循环miRNA-21、IL-6与BNP检测心力衰竭的应用价值＊

陈日锦 何就明 何小洪 杜广胜 江玲 冯志涛 王晓玉

心力衰竭（heart failure，HF）是多种心血管疾病的终末阶段，5年存活率和恶性肿瘤相仿，约为50%[1]。其本质是一种分子-临床综合征，基因表达调控异常与心衰的发病机制密切相关[2]。基于心衰发病的复杂性，临床上趋向于联合应用多种生物标志物以提高心衰临床诊断与鉴别诊断、疗效评估、危险分层及预后评估的特异性及敏感性[3]。本研究旨在通过测定循环miRNA-21、IL-6、B型脑钠肽（BNP）的水平变化情况，以阐明联合检测循环miRNA-21、IL-6、BNP对慢性心力衰患者的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年11月-2020年12月在本院心内科住院的HF患者54例为观察组，依据心功能等级分为A组（NYHAⅡ级，20例）、B组（NYHAⅢ级，18例）和C组（NYHAⅣ级，16例）；选取本院体检中心体检无HF者30例为对照组。纳入标准：（1）观察组符合文献[4]《中国心力衰竭诊断和治疗指南2018》心衰诊断标准；（2）观察组慢性心衰病史大于6个月；（3）年龄30～80岁；（4）观察组NYHA分级Ⅱ～Ⅳ级；（5）观察组左室射血分数（LVEF）＜50%。排除标准：（1）严重肝肾功能障碍或恶性肿瘤；（2）急、慢性感染性疾病；（3）血液系统疾病；（4）慢性阻塞性肺疾病及全身免疫性疾病等。A组男11例，女9例；年龄46～72岁，平均（62.00±12.66）岁；合并高血压9例，合并糖尿病6例；吸烟12例；低密度脂蛋白（2.77±0.29）mmol/L。B组男10例，女8例；年龄45～75岁，平均（62.78±11.17）岁；合并高血压8例，合并糖尿病5例；吸烟10例；低密度脂蛋白（2.81±0.33）mmol/L。C组男7例，女9例；年龄45～73岁，平均（68.00±8.03）岁；合并高血压6例，合并糖尿病7例；吸烟11例；低密度脂蛋白（2.74±0.23）mmol/L。对照组男16例，女14例；年龄43～74岁，平均（64.40±10.03）岁，合并高血压13例，合并糖尿病9例；吸烟16例；低密度脂蛋白（2.83±0.31）mmol/L。各组年龄、性别、高血压病史、糖尿病史、吸烟史、低密度脂蛋白比较差异无统计学意义（P＞0.05），有可比性。本研究经本院医学伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 炎症因子 所有研究对象均抽取清晨空腹静脉血6 ml，恒温箱温浴30 min，以3 000 r/min离心10 min，取上清液，置于-80 ℃冰箱保存待测。运用全自动生化免疫分析仪和试剂盒，采用放射免疫法分析测定BNP水平，采用双抗体夹心法原理测定IL-6水平。

1.2.2 实时荧光定量聚合酶链反应测定循环miRNA-21表达水平 采用ABI PRISM 7500 序列检测系统检测循环miRNA-21，qRT-PCR 反应条件：95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s；40个循环，组内重复3次取平均值。每个样本均检测3次。以Ct值表示循环miRNA表达水平。循环中循环miRNA-21的相对表达量采用2ΔΔCt法表示。

1.2.3 彩色多普勒超声诊断系统对所有受试者进行心脏B超检查，测定左室射血分数（LVEF）。

1.3 统计学处理

本研究数据采用SPSS 23.0统计学软件进行分析和处理，计量资料以（±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，相关性分析中，正态分布数据采用Pearson检验方法，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组循环miRNA-21、IL-6、BNP、LVEF水平比较

HF各组循环miRNA-21、IL-6、BNP水平均高于对照组，LVEF均低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；C组BNP、IL-6、循环miRNA-21水平显著高于A、B组（P＜0.05），LVEF 显著低于 A、B 组（P＜0.05），见表 1。

表1 各组循环miRNA－21、IL-6、BNP、LVEF水平比较 （±s）

表1 各组循环miRNA－21、IL-6、BNP、LVEF水平比较 （±s）

*与对照组比较，P＜0.05；#与C组比较，P＜0.001；△与B组比较，P＜0.001。

组别 循环miRNA-21 IL-6（ng/L） BNP（ng/ml） LVEF（%）A 组（n=20） 1.08±0.53*# 11.46±1.77*# 125.75±11.57*# 46.52±2.16*#B 组（n=18） 1.43±0.20*# 11.46±2.80*# 314.94±22.07*# 43.22±2.21*#C组（n=16） 2.04±0.32*△ 27.75±2.48*△ 556.68±126.63*△ 37.18±3.05*△对照组（n=30） 0.29±0.07 5.87±1.41 49.10±19.76 61.60±5.39 F值 27.964 252.823 167.421 63.618 P值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.2 血浆中循环miRNA-21、IL-6与BNP、LVEF的相关性分析

相关性分析发现，HF患者循环miRNA-21水平与BNP呈正相关（r=0.67，P＜0.01），与LVEF呈负相关（r=-0.61，P＜0.01）。IL-6与 BNP呈正相关（r=0.88，P＜0.01），与LVEF 呈负相关（r=-0.83，P＜0.01）。

3 讨论

心衰的发病率与年龄呈正相关，随着老龄的进展，心衰的发病率会进一步升高，有必要根据生物标志物对心衰进行早期诊断，预后评估并指导治疗[5]。目前已有多种与心衰密切相关的生物标志物如BNP、N端前脑钠肽（NT-proBNP）、超敏C反应蛋白、肌钙蛋白等在临床广泛应用[6]。然而这些标志物的诊断和预后价值也因疾病性质、年龄、遗传背景和生活方式等受到限制[7]。循环miRNA是一种高度保守的非编码小RNA，主要通过影响心肌细胞的能量代谢、心肌纤维化、心室重构、心肌细胞的自律性参与心力衰竭发生、发展的病理生理过程[8]。循环miRNA很稳定，不仅存在于细胞内，更可稳定存在于血液循环中，是理想的生物标志物[9]。大量研究表明，心脏和循环miRNA-21都与心肌纤维化程度有关[10]。在收缩期心衰时，循环miRNA-21抑制心脏成纤维细胞凋亡，导致心肌肥厚和纤维化。在有症状的心脏患者中，miRNA-21也被认为是一个潜在的重要预后生物标志物。Zhang等[11]研究表明循环miRNA-21与HF症状严重程度的相关性，随着NYHA等级的提高，循环外周静脉血循环miRNA-21和冠状静脉循环miRNA-21水平逐渐升高，血清循环miRNA-21具有成为心衰标志物的潜力。联合分析miRNA-21、galectin-3、NT-proBNP可提高循环miRNA-21表达对预测无症状T2DM患者急性HF发生价值[12]。Wang等[13]研究发现miRNA-21和Cys C的联合评估在老年2型心肾综合征患者中具有良好的临床价值。

目前指南推荐利钠肽用于心力衰竭筛查、诊断和鉴别诊断、病情严重程度及预后评估[14]。本研究结果发现，观察组血浆循环miRNA-21的水平明显高于对照组，且随着NYHA心功能分级而逐渐升高。再次验证循环miRNA-21与心力衰竭的相关性[15-16]。

IL-6主要来源于活化的单核巨噬细胞。IL-6可降低心肌收缩力，促进组织纤维化，同时可调节心肌肥厚。IL-6一定程度上反映心力衰竭严重程度，预测心血管事件的发生[17]。本研究结果表明：心衰患者IL-6水平与NYHA心功能分级呈正相关，可作为评价病情严重程度的指标之一。然而本次研究样本数有限，关于miRNA-21表达水平在慢性心力衰竭诊断价值仍需要进一步证实。

综上所述，本研究表明心衰患者的血浆中循环miRNA-21、IL-6与BNP呈正相关，与LVEF呈负相关。在临床上，可通过联合检测循环miRNA-21、BNP、IL-6等生物学标志物，提高对心衰的早期诊断价值。