趋化因子RANTES和MCP-1在不明原因复发性流产早期诊断中的作用*

陈慧， 陈虹， 吴儒佳

(贵州医科大学附属医院 妇产科， 贵州 贵阳 550004)

复发性流产(recurrent spontaneous abortion，RSA)是指夫妻因各种原因多次发生的自然流产，其原因主要包括遗传因素、解剖因素、内分泌因素、感染因素、免疫功能异常、血栓前状态、孕妇的全身性疾病及环境因素等[1-2]。RSA中50%的患者原因不明，称为不明原因RSA(unexplained RSA，URSA)，其具体发病机制尚不清楚，严重影响育龄期妇女的生殖健康，临床治疗存在很大难度[3]。趋化因子(chemokines，CK)是一组小分子蛋白，能趋化白细胞至病原体入侵部位起到一定的免疫作用，参与人体炎症反应和传输[4]。母胎界面CK及其受体的表达和相互作用，对于人类早期妊娠的建立及维持发挥着极其重要的作用[5]。有研究发现，T细胞活化后表达和分泌的调节蛋白(regulated upon activation nomal T cell expressed and secred ,RANTES)在正常妊娠时作为必不可少的调节者，参与协调胚胎作为异性抗原引起的特异性的T细胞反应[6]；单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1，MCP-1)可趋化巨噬细胞，对胎儿起着一定保护作用[4]。这两种CK浓度对胚胎植入的调控可能起着重要作用，其水平变化可能导致流产发生，也可能成为URSA 患者早期诊断及主动免疫治疗效评价的标志[7-9]。因此寻找有价值的指标来预测RSA，为早期诊断和治疗胚胎发育不良提供帮助，成为广泛关注的问题。本研究拟通过检测URSA患者、正常早孕女性及健康未孕女性血清中RANTES及MCP-1的水平，对URSA的早期诊断进行探讨。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2016年6月—2019年1月收治的URSA患者50例作为URSA组，符合：生殖器官检查无异常；弓形虫(toxoplasma)、风疹病毒(rubella)、巨细胞病毒(cytomegalovirus)、单纯疱疹病毒(herpes simplex virus)及细小病毒B19等其他病原微生物(others)无异常；性激素6项(卵泡生成素、促黄体生成素、垂体泌乳素、雌二醇、孕酮及睾酮)、甲状腺功能 [三碘甲状腺原氨酸(triiodothyronine，T3)、四碘甲状腺原氨酸(tetraiodothyronine，T4)、促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone，TSH)]及凝血功能正常；抗精子抗体、抗心磷脂抗体、抗核抗体、狼疮抗凝物抗体及夫妻双方染色体核型正常；配偶精液检查无异常；无自身免疫性疾病；无长期服用化疗及免疫抑制剂。选择同期因正常早孕行人工流产和健康未孕妇女各25例，分别作为正常早孕组和健康未孕组，正常早孕组受检者要求有正常妊娠史，无自然流产及死胎死产史，无生殖器官异常、感染、内分泌及自身免疫性疾病病史，B超提示胚胎发育正常，无腹痛及阴道流血等先兆流产的症状和体征；健康未孕组受检者要求有正常妊娠史，无自然流产及死胎死产史，无生殖器官异常、感染、内分泌及自身免疫性疾病病史。URSA组受检者年龄24～37岁、平均(29.2±3.5)岁，平均停经时间(57.91±4.93)d，自然流产2～5次，流产次数2次31例、3次及以上19例；正常早孕组受检者年龄24～36岁、平均(28.9±2.9)岁，平均停经时间(56.87±4.45)d；健康未孕组受检者年龄23～36岁、平均(28.1±3.8)岁，3组受检者其它一般临床资料见表1，本研究是在受检者知情同意下进行。

1.2 方法

1.2.1RANTES和MCP-1水平的检测 抽取3组受检者清晨空腹静脉血5 mL至无菌试管，1 500 r/min离心20 min，取上层血清置于-80 ℃ BDF-86V158冰箱(济南好来宝医疗器材有限公司)冻存待测，采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA)法对血清中RANTES和MCP-1水平进行测定(试剂盒购自美国R﹠D公司)。实验步骤严格按说明书操作：稀释血清，标准品液配置，加样，DHP-9602电热恒温培养箱37 ℃温育(武汉一恒苏净科学仪器有限公司)，洗板，680iMark全自动酶标仪测吸光值(美国biorad公司)，操作为一次检测，以减少批间误差和操作误差。以吸光值为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，计算出相应浓度。

1.2.2一般临床资料收集 收集3组受检者的年龄、体质量指数(body mass index，BMI)、吸烟史和饮酒史、孕次、孕周及流产次数等。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 一般临床资料

URSA组受检者BMI分别较正常早孕组和健康未孕组升高，差异均有统计学意义(P<0.01)，但正常早孕组与健康未孕组比较、差异无统计学意义(P>0.05)；3组受检者平均年龄、平均孕次、吸烟史及饮酒史比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 各组受检者一般临床资料

2.2 血清RANTES和MCP-1含量

URSA组受检者血清RANTES 和MCP-1水平分别较正常早孕组和健康未孕组降低，差异均有统计学意义(P<0.01)，但正常早孕组与健康未孕组受检者比较、差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 各组受检者血清RANTES和MCP-1水平

2.3 URSA组受检者流产次数、孕周与RANTES及MCP-1水平的关系

随流产次数增多，URSA组受检者血清中RANTES和MCP-1水平逐渐降低，差异有统计学意义(P<0.05)，但不同孕周受检者血清RANTES及MCP-1比较、差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 URSA组受检者流产次数、孕周与血清RANTES、MCP-1的关系

2.4 URSA组受检者BMI与RANTES及MCP-1的相关性

Pearson相关分析显示，URSA组受检者BMI与血清RANTES无相关性(r=0.191，P=0.184)、BMI与血清MCP-1水平也无相关性(r=-0.012，P=0.933)。

3 讨论

妊娠是一种特殊的、成功的“同种异体移植”，胚胎能被母体接纳并存活，说明母胎之间存在一定的免疫耐受，而URSA常被认为与母胎免疫耐受失衡有关，但作用机制尚不清楚[10]。CK在母-胎界面特殊免疫微环境的形成过程中发挥重要作用，据前2个半胱氨酸所在位置，CK可分为4个亚族，即CC家族(CCL1～CCL28)、CXC家族(CXCL1～CXCL17)、CX3C家族(CX3CL1)及C家族(XCL1和XCL2)[4]。RANTES及MCP-1均属于CC家族成员，在胚胎成功种植和胎盘形成的早期过程中发挥着至关重要的作用，均可参与调控单核、巨噬细胞的趋化和激活，其功能紊乱可导致早期流产和胎盘形成异常或早产[11-12]。

有研究显示，URSA患者血清中的RANTES显著降低，用父系的粒细胞主动免疫治疗以后，RANTES水平可升高，约有80%再次妊娠成功[19]，故认为RANTES可抑制母体对胚胎的免疫排斥作用。研究还发现，URSA组患者主动免疫治疗前血清中RANTES、MCP-1及白细胞介素-8(interleukin-8，IL-8)水平明显低于正常非孕组和正常妊娠组，经主动免疫治疗后血清中3种CK水平均上升，尤其是持续妊娠组上升显著，提示RANTES及MCP-1具有保护性免疫抑制作用[16]。MCP-1和RANTES也可在母胎界面表达，二者在绒毛及蜕膜异常表达与流产有关[17]，但绒毛或蜕膜活检是一种侵入性方法，可能导致流产或胚胎损伤[20]。本研究中URSA组受检者血清的RANTES 及MCP-1值较正常早孕组及健康未孕组降低，早孕期测定孕妇血清中RANRES及MCP-1的水平更为安全、无创，因此二者可能成为URSA患者早期诊断及判断免疫治疗疗效的2个观察指标。

对于URSA患者，预测早期胚胎丢失的指标很多，单个指标常不能作出准确判断，临床工作中，需结合患者的症状、血液学指标以及超声检查，及时发现发育不良的胚胎，并给予有效的临床干预措施，可大大改善患者的妊娠结局[26]。本研究表明RANTES和MCP-1的异常表达与URSA的发生密切相关，早孕妇女血清中RANTES及MCP-1的水平变化可能成为URSA早期预测胚胎发育情况及妊娠结局的临床观察指标，但仍需进一步深入进行多中心、大样本、随机的临床研究。