高效液相色谱法测定银杏芪血通胶囊中阿魏酸和芍药苷的含量

河南省商丘市食品药品检验检测中心（476000）王飞 蒋俊春

医院制剂是医疗机构为了满足病人的需要制定的制剂，其灵活性大、适应性强，尤其适用于效期不长，稳定性弱的小批量生产的制剂。但是随着现代医学技术的不断发展，医院对药品质量的要求越来越高，药品质量的管理已逐步走向正规化，在新形势下，医院制剂的问题也越来越多地暴露出来。银杏芪血通胶囊是河南省柘城县人民医院的医院制剂，具有显著的补气活血，散淤通络的功效，广泛用于各种心脑血管疾病。它的处方中有十二味中药，而制剂标准仅对人参、当归和川芎三味药进行了薄层色谱鉴别，对该制剂的质量控制不够严格[1][2][3]。为了更好地控制该制剂的质量，本文建立了高效液相色谱法测定银杏芪血通胶囊中阿魏酸和芍药苷含量的方法，通过方法学验证[4]，表明该方法准确，易于操作，有利于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1260型高效液相色谱仪[岛津企业管理（中国）有限公司]，XS 205DU电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），SB-800DTD超声处理机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2 试药 阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110773-201614）；芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110736-201741）；乙腈为高效液相色谱专用，水为超纯水。银杏芪血通胶囊（河南省柘城县人民医院，批号：200107、200509、200806）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：CAPCELL PAK C18色谱柱（4.6×150mm，5um）。流动相：乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）梯度洗脱（洗脱程序见附表1）；流速1.0ml·min-1；检测波长230nm；进样量10μl；理论板数应不低于2000，分离度大于1.5。

附表1 流动相梯度洗脱程序

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品溶液的制备 称取阿魏酸对照品约15mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理使其充分溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成阿魏酸对照品储备溶液。另称取芍药苷对照品约10mg，精密称定，置20ml量瓶中，同法制成芍药苷对照品储备溶液。精密量取阿魏酸对照品储备溶液1ml、芍药苷对照品储备液5ml，置于同一10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品2粒的内容物，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇10ml，称定重量，超声处理30min后，冷却至室温，补足减失的重量，滤过，续滤液用0.45um的微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 将处方中除了当归、川芎和赤芍的其他味药，按照制备工艺制成阴性制剂，并按照“2.2.2”项下供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

2.3 方法学验证

2.3.1 系统适用性试验 取对照品、供试品溶液和阴性对照溶液，按照“2.1”项下的色谱条件测定，色谱图见附图。供试品溶液的色谱图中主峰与对照品溶液的色谱图主峰的保留时间一致，且阿魏酸与芍药苷色谱峰与相邻色谱峰的分离度大于1.5，达到基线分离，阴性无干扰；按阿魏酸或芍药苷峰计算，理论塔板数大于5000。

附图 高效液相色谱图

2.3.2 线性关系考察 取阿魏酸与芍药苷混合对照品溶液，按照“2.1”项下的色谱条件，取对照品溶液分别进样1、2、5、10、20μl，记录阿魏酸和芍药苷峰面积值，绘制标准曲线，回归方程为：Y=0.02729X+0.01324，相关系数为1.0000，Y=11.56581X-0.06011，相关系数为0.9999，Y为峰面积，X为对照品进样量。结果可见：芍药苷对照品进样量在0.2530～5.060ug，阿魏酸对照品进样量在0.02862～0.5724ug之间与峰面积积分值线性关系良好。

2.3.3 精密度试验 取混合对照品溶液，连续进样6次，每次10μl，记录主峰面积，阿魏酸和芍药苷的相对标准偏差分别为0.77%、0.82%（n=6），由此可证精密度良好。

2.3.4 稳定性试验 取同一供试品溶液，在12h内每隔1h进样测定一次，记录测定结果，计算峰面积的相对标准偏差，阿魏酸为1.04%，芍药苷为0.98%，表明供试品溶液在12h内基本稳定。

2.3.5 重复性试验 取同一批样品，按“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液5份，按照“2.1”项下的色谱条件测定含量，结果阿魏酸的平均含量为0.1426mg·粒-1，RSD为1.65%(n＝5)，芍药苷的平均含量为1.2417mg·粒-1，RSD为1.46%(n＝5)，表明方法重复性良好。

2.3.6 加样回收率试验 取供试品（阿魏酸含量为0.1426mg·粒-1、芍药苷为1.2417mg·粒-1）1粒的内容物（平均粒重0.4g），研细，精密称定，9份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入阿魏酸对照品储备液0.40ml、0.50ml、0.60ml和芍药苷对照品储备液2.00ml、2.50ml、3.00ml各三份，再加入甲醇适量使其成为10ml，称定重量，超声处理30min后，冷却至室温，补足减失的重量，滤过，续滤液用0.45um的微孔滤膜滤过，作为供试品溶液，按2.1项下色谱条件依法测定，计算回收率。结果见附表2。

附表2 加样回收率试验结果

2.4 样品测定 按照本文建立的方法测定3批样品，结果见附表3。

附表3 3批样品中阿魏酸和芍药苷的含量测定

3 讨论

3.1 供试品溶液制备方法的确定 本文分别比较了甲醇、乙醇、水、70%的乙醇溶液和80%的甲醇溶液的提取效率和主要有效成分色谱峰的各项指标，结果以甲醇为溶剂提取的效果最好[5-8]。分别采用了超声和回流的方法进行提取，结果显示超声提取30min，能够较充分地将有效成分提取出来，且操作简便，回收率高。

3.2 色谱条件的选择[9]两种成分同时测定，故选用梯度洗脱程序，采用二极管阵列检测器，分别考察了甲醇-0.1%的磷酸溶液、乙腈-0.1%的磷酸溶液和乙腈-水等流动相系统，结果采用了乙腈-0.1%的磷酸溶液梯度洗脱程序，两主要色谱峰峰形较好，分离的达到要求，且阴性无干扰。