E6/E7mRNA+TCT检测对宫颈癌诊断符合率的影响

刘 超

(焦作市第二人民医院，河南 焦作 454000)

宫颈癌(Cervical cancer，CC)是临床常见女性恶性肿瘤疾病，多发于30～55岁群体，但近年其发病有年轻化趋势，严重危害女性健康[1]。目前CC尚无特异性治疗手段，早期诊断、早期治疗是改善患者预后的关键环节。液基薄层细胞检测(TCT检测)是临床诊断CC常用方法，其操作简便，但检测结果易受取材、检测者主观因素影响[2]。近年相关研究指出，E6mRNA、E7mRNA是HPV主要致癌基因，通过检测其表达水平对评价CC发病风险、恶性程度具有重要价值[3]。但任何检测方法单一应用均存在敏感性低或特异性差等弊端，本研究旨在通过受试者工作特征曲线(ROC)分析E6/E7mRNA、TCT检测联合检测CC的价值，为临床完善检测方案提供参考。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年4月～2020年8月焦作市第二人民医院CC患者69例作为观察组，同期单纯HPV感染患者93例作为对照组。观察组年龄23～56岁，平均(39.46±6.44)岁，孕次0～4次，平均(1.96±0.33)次，产次0～3次，平均(1.51±0.22)次。对照组年龄22～58岁，平均(40.38±5.91)岁，孕次0～5次，平均(2.02±0.31)次，产次0～3次，平均(1.49±0.21)次。两组年龄、孕次、产次基础资料均衡可比(P>0.05)。

纳入标准：均经病理诊断、实验室检测确诊为CC或单纯HPV感染；无子宫切除史或宫颈手术史；入组前3d内无性生活史及阴道冲洗操作；知情理解签署同意书。排除标准：妊娠期女性或近期有妊娠意愿者；阴道内放置药物者；无性生活史或性生活史不足1年者。

1.2 方法

TCT检测：以TCT专用取样刷取材，置入宫颈管内与鳞柱上皮交界部位经宫颈外口顺时针旋转动5周，取样刷置盛ThinPrep细胞保存液的取样瓶内，孝感奥华医疗科技有限公司AZP-B型自动液基薄层细胞制片机制作薄层涂片，固定，巴氏染色，参考TBS细胞分类标准进行分类，具体为NILM：未见上皮内瘤变(0级)；LSIL：低度鳞状上皮内病变(1级)；ASC-US：未明确意义的非典型鳞状上皮细胞(2级)；HSIL：高度鳞状上皮内病变(3级)；ASC-H：非典型鳞状上皮细胞不排除高度鳞状上皮病变(4级)；AGC：非典型性腺上皮细胞(5级)；SCC：鳞状细胞癌(6级)。

E6/E7mRNA检测：采取PCR反向点杂交技术，以3 000 r/min转速离心分离所取标本(离心半径10 cm)，舍上清液，加2 mL蒸馏水清洗，加细胞裂解液，以1∶800比例混合溶解液、蛋白酶；水浴30 min(65℃)获取裂解液；加2.5 mol/L氢氧化钠溶液，水浴30 min(55℃)，加终止液。杂交捕获E6/E7mRNA，信号放大，发光反应，Quanti VirusTM冷光仪测E6/E7mRNA表达量。

1.3 观察指标

对比两组E6/E7mRNA表达量、TCT检测分级。对比不同CC分期患者E6/E7mRNA表达量。分析E6/E7mRNA表达量与CC分期间关系。分析E6/E7mRNA表达量、TCT检测单独与联合诊断CC的价值。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 对比两组E6/E7mRNA表达量、TCT检测分级(见表1)

表1 对比两组E6/E7mRNA表达量、TCT检测分级

2.2 分析E6/E7mRNA表达量与CC分期间关系

经Spearman秩相关系数分析，E6/E7mRNA表达量与CC分期间呈正相关(r=0.60，P<0.05)。

2.3 对比不同CC分期患者E6/E7mRNA表达量(见表2)

表2 对比不同CC分期患者E6/E7mRNA表达量

2.4 分析E6/E7mRNA表达量、TCT检测单独与联合诊断CC的价值

根据E6/E7mRNA表达量、TCT检测分级绘制诊断CC的ROC，得到AUC值分别为0.736、0.682；采用Logistic二元回归模型对E6/E7mRNA表达量、TCT检测分级进行拟合，返回预测概率logit(p)作为独立检验变量，得到联合诊断CC的AUC值为0.844。见表3。

表3 E6/E7mRNA表达量、TCT检测单独与联合诊断CC的价值

3 讨论

病理活检属当前诊断CC的“金标准”，但操作复杂，而TCT检测尽管可直接观察宫颈细胞形态学以判定病变类型，但受主观因素影响较大[2-4]。HPV持续性感染是CC发病的首要病因，其中E6/E7mRNA在CC发生发展中发挥重要作用[2，3]。本研究发现，CC患者E6/E7mRNA表达量、TCT检测分级高于单纯HPV感染患者(P<0.05)，说明E6/E7mRNA表达量与TCT检测分级在CC病变变化规律相似，或可为临床早期诊断CC提供参考。本研究还对不同CC分期患者E6/E7mRNA表达量检测发现，随CC分期升高，E6/E7mRNA表达量呈升高趋势，分析主要是因E6/E7mRNA转录蛋白与多种蛋白质结合可诱导机体细胞凋亡并改变DNA表达途径增加恶变风险，而E6/E7mRNA表达量越高此种恶变风险越高，同时意味着CC病情可能越严重。进一步Spearman秩相关系数分析显示，E6/E7mRNA表达量与CC分期间呈正相关(P<0.05)，证实E6/E7mRNA表达量与CC进展关系密切，可作为临床诊断、病情评价的工具。但有研究显示，E6/E7mRNA检测诊断CC的敏感度、特异度尚不足80%，尤其是早期癌变患者易漏诊[2，3]。本研究经ROC分析显示，E6/E7mRNA+TCT检测诊断CC的AUC值为0.844，大于二者任一方法单独诊断，对应敏感度为92.76%，特异度为88.54，说明联合方案可提高对CC的诊断价值。

综上可知，E6/E7mRNA+TCT检测在CC诊断中具有较高价值，可为临床诊断、完善治疗方案提供参考。