CDK8、CXCL13及REGγ在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义

哈斯图雅 钗丽干 崔山丹 夏书琴★

作者单位：1.内蒙古自治区人民医院妇产科，内蒙古，呼和浩特010017

2.内蒙古自治区人民医院病理科，内蒙古，呼和浩特010017

子宫内膜癌（Endometrial Carcinoma，EC）为女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，近年来发病率和病死率均有上升趋势，对女性生命健康造成严重威胁［1］。寻找EC 早期诊断及侵袭转移相关的分子标志物尤其重要［2］。既往研究发现，EC 增殖、转移及扩散与周期蛋白依赖性蛋白激酶（cyclin⁃dependent protein kinases，CDKs）表达情况密切相关，CDKs在细胞增殖与分化中具有调控作用［3］。趋化因子13（Chemokine CXC ligand13，CXCL13）是CXC 类趋化因子家族的一员，在多种恶性肿瘤发生、发展中具有重要作用［4］。蛋白酶体激活因子11S 调节蛋白复合物γ 亚单位（11S regulator complex gam⁃ma subunit，REGγ）则是一种定位于细胞核内的蛋白质，与细胞生长调控存在密切联系［5］。基于此，本研究通过检查EC 患者CDK8、CXCL13 及REGγ的水平，旨在探讨上述因子水平在EC 中的表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院2015年6月至2019年6月的90 例EC 患者作为研究组。纳入标准：①均符合子宫内膜癌诊断标准［6］；②临床资料无缺损或丢失；③入组时未接受任何治疗，包括药物、放疗及化疗等；④主要脏器功能正常，无严重心、肝肾功能障碍；⑤年龄30～80 岁。排除标准：①患有其他恶性肿瘤患者；②癌症转移；③近期使用抗焦虑、抑郁等药物者；④存在认知功能障碍者。平均年龄（48.56±6.77）岁；病程平均（3.79±2.58）年；临床分期：Ⅰ期50 例，Ⅱ期19 例，Ⅲ期21 例；有淋巴结转移者22例；分化程度：高分化65 例，中低分化25 例。收集同期接受健康体检的志愿者78 例纳入对照组，平均年龄（47.89±5.46）岁，两组一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05）。本研究经过医院伦理委员会批准通过，所有受试者均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 试剂

鼠抗人CDK8、CXCL13 及REGγ 单克隆抗体购自北京中杉金桥生物工程有限公司；SP 免疫组织化学系列工作液试剂盒、DAB 显色剂购自河北博海生物有限公司。

1.2.2 染色方法

所有标本手术切除后立即用10%甲醛固定，组织切片后脱蜡、水化。根据链霉素抗生物素蛋白⁃过氧化物酶（Streptomycin avidin peroxi⁃dase，S⁃P）免疫组化染色法对CDK8、CXCL13 及REGγ 水平进行检测，具体方法严格按照试剂盒说明执行。每批切片染色均以PBS 代替一抗作阴性对照，CDK8、CXCL13 及REGγ 用已知阳性表达的组织切片作阳性对照。一抗稀释比例均为1∶100。

1.2.3 结果判断［7］

CDK8 呈细胞膜着色，CXCL13 呈细胞质或细胞膜着色，REGγ 呈细胞核着色，根据阳性细胞百分比、染色强度判定。无阳性细胞0 分，阳性细胞<10% 1 分，阳性细胞10%～50% 2 分，阳性细胞>50%3 分。染色强度判定：无色0 分，淡黄色1 分，棕黄色2 分，棕褐色3 分。总积分：上述2 项评分的乘积。阳性：总积分≥3 分。

1.3 观察指标

①比较对照组与研究组CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表达情况。②分析CDK8、CXCL13 及REGγ 表达与EC 临床病理特征的关系。③对患者进行1年电话随访，分析其预后生存与死亡情况，并影响EC 患者预后死亡的独立危险因素。④分析CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表达对EC 患者预后预测价值。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0 软件进行统计分析，计数资料以n（%）表示，采用χ2检验；计量资料以（）表示，采用t检验；采用多元Logistic 回归分析影响EC 患者预后生存的独立危险因素；采用ROC 曲线分析CDK8、CXCL13 及REGγ 对EC 患者预后死亡的预测价值；以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表达比较

研究组CDK8、CXCL13 及REGγ 阳性表达率均高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 两组CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表达比较［n（%）］Table 1 Comparison of Cdk8，CXCL13 and reg γ protein expression between 2 groups［n（%）］

2.2 CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表达与EC 临床病理特征的关系

CDK8、CXCL13 的阳性表达者在年龄、肿瘤直径比较差异无统计学意义（P>0.05），CDK8、CXCL13 的阳性表达者在分化程度、淋巴结转移、病理类型、肌层浸润深度及临床分期比较差异均有统计学意义（P<0.05）。REGγ 的阳性表达者年龄、肿瘤直径、分化程度及临床分期比较差异均无统计学意义（P>0.05），REGγ 的阳性表达者在淋巴结转移、病理类型及肌层浸润深度比较差异均有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2 CDK8、CXCL13 及REGγ 蛋白表达与EC 临床病理特征的关系［n（%）］Table 2 the relationship between the expression of Cdk8，CXCL13 and reg γ and the clinicopathological features of EC［n（%）］

2.3 影响EC 患者预后死亡的危险因素分析

术后对患者进行1年随访，其中死亡17 例，死亡率为18.89%。多元Logistic 回归分析结果显示，肿瘤分化程度中低、临床分期Ⅲ、合并淋巴结转移、CDK8、CXCL13 及REGγ 阳性表达是影响胃癌患者预后死亡的独立危险因素（P<0.05）。见表3。

表3 影响EC 患者预后死亡的危险因素分析Table 3 Analysis of risk factors influencing the prognosis of EC patients

2.4 CDK8、CXCL13 及REGγ 单项及联合检测对EC 患者预后生存的预测价值

ROC 结果示，CDK8、CXCL13 及REGγ 联合检测AUC 为0.769，较单独检测高。见表4、图1。

表4 CDK8、CXCL13 及REGγ 单项及联合检测对EC患者预后生存的预测价值Table 4 the prognostic value of Cdk8，CXCL13 and reg γ single and combined detection in EC patients

图1 CDK8、CXCL13 及REGγ 单项及联合检测曲线分析Figure 1 Analysis of single and combined detection curves of Cdk8，CXCL13 and reg γ

3 讨论

EC 是临床妇科最常见的恶性肿瘤之一。其发病率已有超过宫颈癌的趋势［8］。恶性肿瘤的发生、发展及浸润转移是由各种信号传导、趋化因子、转录因子等途径共同实现，因此，寻找识别EC 发展相关的新型因子及预测预后的标志物是近年来研究的热点［9］。

CDK8 是细胞周期依赖性蛋白激酶（Cell cycle dependent protein kinase，CDK）家族中的一员，目前CDK8 基因发挥致癌作用的机制尚未十分明确［10］。但国外已有较多研究表明，CDK8 表达异常在恶性黑素瘤、结直肠癌、胃癌的发生中起到重要作用［11］。而鲜有关于CDK8 表达与官颈癌发生发展关系的相关研究。本组研究结果与Remy 等［12］研究结果报道相符。进一步多元Logistic 回归分析影响EC 患者预后死亡的危险因素发现，CDK8 阳性表达亦是影响EC 患者死亡的危险因素，因此可推断CDK8 也可作为评估EC 患者预后的指标之一。

CXCL13 是自于趋化因子家族的细胞因子，可调控肿瘤细胞的生长、增殖，抑制肿瘤细胞凋亡，最终诱发恶性肿瘤的发生发展。Bhatti 等［13］研究表明，CXCL13 在恶性肿瘤，如肝癌、胃癌中均呈高表达，其表达率与患者术后生存率密切相关。Shea等［14］研究发现，CXCL13 抑制剂可通过作用于CX⁃CR5/ERK 信号通路来减弱肿瘤组织的生长。多元Logistic 回归分析发现，CXCL13 阳性表达是影响EC 患者预后死亡的危险因素。可见CXCL13 表达在EC 的恶性进展过程中具有重要作用，其高表达提示预后不良，这可能与与CXCLl3 促进肿瘤新生血管的生成及肿瘤细胞的增殖活化、转移有关。

REGγ 是一种定位于细胞核内的蛋白质。多项研究发现，该因子在乳腺癌、直肠癌等恶性肿瘤中呈高表达，被认为是一种潜在的癌症标签［15］。本研究结果发现，与正常对照组比较，EC 患者REGγ 阳性表达率明显升高，且与分化程度、淋巴结转移、病理类型及肌层浸润深度有关，推测REGγ 对于子宫内膜癌的晚期评估和预后监测可能起到辅助作用。进一步ROC 曲线分析提示联合检测上诉指标可作为预测患者预后生存的有效手段。但是，EC发展过程是一个有多级因子作用的复杂过程，由于本研究纳入样本量较少，有可能造成统计学上有所偏差，因此尚需要大样本量研究证实。

综上所述，CDK8、CXCL13 及REGγ 在EC 中阳性表达率高，推测CDK8、CXCL13 及REGγ 参与了EC 组织增生、分化及发展过程，临床上可通过检测三者表达情况对患者病情进展及预后进行评估。