宫内感染产妇血清及羊水Clara细胞蛋白16、肺表面活性蛋白A与新生儿肺损伤的关系

王芳芳，张 涛，王晓玲

宫内感染是造成新生儿早产、先天性疾病的重要原因，在宫内感染导致的新生儿损伤中以肺损伤最为常见[1-2]。新生儿肺损伤主要表现为肺功能不成熟、呼吸窘迫等，导致新生儿存活率下降。因此，防治宫内感染新生儿发生肺损伤是新生儿科的重点和难点，寻求便捷、敏感的指标预测新生儿肺损伤也是目前亟待解决的问题。新生儿肺损伤的主要病理机制是肺泡表面活性物质缺乏，造成肺泡萎缩，使新生儿无法正常呼吸，肺表面活性蛋白A(surfactant protein-A, SP-A)是诊断肺泡细胞功能不全的标志物，能够参与肺泡表面活性膜的形成和代谢[3]。Clara细胞蛋白16(Clara cell protein 16, CC16)是细支气管上皮Clara细胞分泌的特异性蛋白，是能够反映支气管上皮屏障损伤的炎性因子[4]。本研究观察宫内感染产妇血清及羊水CC16、SP-A水平，并分析二者与新生儿肺损伤的关系，具体内容报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年1月—2020年9月我院收治的136例宫内感染产妇及肺损伤新生儿作为研究组。①纳入标准：所有产妇符合宫内感染的诊断标准[5]，羊水病原体检测阳性，或病理证实绒毛膜羊膜炎；均符合新生儿肺损伤的诊断标准[6]，患儿呼吸困难，胸部X线提示双肺弥漫浸润影，氧合指数(PaO2/FiO2)<300 mmHg；产妇年龄20～45岁；单胎妊娠。②排除标准：产妇合并妊娠期高血压、糖尿病、肾病、心脏病等；新生儿先天性疾病、染色体异常、畸形、死胎等；新生儿中枢神经功能障碍，包括脑损伤、脑性瘫痪、脑发育不全等。另选取同期70例宫内感染产妇及未发生肺损伤的健康新生儿作为对照组。两组产妇及新生儿的一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。本研究获得医院医学伦理委员会批准，产妇及家属均知情同意。

表1 两组产妇及新生儿的一般资料比较

1.2方法

1.2.1CC16与SP-A检测：产妇在妊娠末期抽取外周血5 ml，3000 r/min离心取血清待检；同时行羊膜穿刺术，穿刺针经腹壁、子宫壁进入羊膜腔，抽取羊水20 ml进行检测。血清及羊水CC16、SP-A均采用酶联免疫吸附试验双抗体夹心法检测。试剂盒购自美国BioTek公司，检测仪器为BioTek 800TS酶标仪。检测步骤：①按试剂盒说明书将标准品稀释成不同的浓度200、100、50、25、12.5和6.25 ng/L；②设置标准孔6孔，分别加入不同浓度的标准品50 μl；③空白孔不加样本和酶标试剂；④样本孔中加入待测样本10 μl和稀释液40 μl(样本稀释5倍)；⑤37℃温育45 min，然后甩去孔内液体，每孔加入磷酸盐缓冲液振荡30 s，重复洗涤5次；⑥每孔加入50 μl酶标试剂，37℃温育45 min，每孔加入磷酸盐缓冲液振荡30 s，重复洗涤5次；⑦每孔加入显色剂A液和B液各50 μl，轻轻振荡混匀，37℃避光显色15 min；⑧每孔加入终止液50 μl，终止反应，此时蓝色立刻转为黄色；⑨对空白孔调零，在酶标仪450 nm波长处测定各孔的吸光度OD值。以OD值为纵坐标(Y)，标准品浓度为横坐标(X)，绘制标准曲线，将样品的OD值代入回归方程可得出样品浓度，再乘以稀释倍数(5倍)，即为样本的实际浓度。

1.2.2血气分析：抽取新生儿的动脉血进行床旁血气分析，检测动脉血氧分压(PaO2)、二氧化碳分压(PaCO2)、血氧饱和度(SaO2)和PaO2/FiO2。

2 结果

2.1产妇血清及羊水CC16、SP-A水平比较 研究组产妇的血清及羊水CC16、SP-A水平均低于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。见表2。

表2 两组产妇血清及羊水CC16、SP-A水平比较

2.2新生儿血气分析指标比较 研究组新生儿的动脉血PaO2、SaO2、PaO2/FiO2均低于对照组，且PaCO2高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。见表3。

表3 两组新生儿血气分析指标比较

2.3血清及羊水CC16、SP-A水平与新生儿PaO2/FiO2的相关性 宫内感染产妇血清及羊水CC16、SP-A水平与新生儿PaO2/FiO2均呈正相关(P<0.01)。见表4。

2.4ROC曲线分析 宫内感染产妇血清CC16预测新生儿肺损伤灵敏度、特异度、AUC分别为75.71%、64.71%、0.748，血清SP-A分别为80.00%、75.74%、0.854，羊水CC16分别为75.71%、71.32%、0.786，羊水SP-A分别为85.71%、78.68%、0.888。见表5，图1。

3 讨论

有研究文献报道，宫内感染是导致新生儿肺损伤的重要危险因素，80%以上的肺损伤新生儿存在宫内感染病史[7]。其致病原因可能为：①产妇感染B族溶血性链球菌，通过胎盘、羊水传播给胎儿，引起新生儿B族溶血性链球菌感染性肺炎[8-10]；②胎儿分娩时围产期感染，继发肺损伤[11]。目前相关研究发现，肺泡表面活性物质缺乏是新生儿肺损伤的主要病理机制，肺泡表面活性物质是Ⅱ型肺泡细胞分泌的一种脂蛋白，作用是降低肺泡表面张力，减小肺泡回缩力，维持肺泡容积的稳定，预防肺泡萎缩和肺不张[12-13]。另外，肺泡上皮损伤、毛细血管内皮损伤、肺泡炎症反应失控也是重要的病理机制[14-16]。

SP-A是一种肺泡表面活性物质，具有亲水性，SP-A减少可引起肺泡发育不全[17]。多项研究发现，急性肺损伤新生儿血清SP-A水平显著低于健康新生儿[18-19]。在呼吸过程中SP-A的密度随肺泡半径增大而减小，小肺泡的SP-A密度较大，其降低表面张力的作用越强；因此SP-A能维持大小不同肺泡的回缩平衡，若SP-A分泌较少，则增加了肺泡表面张力，使肺顺应性减小，肺泡扩张所需的呼吸做功增加[20]。另外，SP-A减少使得肺泡表面张力增加，肺毛细血管组织液容易跨膜向肺泡组织移动，造成肺泡组织液增多，引起肺水肿[21]。本研究结果发现，研究组产妇的血清及羊水SP-A水平均低于对照组，且与新生儿PaO2/FiO2呈正相关，这表示血清及羊水SP-A水平越低，患儿缺氧越严重；宫内感染产妇血清SP-A预测新生儿肺损伤的灵敏度为80.00%、特异度为75.74%、AUC为0.854，羊水SP-A分别为85.71%、78.68%、0.888，说明SP-A对新生儿肺损伤的预测价值较高。

CC16是细支气管上皮Clara细胞分泌的特异性蛋白，Clara细胞是呼吸道支气管中的一种无纤毛上皮分泌细胞。动物实验发现，CC16可以抑制磷脂酶A2活性，从而抑制支气管上皮的炎症反应，抑制炎性介质分泌，具有较好的抗炎作用[22-23]。还有相关研究发现，急性肺炎患者血清CC16水平显著上升，表明CC16与肺损伤密切相关[24-25]。本研究结果发现，研究组产妇的血清及羊水CC16水平均高于对照组，并且与新生儿PaO2/FiO2呈正相关。也有相似研究报道，CC16与宫内感染新生儿呼吸窘迫有密切关联，经过治疗后CC16水平及PaO2/FiO2均下降[26-27]。本研究结果还发现，宫内感染产妇血清CC16预测新生儿肺损伤的灵敏度为75.71%、特异度为64.71%、AUC为0.748，羊水CC16分别为75.71%、71.32%、0.786，说明CC16对新生儿肺损伤有一定的预测作用。不过血清与羊水CC16的预测价值均低于SP-A，推测可能为SP-A是直接反映肺泡功能的标志物，而CC16主要与气道炎症密切相关，与肺泡功能的关联性较弱。

综上所述，宫内感染产妇血清及羊水CC16、SP-A与新生儿肺损伤密切相关，或可作为预测宫内感染新生儿是否发生肺损伤的辅助指标。