XRCC2在结直肠癌中的表达及其临床意义

白 聪 ,董志敏

(1.大同市第三人民医院病理科,山西大同 037008;2.大同市第二人民医院病理科,山西大同037000)

近年来，结直肠癌（colorectal cancer）的发生率随着人们生活饮食习惯的改变而逐步呈攀升态势[1]。XRCC2(X 射线修复交叉互补蛋白2，X-Ray Repair Cross Complementing Protein 2)是一种蛋白，在同源重组修复过程中具有十分关键的作用，可在断裂的DNA 末端招募到Rad51，促使Rad51 提高，保持基因完整。作为同源重组修复（homology recombination,HR)最为主要的蛋白，Rad51 异常表达与结直肠癌进展具有密切的关系[2]。现阶段，虽然在人类诸多恶性肿瘤中发现CRCC2 表达异常，但是甚少报道结直肠癌组织中CRCC2 表达意义。本研究以300 例结直肠癌患者作为观察对象，重点分析了CRCC2 在结直肠癌中表达的意义，为临床预测、防治结直肠癌提供有效参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集201501-201912月大同市第三人民医院和大同市第二人民医院300例结直肠癌手术患者，包括171 例男性和129 例女性，年龄34～71 岁，中位年龄50 岁。纳入标准：经手术病理证实为结直肠癌；术前不曾接受过放化疗；均为原发性。排除合并其他恶性肿瘤、复发性结直肠癌、临床资料缺失不完整而影响统计的患者。

1.2 方法

检测癌组织、癌旁组织（距离癌组织边缘5 cm 以上的正常黏膜）的XRCC2水平。

1.2.1 qRT-PCR检测

切取60 mg 癌旁组织、60 mg 癌组织，逆转录酶催化之后生成cDNA，采用SYBR Green 法，制备标准曲线。PCR 扩增具体条件为：60 s、94 ℃，30 s、60 ℃，45 s、72 ℃为一个循环，共循环35个。

1.2.2 免疫组化染色

用4%多聚甲醛固定组织，石蜡包埋，然后切成4 μm 薄片。脱蜡、脱水处理后，将枸橼酸钠0.01 mol/L加入到沸水之中制成pH=6.0 的缓冲溶液，进行高压热修复，小火保持热度并继续维持10 min，给予抗原修复，孵育30 min，将内源性过氧化物酶封闭，0.5 h后将XRCC2抗体加入其中，在4 ℃环境下过夜，第2日置于37 ℃环境下持续复温60 min，取生物素化二抗加入，在37 ℃环境下持续孵育60 min，DAB 显示颜色之后，复染、分化。最后脱水、封片，进行显微镜下观察。

1.3 数据统计处理

利用SPSS22.0 软件对研究数据进行统计。用均数±标准差表达计量资料并用t 检验，方差分析多组数据；用例数或构成比(%)表达计数资料并用卡方检验。生存率计算方法以Kaplan-Meier 法为主。Logrank 检验影响生存率的单因素，多因素分析则采用Cox模型。检验水准α设置为0.05。

2 结果

2.1 结直肠癌XRCC2表达情况

qRT-PCR 检测提示XRCC2 在癌组织中的表达水平（1.7±0.3）显著高于 癌旁组织（0.5±0.1）（P=0.0001）；免疫组化染色提示69.67%（209/300）结直肠癌组织XRCC2 阳性，另30.33%（91/300）为结直肠癌组织XRCC2阴性。

2.2 结直肠癌病理特征与XRCC2表达的关系

XRCC2的表达与T分期、TNM分期、M分期、Duke’s分期、肿瘤大小、肝脏转移、淋巴结转移有关（P ＜0.05）；与患者年龄、性别、N分期无关（P ＞0.05）。见表1。

表1 结直肠癌病理特征与XRCC2表达的关系

2.3 结直肠癌预后与XRCC2表达的关系

XRCC2 阳性者无复发生存期(Recurrence-free survival,DFS)中位数38 月、总生存期(Overall survival,OS)中位数41月，显著短于XRCC2阴性者49月、55月（P ＜0.05）。Cox 多变量分析，结直肠癌预后因素与Duke’s 分期、XRCC2、淋巴结转移、年龄有关（P ＜0.05）。见表2。

表2 结直肠癌预后与XRCC2表达的关系

3 讨论

qRT-PCR 检测方法具有较高的灵敏度，以此来对比癌组织、癌旁组织中XRCC2表达水平，结果发现癌组织XRCC2 显著高于癌旁组织；与此同时进行免疫组化染色检查，发现癌组织XRCC2 阳性者占比69.67%。这说明XRCC2表达与结直肠癌的进展具有密切的关系[3]。现阶段，临床发现在多种恶性肿瘤中XRCC2 存在异常表达，比如胃癌、乳腺癌、大肠癌、胶质母细胞瘤、食管癌等[4]。究其原因，通过同源重组修复的XRCC2 参与DNA 断裂，保持基因完整，抑制癌灶形成。若XRCC2 表达缺失，将无法有效修复受损的DNA，进而导致染色体异变、畸形，降低细胞基因组的稳定性，最终诱发癌灶[5]。但是相关研究学者认为高水平的XRCC2可导致细胞增殖过度而引起癌灶[6]。现阶段，随着临床深入研究，发现癌灶的出现与癌细胞增殖失控有关之外，还与细胞调节紊乱、细胞凋亡有关[7]。这说明在肿瘤不断发展过程中，XRCC2调控机制十分复杂。

本研究还分析了XRCC2表达与结直肠癌病理的关系，结果XRCC2 表达与Duke’s 分期、TNM 分期、T分期、癌灶大小、M分期、肝脏转移、淋巴结转移相关，与性别、年龄、N 分期无关。除此之外，XRCC2 水平较低患者的无复发生存期、总生存期明显长于XRCC2 水平较高者，深入Cox 分析，结直肠癌预后因素与Duke’s分期、XRCC、淋巴结转移、年龄有关。可将XRCC2表达作为临床预判患者预后的主要指标。

总而言之，检测结直肠癌患者XRCC2表达水平，有助于临床准确评估结直肠癌患者预后，进而为临床有效治疗结直肠癌患者提供参考。