肺腺癌组织中EGFR，ROS1、ALKmRNA表达意义

何琼 吴龙波 王志华 杜军 王钰婷

作者单位：安徽省庐江县人民医院病理科，安徽，合肥231500

肺腺癌（Lung adenocarcinoma cells，LAC）是非小细胞肺癌常见亚型之一，发生率约占肺癌总人数的50.0%，多数患者确诊时已处于中晚期，丧失手术治疗最佳时机，疗效及生存率均较低［1⁃2］。近年来，随分子生物学及肺癌驱动基因不断深入，以特定分子为靶点的靶向治疗成为临床研究热点。肉瘤致癌因子⁃受体酪氨酸激酶（c⁃ros oncogene 1，receptor tyrosine kinase，ROS1）异常表达可持续传递生长增殖信号，异常增殖癌细胞。间变性淋巴瘤激酶（anaplastic lymphoma kinase，ALK）属胰岛素受体家族，利用基因重排，可刺激下游信号通路表达，增加癌变风险［3］。表皮生长因子受体（Epi⁃dermal growth factor receptor，EGFR）作为肺癌驱动基因，与EGF 等配体结合，可诱导正常细胞恶性转化，提高癌细胞转移能力［4］。基于此，本研究尝试分析LAC 病理特征及EGFR基因突变、ROS1、ALKmRNA 在LAC 组织中的表达和临床意义。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取2016年7月至2020年1月安徽省庐江县人民医院经手术病理检查确诊的83 例LAC 患者，收集癌组织及癌旁正常组织标本，其中女46 例，男37 例，年龄平均（63.21±6.37）岁，吸烟23 例。纳入标准：①均符合《2011 IASLC/ATS/ERS 肺腺癌国际多学科分类》［5］中相关标准，并均经手术病理检查证实为LAC；②预计生存期>6 个月；③有足够质量与数量甲醛固定的石蜡包埋组织切片可供分析。排除标准：①近3 个月内有放化疗治疗史者；②合并肝肾等其他重要脏器功能障碍者；③合并心源性休克、永久性心脏内传导紊乱等严重心脑血管疾病者；④伴有明显出血倾向者；⑤昏迷或精神行为异常者。本院伦理委员会经审核评议同意本研究，所有研究对象均签署知情同意书。

1.2 方法

取病理科手术切除的LAC 癌组织及距癌边缘6 cm 以内癌旁正常组织，常规石蜡包埋，切片（厚度约为8 μm），苏木精⁃伊红染色后，显微镜下对癌组织区域进行标记，常规二甲苯无水乙醇脱蜡水化。通过Quant Studio5 实时荧光定量PCR 仪以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（real⁃time quanti⁃tative reverse transcriptase⁃polymerase chain reac⁃tion，RT⁃PCR）技术检测EGFR基因突变，严格按照厦门艾德公司提供提供的试剂盒说明书操作。通过荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridiza⁃tion，FISH）检测ALK、ROS1基因融合，严格按照武汉康录公司提供的试剂盒说明书操作。依据突变Ct 值判定检测结果，标准如下［6］：Ct 值<26 为阳性，26≤Ct 值<29 为弱阳性，Ct 值≥29 为阴性。

1.3 统计学方法

采用统计学软件SPSS 22.0 处理数据；计数资料用n（%）表示，行χ2检验；采用Cox 回归分析LAC 患者1年病死影响因素；卡普兰⁃迈耶曲线（Kaplan⁃Meier，K⁃M）分析EGFR基因突变、ROS1、ALK mRNA表达对LAC1年病死的影响，Log⁃Rank 检验不同EGFR基因突变、ROS1、ALK mRNA表达LAC 患者1年病死率差异性。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 癌组织与癌旁正常组织EGFR 基因突变、ROS1、ALK mRNA 比较

癌组织EGFR基因突变、ROS1、ALKmRNA 阳性表达率均高于癌旁正常组织，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 癌组织与癌旁正常组织EGFR 基因突变、ROS1、ALK mRNA 比较［n（%）］Table 1 Comparison of EGFR gene mutation，ROS1 and ALK mRNA between cancer tissues and adjacent normal tissues［n（%）］

2.2 不同病理特征患者EGFR 基因突变、ROS1、ALK mRNA 阳性表达

LAC 患者癌组织内EGFR基因突变、ROS1、ALKmRNA阳性表达率在临床分期、分化程度及淋巴结转移方面比较，差异有统计学意义（P<0.05），在性别、年龄、吸烟史、病灶大小方面比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表2。

表2 不同病理特征患者EGFR 基因突变、ROS1、ALK mRNA 比较［n（%）］Table 2 Comparison of EGFR gene mutation，ROS1 and ALK mRNA in patients with different pathological features［n（%）］

2.3 LAC 患者1年病死情况

不同临床分期、分化程度、淋巴结转移情况、EGFR基因突变、ROS1、ALKmRNA 表达患者1年病死率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

表3 LAC 患者1年病死情况［n（%）］Table 3 One year mortality of LAC patients［n（%）］

2.4 LAC 患者1年病死情况Cox 回归分析

纳入Cox 回归分析，调整其他混杂因素后，临床分期、分化程度、淋巴结转移及EGFR基因突变、ROS1、ALKmRNA 表达均为LAC 患者1年病死的危险因素（P<0.05）。见表4。

表4 LAC 患者1年病死情况Cox 回归分析Table 4 Cox regression analysis of 1⁃year mortality of LAC patients

2.5 生存曲线

K⁃M 曲线分析，EGFR基因突变、ROS1、ALKmRNA 阳性表达患者1年病死率高于阴性表达患者，差异有统计学意义（χ2=28.557、23.340、12.793，P<0.05）。见图1。

图1 生存曲线Figure 1 Survival curve

3 讨论

EGFR为跨膜受体酪氨酸激酶，主要存在于基质细胞、表皮细胞及部分平滑肌细胞内，可通过磷酸化调控癌细胞增殖及生长相关信号传导。国外相关研究指出［7］，在亚裔人群不吸烟LAC 患者中EGFR突变比例约达60.0%。国内学者白冬雨等［8］研究也证实，EGFR突变在腺癌人群中发生频率较高。本研究结果提示EGFR基因突变可能参与LAC 发生、发展。本研究还发现，随临床分期增加、分化程度下降、淋巴结转移，LAC 患者出现EGFR基因突变现象，结合蒋萱等［9］研究考虑可能为EGFR基因突变一方面可促使EGR⁃TKI 结构域沉积，选择性刺激下游Janus 激酶信号转导子与转录激活子和磷脂酰肌醇⁃3⁃激酶/丝氨酸⁃苏氨酸蛋白激酶信号转导通路，增加EGFR表达，异常增殖癌细胞，抑制癌细胞凋亡；进一步经Cox 回归分析表明EGFR基因突变可对LAC 生存状况产生显著影响。建议临床根据EGFR基因突变选取适宜靶向药物治疗，以阻断癌细胞增殖，提高LAC 患者生存率。

ALK现已被证实是肺癌形成与发展中至关重要的通路，相关报道指出，ALK阳性率约占非小细胞肺癌的3.0%～7.0%［10］。ROS1属酪氨酸激酶胰岛素受体基因，代表一类新的非小细胞肺癌分子亚型，其发生频率相较于EGFR突变、ALK重排变异更低，约为1.0%～2.0%［11］。本研究结果与刘光峨等［12］研究结果相似。本研究还分别分析了ROS1、ALKmRNA 在LAC 不同病理特征中的表达，数据表明，ROS1、ALKmRNA 阳性表达可能增加LAC患者临床分期，诱导癌组织分化，促使淋巴结转移，这可能与ROS1、ALKmRNA 阳性表达激活多条下游信号传导通路、调控肿瘤细胞增殖与分化有关。由此可见，ROS1、ALKmRNA 表达可能在LAC 病理进展中发挥重要作用。但Zhang Q 等［13］观点认为，ROS1融合在年轻、永不吸烟的非小细胞肺癌患者中更为普遍，与本研究结果存在一定差异，可能与纳入样本量、选取年龄段、肺癌类型不同等因素有关。进一步经K⁃M 曲线分析可知，EGFR、ROS1、ALKmRNA 阳性表达LAC 患者1年病死率均高于阴性表达患者，有力佐证了EGFR、ROS1、ALKmRNA 可为临床评估LAC 预后提供有效指标，建议临床对LAC 组织进行EGFR、ROS1、ALKmRNA联合检测，进而为临床靶向用药提供更多选择。

综上可知，LAC 患者EGFR基因突变、ROS1、ALKmRNA 阳性表达人群具有不同病理特征，检测上述指标，可为分析临床病理特征、寻找靶向用药合适人群、改善预后提供科学指导。