青藤碱对荷前列腺癌裸鼠抗肿瘤作用的初步研究

唐炬光 赖小斌 朱志华 卢本铭 彭瑞英

摘要：目的：研究青藤碱对荷前列腺癌裸鼠抗肿瘤作用。方法：将荷PC3前列腺癌小鼠按照随机对照原则，为模型A组、青藤碱B组、雷帕霉素C组、青藤碱+1/2雷帕霉素D组，每组各15例裸鼠，一共4组。各组均采取腹腔注射给药。其中模型A组每天注射生理盐水0.2ml，青藤碱B组每天注射青藤碱40mg/kg，雷帕霉素C组每天注射雷帕霉素20 mg/kg，青藤碱+1/2雷帕霉素D组每天注射青藤碱40mg/kg和雷帕霉素10mg/kg。自给药日起，每隔2 d测定肿瘤体积1次，并观察每组小鼠的死亡情况并做记录。给药12天后，观察各组裸鼠精神状态、体重及肿瘤体积，处死裸鼠，取各组肿瘤组织，采取Western-blot法检测各组caspase-3，ELISA法检测IL-6、IL-8、TGF-β，采用流式细胞术检测各组Treg，HE染色法检测各组移植瘤的病理情况，留取各组裸鼠静脉血，不良反应发生率以检测各组肝肾功能情况表示。结果：D组对荷瘤裸鼠的肿瘤抑制作用优于A组、B组、C组（P<0.05）;D组对肿瘤的抑制率优于A、B、C组（P<0.05）。同时各组给药前后裸鼠的体质量并未出现明显的增加或减少，对裸鼠的肝脏也未见有明显的影响。与A组相比，B组、C组、D组均可抑制肿瘤体积的增长，降低肿瘤组织中VEGF的表达水平，D组对肿瘤抑制作用更佳，且未发现明显的毒性反应（P<0.05）;与A组相比，B组、C组、D组均可降低患者IL-6、IL-8、TGF-β水平，D组对降低IL-6、IL-8、TGF-β水平效果更佳（P<0.05）。结论：青藤碱可以提高抑瘤率，抑制肿瘤体积的增长，降低患者IL-6、IL-8、TGF-β水平，且未发现明显的毒性反应，具有较好的安全性。

关键词：青藤碱;荷前列腺癌;裸鼠;抗肿瘤

前列腺癌（Prostate cancer，PCa）是男性最常见的三大癌症之一，最新统计表明前列腺癌的发病率在中国65岁以上的男性中呈现快速增长的趋势[1]。虽然在前列腺癌的起病阶段可以通过手术、放疗、雄激素剥夺疗法（Androgen deprivation therapy，ADT）等进行成功治疗，但是几乎所有晚期前列腺癌患者最终都会进展为去势抵抗性前列腺癌（Castration resistant prostate cancer，CRPC），并对一线ADT和其他激素疗法产生内在或获得性抗性[2]。中医药在治疗西医认为的疑难杂症具备显著的有优势。尤其在肿瘤的防治上，更是积累了大量的临床经验，也取得了一系列的临床疗效，研究前景广阔。本研究结合青藤碱在多种肿瘤的防治效果研究，认为本研究设计方案合理，可行性大，为青藤碱在前列腺癌的防治上积累可靠的实验动物资料，同时也为中医药在肿瘤的防治上提供重要的实验动物参考依据。

1材料与方法

1.1 材料及试剂

人前列腺癌PC-3细胞株购自中国科学院细胞库。BALB/c裸鼠（SPF级），♂，体质量22～25 g，鼠龄4～6周（由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，浙江大学动物中心养殖，实验动物使用许可证：SYXK2012-0178）;血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）（150?L，谷歌生物公司，批号：GB11034）。

1.2 方法

PC3前列腺癌小鼠模型的建立常规培养PC3细胞，维持细胞处于对数生长期，调节活细胞浓度，使每只裸鼠分别接种2×106细胞，溶于150μLPBS和50μL基质胶，将肿瘤细胞注射于裸鼠腋窝皮下，注射后有鼓包出现且持续一段时间视为接种成功。1周后检查裸鼠是否成瘤。7天后出现肿瘤节点，建立DU145荷瘤裸鼠模型。共接种60只雄性裸鼠，每3天测量记录一次体重和肿瘤体积，实时观察生活状态。

1.3 观察指标

（1）给药12天后，比较不同给药组对荷瘤裸鼠的肿瘤抑制作用。

（2）给药12天后，观察各组裸鼠精神状态、体重及肿瘤体积，肿瘤体积=（肿瘤长径×肿瘤宽径2）/2，抑瘤率=（模型组平均瘤重-实验组平均瘤重）/模型组平均瘤重×100%。同时取裸鼠的肝脏进行称重，并将瘤块用甲醛固定，进一步进行免疫组化分析。

（3）留取各组裸鼠静脉血，不良反应发生率以检测各组肝腎功能情况表示。

1.4 统计学分析

采用SPSS23.0软件进行数据处理，计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用t检验;计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验，P<0.05，差异有统计学意义。

2结果

2.1 不同给药组对荷瘤裸鼠的肿瘤抑制作用

给药后各给药组对移植瘤体积的增长都有抑制作用。其中A组的抑制作用相对较差，肿瘤体积从（200.36±26.99）mm3增长到了（605.81±15.31）mm3，B组的肿瘤体积从（201.71±72.77）mm3增长到了（245.09±38.57）mm3，C组的肿瘤体积从（197.36±35.99）mm3增长到了（400.78±28.09）mm3，D组的肿瘤体积从（196.24±24.87）mm3增长到了（222.24±14.87）mm3，差异具有统计学意义（P<0.05）。

2.2 各组荷瘤小鼠体质量、肝脏质量、瘤块质量及抑瘤率的比较

D组对肿瘤的抑制率优于A、B、C组（P<0.05）。同时各组给药前后裸鼠的体质量并未出现明显的增加或减少，对裸鼠的肝脏也未见有明显的影响，结果见表1。

2.3 各组大鼠血清细胞因子水平比较

与A组相比，B组、C组、D组均可降低患者IL-6、IL-8、TGF-β水平，D组对降低IL-6、IL-8、TGF-β水平效果更佳（P<0.05）。见表2。

2.4 两组患者不良反应发生率的比较B216F225-7544-4ACC-A9CB-09939424259D

各给药组荷瘤裸鼠在给药后未见明显的活动减少、便秘、腹泻等不良反应，差异不具有统计学意义（P>0.05）。

3讨论

在泌尿外科中，前列腺癌是最常见的恶性肿瘤之一。前列腺癌是雄性激素敏感性肿瘤，治疗方式一般是在癌症早期采用雄激素剥夺疗法或睾丸切除治疗。然而，随着时间的推移，前列腺癌的生长变得不依赖于雄性激素治疗，但是该药物疗效有限，并且毒性大，不良反应严重，这无疑降低了人们对于这些药物治疗的期望[3]。中医药在治疗西医认为的疑难杂症具备显著的优势。尤其在肿瘤的防治上，更是积累了大量的临床经验，也取得了一系列的临床疗效标准，研究前景广阔。

本研究将青藤碱运用在裸鼠中，研究结果显示，给药后各给药组对移植瘤体积的增长都有抑制作用，且将青藤碱与雷帕霉素联合应用效果更佳。另外，本研究结果还显示，青藤碱与雷帕霉素联合应用裸鼠的体质量并未出现明显的增加或减少，对裸鼠的肝脏也未见有明显的影响，分析其原因在于从中药白桦中提取出的白桦脂酸可显著抑制肿瘤细胞生长，该效应是通过上调抑癌基因p53表达而实现的。苦参碱、莪术尤其具有抗肿瘤效应的机制是这些药物抑制了bcl-2的表达，而bcl-2属于凋亡抑制基因，降低bcl-2意味着加速肿瘤细胞的凋亡，促进机体恢复健康。中药青风藤味苦，能祛风湿、通经络和利小便，另外青藤碱（SIN）是从青风藤提取出来的有效活性单体，具有免疫抑制和抗炎作用[4]。本研究将青藤碱运用在裸鼠中，研究結果显示与A组相比，B组、C组、D组均可降低患者IL-6、IL-8、TGF-β水平，D组对降低IL-6、IL-8、TGF-β水平效果更佳，且两组患者不良反应发生率的比较，差异不具有统计学意义（P>0.05）。

综上所述，青藤碱可以提高抑瘤率，抑制肿瘤体积的增长，降低患者IL-6、IL-8、TGF-β水平，且未发现明显的毒性反应，具有较好的安全性。

参考文献

[1]陈薛，谭邓旭，赵宁宁，赵勇，张彩勤，白冰，师长宏.前列腺癌人源性异种移植裸鼠模型的建立与治疗[J].中国比较医学杂志，2019，29（5）：38-43.

[2]毛立军.荷载SATB1基因shRNA的溶瘤腺病毒治疗前列腺癌[D].苏州大学，2018：1-142.

[3]陈嘉胜.木香烃内酯联合多柔比星治疗前列腺癌的作用及机制研究[D].南方医科大学，2018：1-111.

[4]袁璞.MRI引导下基于TiO2的纳米系统在前列腺癌治疗中的应用[D].郑州大学，2019.B216F225-7544-4ACC-A9CB-09939424259D