急性脑梗死患者外周血miR⁃132、血清Ang⁃1相关性及预后

马翠娟

作者单位：河南省职工医院老年科河南，郑州450000

急性脑梗死以脑部供血动脉血栓栓塞或血栓形成引起的血管腔堵塞、脑组织缺血缺氧为特征，具有致死率高、致残率高的特点［1⁃2］。在临床实践中，早期判断急性脑梗死患者的预后情况、及时发现可能出现预后不良的患者并进行干预，对改善患者的预后具有积极意义。微小RNA（microRNA，miR）是近些年心脑血管疾病研究的热点，miR 通过在转录后水平调节多种基因的表达来介导相应的生物学效应，受到miR 调控的凋亡、自噬、炎症、血管新生等环节均与急性脑梗死的发生、预后密切相关。国内陈澎的动物实验研究发现，局灶性脑缺血大鼠脑组织中miR⁃132 的表达减少，而过表达miR⁃132 能够改善脑缺血大鼠的组织缺氧状态神经功能并增加血管生成素⁃1（Angiopoietin⁃1，Ang⁃1）表达、促进缺血脑组织血管新生［3］；另有一项国内的临床研究发现，血清Ang⁃1 含量降低是急性脑梗死患者预后不良的可能影响因素［4］。但miR⁃132 在急性脑梗死发病过程中的变化及其对预后的预测价值尚不清楚。因此，本研究将观察外周血miR⁃132 表达与血管新生分子Ang⁃1 及90 d 预后的相关性。

1 对象与方法

1.1 对象

选择2018年1月至2019年12月期间在本院诊断为的80 例急性脑梗死患者作为实验组，其中男性48 例、女性32 例，平均年龄（61.83±11.37）岁；另取同期体检的80 例健康者作为对照组，其中男性45 例、女性35 例，平均年龄（59.37±12.42）岁。两组间一般资料的比较，差异无统计学意义（P>0.05）。所有患者及家属均知情同意。本研究经医院伦理委员会批准。

入组标准：①符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2014》中急性脑梗死的诊断标准［5］；②起病时间<4.5 h、接受溶栓治疗；③临床资料完整；④出院后90 d 进行门诊复诊。排除标准：①既往有脑卒中、心肌梗死等病史；②既往有颅脑外伤、脑肿瘤病史；③合并恶性肿瘤、精神性疾病。

1.2 外周血miR⁃132 表达水平的检测

在血常规采血管内采集实验组患者入院后的外周血3 mL 及对照组受试者体检时的外周血3 mL，采用北京博凌科为公司的试剂盒进行miR⁃132 的检测。配置如下反应体系：c DNA 样本1 μL、PCR混合液10 μL、10 μmol/L 上下游引物各0.4 μL、去离子水补足至20 μL，引物分别为目的基因miR⁃132 的特异性引物及内参U6 的特异性引物。在荧光定量PCR 仪上按照94℃预变性2～3 min 后94℃15 s、60℃40 s 重复40 个循环的程序完成PCR 反应，生成反应的循环曲线及循环阈值（Ct），以U6 为内参，计算miR⁃132 的表达水平。

1.3 血清Ang⁃1 含量的检测

采集实验组患者入院后的外周血5 mL 及对照组受试者体检时的外周血5 mL，采用上海西唐公司生产的酶联免疫吸附法试剂盒进行检测，按照试剂盒说明书操作并检测血清中Ang⁃1 的含量。

1.4 临床资料

收集实验组以下临床特征：性别、年龄、高血压病、冠心病、糖尿病、超敏C 反应蛋白（High sen⁃sitivity C⁃reactive protein，hs⁃CRP）、同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）、总胆固醇（Total cholesterol，TC）、低密度总蛋白胆固醇（Low density total pro⁃tein cholesterol，LDL⁃C）、高密度脂蛋白胆固醇（High density total protein cholesterol，HDL⁃C）、随机血糖、入院时NIHSS 评分、发病到入院时间。

1.5 90 d 预后的随访及评估

急性脑梗死患者出院后90 天时进行门诊复诊，参照《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2014》［5］采用改良Rankin 量表（modified Rankun scale，mRS）对患者的神经功能进行评价并判断预后，mRS≤2 分为预后良好、mRS>2 分为预后不良。

1.6 统计学方法

采用SPSS 21.0进行数据统计，计量资料用（）表示、两组间比较采用独立样本t检验，计数资料采用n（%）表示、用χ2检验，miR⁃132 及Ang⁃1 对预后的预测价值采用ROC 曲线分析，预后的影响因素采用logistics 回归分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组miR⁃132 表达水平及Ang⁃1 含量的比较

与对照组比较，实验组外周血miR⁃132 的表达水平、血清Ang⁃1 的含量明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 两组miR⁃132 表达及Ang⁃1 含量比较（±s）Table 1 Comparison of miR⁃132 expression and Ang⁃1 content between 2 groups（±s）

表1 两组miR⁃132 表达及Ang⁃1 含量比较（±s）Table 1 Comparison of miR⁃132 expression and Ang⁃1 content between 2 groups（±s）

组别实验组对照组t 值P 值n 80 80 miR⁃132 0.74±0.23 1.00±0.28 6.418 0.000 Ang⁃1（ng/mL）1.01±0.27 1.39±0.32 8.118 0.000

2.2 实验组miR⁃132 表达及Ang⁃1 含量的相关性

急性脑梗死组患者外周血miR⁃132 表达水平血清Ang⁃1 含量呈正相关（r=0.502、P<0.05）。

2.3 不同预后患者miR⁃132表达及Ang⁃1含量的比较

与预后良好患者比较，预后不良患者外周血miR⁃132 的表达水平、血清Ang⁃1 的含量明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2 不同预后患者miR⁃132 及Ang⁃1 的比较（±s）Table 2 Comparison of miR⁃132 expression and Ang⁃1 content in patients with different prognosis（±s）

表2 不同预后患者miR⁃132 及Ang⁃1 的比较（±s）Table 2 Comparison of miR⁃132 expression and Ang⁃1 content in patients with different prognosis（±s）

预后情况预后良好组预后不良组t 值P 值n 46 34 miR⁃132 1.12±0.28 0.85±0.16 5.042 0.000 Ang⁃1 0.78±0.25 0.68±0.18 2.041 0.045

2.4 miR⁃132 表达及Ang⁃1 含量对急性脑梗死患者预后的预测价值

绘制miR⁃132 表达及Ang⁃1 含量预测急性脑梗死患者预后的ROC 曲线，曲线下面积分别为0.818（95%CI：0.726～0.910、P<0.001）、0.619（95%CI：0.496～0.742、P=0.070）。最佳截断值为0.94，该截断值预测预后的灵敏度和特异性分别为85.29%、69.57%。见图1。

2.5 不同预后患者临床特征的比较

不同预后患者在性别、年龄、高血压病、冠心病、糖尿病、TC、LDL⁃C、HDL⁃C、随机血糖比较，差异无统计学意义（P>0.05）；与预后良好患者比较，预后不良患者入院时NIHSS 评分、Hcy、hs⁃CRP 水平明显升高，发病到入院时间明显延长，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

表3 不同预后患者临床特征的比较［n（%），（±s）］Table 3 Comparison of clinical characteristics of patients with different prognosis［n（%），（±s）］

表3 不同预后患者临床特征的比较［n（%），（±s）］Table 3 Comparison of clinical characteristics of patients with different prognosis［n（%），（±s）］

因素性别（男/女）年龄（岁）高血压病冠心病糖尿病发病到入院时间（h）入院时NIHSS 评分TC（mmol/L）LDLC（mmol/L）HDLC（mmol/L）随机血糖（mmol/L）Hcy（μmol/L）hs⁃CRP（mg/L）预后良好患组者（n=46）27/19 60.27±12.09 21（45.65）2（4.35）12（26.09）3.85±0.94 4.51±0.93 3.94±0.94 2.74±0.71 1.08±0.22 6.93±1.32 11.45±2.14 6.67±1.05预后不良患组者（n=34）21/13 62.44±10.84 18（52.94）3（8.82）10（29.41）4.23±0.78 7.97±1.42 4.21±1.05 3.03±0.82 1.01±0.25 7.61±1.94 17.94±4.09 10.77±2.46 χ2/t 值0.077 0.803 0.416 0.668 0.108 2.321 13.157 1.208 1.691 1.327 1.866 9.204 10.140 P 值0.782 0.425 0.519 0.414 0.742 0.023 0.000 0.231 0.095 0.188 0.066 0.000 0.000

图1 miR⁃132、Ang⁃1 表达预测急性脑梗死患者预后的ROC 曲线

Figure 1 ROC curve of miR⁃132、Ang⁃1 expression in predicting prognosis of patients with acute cerebral infarction

2.6 急性脑梗死患者预后影响因素的logistics 回归分析

以急性脑梗死患者预后情况作为因变量，以2.3 和2.5 中有统计学差异的因素作为自变量，在Logistics 回归模型中进行分析可知：miR⁃132、Ang⁃1、入院时NIHSS 评分是脑梗死组患者预后不良的影响因素。见表4。

表4 急性脑梗死患者预后影响因素的logistics 回归分析Table 4 Logistic regression analysis of prognostic factors in patients with acute cerebral infarction

3 讨论

溶栓是临床上治疗急性脑梗死的有效手段之一，能够及时恢复缺血脑组织的血流灌注、减轻神经功能缺血缺氧损害［6⁃7］。在临床实践中，早期筛选可能出现预后不良的急性脑梗死患者并尽早开始进行干预，对促进神经功能重建、改善预后具有积极意义。

miR⁃132 促进血管新生的效应涉及复杂的分子机制，国内陈澎［3］的动物实验发现，过表达miR⁃132通过Ang⁃1/Tie⁃2 途径促进缺血脑组织周围的血管新生。Ang⁃1 是一类分泌型细胞因子，在血管内皮细胞增殖、成熟中起重要作用，与受体Tie⁃2 结合后能够促进新生血管形成、成熟及重塑。国内闫薪［4］的临床研究及本研究的检测均发现急性脑梗死患者血清Ang⁃1 含量明显降低，同时闫薪的研究还证实Ang⁃1 含量降低与急性脑梗死的病情加重有关。本研究结果提示在急性脑梗死的发病过程中，miR⁃132 表达降低可能使Ang⁃1 含量减少、削弱Ang⁃1 介导的促血管新生效应，进而不利于血管新生对神经功能的修复和重建、影响患者的预后。

国内多项关于急性脑梗死患者预后的研究均以出院后90 d 作为评估预后的时间点，在翟萌萌［8］、郭志良［9］、闫薪如［10］的临床研究中，急性脑梗死预后不良的发生率分别为36.48%、51.43%、41.41%。本研究对急性脑梗死患者的90d 预后进行了随访，其中预后不良利患者34 例、发生率42.5%，与国内几项研究基本一致。本研究结果提示miR⁃132 表达降低、Ang⁃1 含量减少可能与急性脑梗死患者预后不良有关。进一步经ROC 曲线分析miR⁃221、Ang⁃1对预后的预测价值发现：miR⁃132 对急性脑梗死患者的90 d 预后具有预测价值，但Ang⁃1 却不能直接预测90 d 预后，可能原因是miR⁃132 不仅通过Ang⁃1发挥神经保护作用，还能通过促进VEGF 途径、抑制细胞凋亡途径、减轻氧化应激等方式来减轻神经功能损害、改善患者预后［11⁃13］，但miR⁃132 发挥神经保护作用的其他方式仍有待今后的研究来证实。

急性脑梗死患者预后的影响因素复杂，国内多项关于急性脑梗死预后影响因素的研究发现，入院时NIHSS 评分增加、Ang⁃1 减少与急性脑梗死预后不良的发生有关［8⁃9］。本研究结果提示尽早进行溶栓、再通血管的重要性；miR⁃132、Ang⁃1 与急性脑梗死患者预后不良相关的结果与miR⁃132、Ang⁃1 介导的血管新生效应、神经保护效应吻合。

综上所述，急性脑梗死患者外周血miR⁃132 表达降低、Ang⁃1 含量减少且存在正相关；miR⁃132 的低表达可能引起血管新生不足，并且miR⁃132 是90 d 预后的影响因素、对预后不良具有预测价值。但miR⁃132 是否还通过其他机制影响急性脑梗死患者的预后需要今后进一步的研究来证实。此外，本研究未纳入未接受溶栓治疗的脑梗死患者，存在一定不足，在今后应纳入未接受溶栓治疗的脑梗死患者来探究miR⁃132、Ang⁃1 对脑梗死预后的评估价值。