海霞，黄莉莉，张 科.猪链球菌多样性及其致病因子研究进展[J].中国畜牧兽医，2014，41（2）：218-223.
[2] 许大文. 致病性猪链球菌安徽分离株的生物学特性研究[D]. 合肥：安徽农业大学， 2012.
[3] 刘志科，张秋雨，陈创夫，等.猪链球菌病原的分离鉴定与药敏试验[J].养猪，2017（2）：105-108.
[4] 刘 琪，王 娟，周如月，等.猪链球菌2、7、9型多重PCR检测方法的建立及应用[J].中国动物传染病学报，2016，24（3）：35-40.
