尼莫地平注射液（无乙醇型）血管刺激性研究

孙亚美 程晓波 侯继祥 张 丹 赵博册 林佳亮 李 炜 沈丽霞吴翠栓 张 强

1.北京德立福瑞医药科技有限公司，北京，102100，中国

2.河北北方学院，张家口，075000，中国

3.北京大学，北京，100000，中国

蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）是常见的脑血管疾病，属于神经科中常见的多发疾病之一［1-2］。SAH 病理生理学复杂，病情进展快，并发症多，临床转归复杂，死亡率高［3］。脑血管痉挛（cerebral vasospasm，CVS）是蛛网膜下腔出血的严重并发症之一［4-5］，也是SAH 致死、致残的主要病因［6-7］，所以防治CVS 是改善蛛网膜下腔出血预后的关键。

尼莫地平属于1，4-二氢吡啶类的钙离子拮抗剂［8］，能有效地预防和治疗蛛网膜下腔出血引起的CVS［9］，是SAH 缓解和预后的最佳药物之一［10］，在临床上被广泛应用并取得了良好的临床疗效［11］。尼莫地平注射液由德国拜耳公司率先研发成功，由于其注射剂型起效快，在临床上的应用更为广泛。但是现有市售尼莫地平注射液（尼膜同）存在一定的不足：处方中含有大量的乙醇作为助溶剂，乙醇直接入血管，会造成血管刺激性及注射疼痛，患者顺应性低［12-13］。另外，乙醇与头孢菌素类或硝基咪唑类等药物联用时会导致双硫仑样的不良反应［14］。所以研发无乙醇型的尼莫地平注射液临床意义重大。

本文通过自组装技术成功制备了不含乙醇的注射用尼莫地平注射液，为了评价尼莫地平注射液（无乙醇型）的安全性，对比研究了尼莫地平注射液（无乙醇型）和市售尼莫地平注射液对家兔的血管刺激性反应。

1 材料与方法

1.1 实验动物

24 只大耳家兔（SPF 级），体质量（2～3）kg，北京金牧阳实验动物养殖有限责任公司。

1.2 试剂与药物

供试品：尼莫地平注射液（无乙醇型），批号：2020121701，浓度：10 mg·mL-1，购自北京德立福瑞医药科技有限公司；供试品制剂配制：用100 mL 的5%葡萄糖注射液稀释混匀，稀释为0.2 mg·mL-1的浓度；对照品：市售尼莫地平注射液（商品名：尼膜同®，规格：50 mL·10 mg-1，产品批号：BXJC7A1，购自拜耳医药保健有限公司；对照品试剂配制：给药前将其用5%葡萄糖注射液稀释至尼莫地平浓度为0.2 mg·mL-1；阴性对照品：5%葡萄糖注射液，批号：E19040801，购自山东华鲁制药有限公司；空白制剂，批号：2020121601，购自北京德立福瑞医药科技有限公司。

1.3 实验方法

1.3.1 给药方案

将家兔随机分为4 组，每组6 只。四组分别为市售尼莫地平注射液组（A 组）、尼莫地平注射液（无乙醇型）组（B 组）、空白制剂组（C 组）和5%葡萄糖注射液组（D 组），具体见表Tab.1。

Tab.1 Experimental design of vascular irritation in rabbits

兔子体质量在2～3 kg 之间，分别用兔架固定，剪去耳缘的兔毛，酒精消毒，将市售尼莫地平注射液、本发明的尼莫地平注射液（无乙醇型）、空白制剂、5% 葡萄糖注射液分别通过耳缘静脉滴注对家兔给药，每只兔子均从右耳缘静脉缓慢注射给药。尼莫地平家兔给药剂量为0.47 mg·kg-1。每天给药1 次，连续给药7 天，每天给药前和最后一次给药后48 h，目测观察。在最后一次目测观察后将动物安乐死，剪取注射部位及附近处兔耳，HE 染色，进行局部组织病理学检查。

1.3.2 检测指标

1.3.2.1 目测观察指标 观察家兔状况是否良好、家兔耳缘静脉血管是否扩张、周围组织是否充血、水肿。

1.3.2.2 病理学观察指标 末次给药后48 h，剖检观察各组动物给药侧兔耳，血管壁是否红肿、变性、变黑，是否有血栓形成、管壁增生、炎症细胞浸润、内皮细胞变性坏死、周围组织水肿等病理改变。

按Tab.2 中所示的“血管剖检评分标准”对每只动物进行评分。

Tab.2 Vascular autopsy scoring criteria

将同组中的动物的评分求平均值，按照Tab.3 标准确定刺激等级。

Tab.3 Stimulus levels

2 结果

2.1 目测观察结果

实验期间，各组家兔饮食饮水，行为活动、体温、呼吸、皮毛、口、鼻、眼和粪便等一般状况良好，均未见异常。所有动物耳部于给药前未见明显异常。

2.2 组织病理学显微照片

组织病理学结果表明，市售尼莫地平注射液组（A组，Fig.2）动物全耳严重水肿，血管扩张，局部出血严重，表皮可见一处明显的化脓坏死灶，血管周疏松水肿的结缔组织间可见大量嗜中性粒细胞、淋巴细胞等炎性细胞浸润；尼莫地平注射液（无乙醇型）组（B 组，Fig.3）动物给药侧兔耳整体完好，只有少量的轻度充血和肿胀，未见其他明显异常。空白制剂组（C 组，Fig.4）动物给药侧兔耳少量充血，血管壁及管周轻微水肿；5%葡萄糖注射液组（D 组，Fig.5）的动物兔耳表皮完整，可见完好的毛囊及皮脂腺结构，5%葡萄糖注射液滴注给药对兔耳基本没有刺激性。

Fig.1 Normal rabbit ears

Fig.2 Nimodipine injection group

Fig.3 Nimodipine injection（ethanol-free type）group

Fig.4 Control group

Fig.5 5% glucose injection group

各组动物刺激等级结果见Tab.4。由结果可知，自制的不含乙醇的尼莫地平注射液对血管的刺激性显著小于市售含有乙醇的尼莫地平注射液，具有极为明显的优势，刺激性明显减小。

Tab.4 Vascular irritation results

4 讨论

血管刺激性试验是用于评估注射剂安全的重要指标。尼莫地平难溶于水，原研制剂（尼膜同®）处方中加入了大量具有毒副作用的助溶剂乙醇，临床应用过程出现较多的不良反应，患者顺应性差。乙醇直接入血管，会产生强烈的血管刺激及注射疼痛，且反复多次的注射其静脉炎发生率可达90%，同时还可引起不同程度的组织水肿［13］，进而导致患者顺应性低。乙醇入血管还会引起体内血清胱抑素C（serum cystatin C，Cys C）、高半胱氨酸（homocysteine，Hcy）和氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，ox-LDL）浓度增高，引发一系列心血管疾病［15］。乙醇与头孢菌素类和硝基咪唑类等药物联用时极可能导致双硫仑样不良反应的发生。乙醇对蛙心还具有负性肌力的作用［16］。此外，乙醇还可引起女性中枢神经递质异常释放，影响女性生殖、生育功能及其子代易发生先天畸形［17］。乙醇对人体的部分系统和器官也有一定的损害。而在本次动物实验结果中也清楚表明市售尼莫地平注射液有明显的血管刺激性反应，兔耳血管溃烂不堪。

尼莫地平注射液（无乙醇型）几乎没有血管刺激性，说明该制剂静脉注射安全性良好。与市售尼莫地平注射液相比，尼莫地平注射液（无乙醇型）去掉了处方中的乙醇可以减少血管刺激性，消除双硫仑不良反应的风险，提高患者的顺应性，可明显改善现有市售尼莫地平注射液临床应用中存在的乙醇带来的刺激性、过敏性等问题，可向患者提供一个安全、有效的尼莫地平新型制剂，更好地保障患者的用药权益。

动物实验结果清楚的表明含乙醇的尼莫地平注射液刺激性远远大于不含乙醇的尼莫地平注射液的刺激性，由此推广到现有市售含乙醇的注射液在临床应用上同样会出现类似的问题，所以开发对应的不含乙醇的制剂，逐步降低药源性不良反应的发生率，更好地保障患者的用药权益意义重大。无乙醇的创新制剂将会是未来发展的一个趋势。