肝细胞癌患者血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平变化及其临床意义探讨*

张 兵，陈瑞红，杨 威，徐 刚

原发性肝癌(PLC)占世界恶性肿瘤死亡率的第二位，具有极高的危害性，其中肝细胞癌(HCC)为最常见的一类，占肝癌的80%以上[1-3]。热休克蛋白90α(HSP90α)为一类常见的分子伴侣，广泛存在于真核生物细胞，与肿瘤细胞的形成、分化和增殖等密切相关，已经成为肿瘤治疗的新靶点。维生素K拮抗剂诱导蛋白-Ⅱ(protein induced by vitamin K antagonist-II ，PIVKA-Ⅱ)为异常凝血酶原-Ⅱ，由肝脏组织合成。近几年来研究表明，检测HCC患者血清PIVKA-Ⅱ有重要的临床意义[4]。本研究检测了HCC患者血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平的变化，探讨了检测的临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2014年1月～2016年6月我院诊治的HCC患者112例，男性65例，女性47例；平均年龄为(51.3±6.2)岁。经病理学检查诊断，所有患者均为初次治疗且预计生存期大于5个月。排除标准：①其他类型的肝癌；②合并其他癌症；③有严重的精神疾病或严重的器官功能衰竭；④存在自身免疫性疾病。肿瘤细胞呈低分化39例，中高分化73例。按照国际抗癌联盟(Union for International Cancer Control，UICC)第八版TNM分期标准进行分期，其中Ⅰ/Ⅱ期患者42例，Ⅲ/Ⅳ期患者70例；Child-Pugh A/B级84例，C级28例；另选择同期在我院诊治的乙型肝炎肝硬化患者96例，男性55例，女性41例；平均年龄为(50.7±4.9)岁。慢性乙型肝炎患者82例，男性50例，女性32例；平均年龄为(41.6±4.9)岁。同期健康体检者84例，男性44例，女性40例；平均年龄为(51.6±5.1)岁。

1.2 治疗方法 按照2011年发布的《原发性肝癌诊疗规范》的原则，采用经导管肝动脉化疗栓塞术(TACE)治疗，主要药物包括奥沙利铂联合多西他赛。每例患者接受TACE 1～3次，间隔1个月。

1.3 血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平测定 采用ELISA法检测(美国贝克曼公司试剂)。

2 结果

2.1 各组血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平比较 HCC患者血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平显著高于乙型肝炎肝硬化、慢性乙型肝炎和健康人(P<0.05，表1)。

表1 各组血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平比较

2.2 不同预后患者血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平比较 至随访结束，本组112例HCC患者死亡57例。入组时，死亡组患者血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平显著高于生存组(P<0.05，表2)。

2.3 影响HCC患者3 a生存率的相关单因素分析 对生存与死亡的HCC患者进行单因素分析结果表明，肝外转移、肿瘤分化程度、Child-Pugh分级、TNM分期、血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平均影响患者3 a生存(P<0.05，表3)。

表3 影响HCC患者3 a生存率(%)的单因素分析

2.4 影响HCC患者生存的多元Logistic回归分析 经多因素Logistic回归分析表明，肝外转移、肿瘤分化程度低、Child-Pugh分级为C级、TNM 分期为Ⅲ～Ⅳ期、血清HSP90α≥69.3 ng/mL或血清PIVKA-Ⅱ≥892.4 mAU/mL为影响HCC患者3 a生存率的独立危险因素(P<0.05，表4)。

表4 影响HCC患者3 a生存率的多元Logistic回归分析

2.5 应用血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ单独或联合预测HCC患者生存率的ROC曲线分析 分别绘制血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平单独或联合预测HCC患者3 a生存率的ROC曲线，确定最佳截断点分别为69.3 ng/mL和892.4 mAU/mL。两者联合预测的AUC为0.929，显著高于血清HSP90α或PIVKA-Ⅱ分别单独预测的0.814和0.836(P<0.05，图1，表5)。

图1 血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ单独或联合预测HCC患者3 a生存率的ROC曲线

表5 血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ单独或联合预测HCC患者3 a生存率效能比较

3 讨论

HSP90α为人体重要的生物活性物质，与机体的信号转导和激素应答等生理活动密切相关[5-7]。研究证实，与正常细胞比，癌细胞HSP90α表达和活性较高，后者通过与病变蛋白的特异性结合能阻碍细胞凋亡，加速细胞增殖速度，诱发癌细胞的形成[8]。当细胞内HSP90α含量过高时，可分泌至胞外，与癌细胞的转移和侵袭密切相关，其表达水平与肿瘤细胞分化程度存在显著的正相关。有研究发现[9-10]，利用血清HSP90α预测HCC患者预后，其AUC值达到了0.995，其灵敏度和特异度分别达到了95.6%和97.8%。

近年来，研究发现PIVKA-Ⅱ可作为检测HCC的标志物。检测血清PIVKA-Ⅱ可作为肝癌的早期筛查指标，可以提高诊断率。PIVKA-Ⅱ主要由肝脏细胞合成，并可分泌至胞外进入血浆，其血清含量的高低与肿瘤出现时间密切相关[11]，协助诊断HCC的特异性和敏感性均较高[12]。PIVKA-Ⅱ属于凝血酶原的一种前体蛋白，具有与凝血酶原相似的理化特性，但缺少其相关的生物学活性。细胞对凝血酶原前体的合成异常引起维生素K缺乏，导致PIVKA-Ⅱ的产生[13]。研究证实，血清PIVKA-Ⅱ水平与肝细胞癌临床特征密切相关。因此，血清PIVKA-Ⅱ水平可反映HCC患者肿瘤的严重程度[14]。分析其原因，可能是癌细胞通过影响机体凝血功能，导致凝血酶表达异常，而PIVKA-Ⅱ为凝血功能异常产生的蛋白，因此癌症患者血清PIVKA-Ⅱ水平显著高于正常人。本研究HCC患者血清PIVKA-Ⅱ水平比正常人显著升高(P<0.05)，与上述结论相符。

有研究表明[15]，原发性肝癌患者血清PIVKA-Ⅱ水平与肝硬化患者、慢性乙型肝炎患者和正常人存在显著性差异。有研究者[16]发现，肝硬化与慢性肝炎患者血清HSP90α水平存在显著性差异，而HCC患者血清HSP90α水平最高。本研究结果表明，与其他相关肝脏疾病患者比，HCC患者血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平显著升高(P<0.05)。一般认为，癌细胞大量增殖引起HSP90α表达量增加，大量的HSP90α进入血浆导致血浆HSP90α水平异常。同时，癌细胞增殖引起机体凝血酶原前体合成异常导致PIVKA-Ⅱ水平升高。有研究者[17]联合检测血清AFP和PIVKA-Ⅱ，发现应用两种指标联合诊断原发性肝癌的AUC为0.914，显著高于应用血清AFP或PIVKA-Ⅱ的0.805和0.762，表明两者联合对于HCC的诊断具有较高的价值。

本组112例HCC患者在TACE治疗后3 a生存率为49.1%。应用血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ或两者联合预测生存的AUC分别为0.814、0.836或0.929，与以往研究报道[18]类似。另有研究表明[19]，TNM分期、肝外转移、血清HPS90α水平和肿瘤细胞分化程度为影响HCC患者预后的因素。本研究除了分析这些相关因素外，利用ROC曲线分析发现，血清HSP90α≥69.3 ng/mL或PIVKA-Ⅱ≥892.4mAU/mL为影响预后的独立危险因素，此结论与以往研究相似[20]。