高效液相色谱法测定饼干中的9种合成着色剂

2021-06-10刘秀娟曹秀余明霞董小海钟红舰

食品工业 2021年5期

刘秀娟，曹秀，余明霞，董小海，钟红舰

河南省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所（郑州 450002）

合成着色剂具有价格低廉、色泽鲜艳、容易着色、性质稳定等特点，因而在食品加工工艺中有着广泛的应用[1-2]。但是，合成着色过量摄入会引起慢性中毒，可导致致畸、致癌等风险增加。GB 2760—2014《食品添加剂使用标准》中明确规定了人工合成着色剂作为食品添加剂的最大使用限量[3]。

目前，合成着色剂的检测方法主要有高效液相色谱法[4-10]、高效液相色谱-质谱联用法[11-13]，最常用的是高效液相色谱法。饼干常在加工过程中添加食用着色剂以改善其感官色泽，合成着色剂与蛋白质强烈结合，在提取过程中，难以分离，且有大量色素吸附于沉淀蛋白中，从而导致检测回收率降低、稳定性变差等问题。GB/T 5009.35—2016《食品中合成着色剂的测定》中液相色谱法未涵盖饼干食品。此次试验对饼干样品中合成着色剂的前处理条件进行优化研究，建立高效液相色谱法测定饼干中9种合成着色剂的方法。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

甲醇，色谱纯，德国Merck公司；乙酸铵，色谱纯，美国Fisher公司；乙醇、氨水、亚铁氰化钾、乙酸锌、甲酸均为色谱纯，国药集团化学试剂有限公司；HLB柱（150 mg/6 mL），美国Waters公司；试验用水均为超纯水。

柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、诱惑红、赤藓红、亮蓝，国家标准物质中心；新红，农业部环境保护科研监测所；靛蓝，德国Dr. Ehrenstorfer GmbH公司。

1.2 仪器与设备

LC-20AT，配有二极管阵列检测器，岛津公司；GL-21B型高速冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂离心机；RE-52AA旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；QGC-36型自动氮吹浓缩仪，上海泉岛公司；固相萃取装置，美国Agilent公司；Milli-Q超纯水纯化系统，美国密理博公司；分析天平，瑞士梅特勒-托利多公司。

1.3 方法

1.3.1 样品处理

样品提取：取2 g左右（精确至0.01 g）试样于50 mL离心管中，加入25 mL无水乙醇-氨水-水（7：2：1，V/V），涡旋1 min，超声提取45 min，以8 000 r/min 4 ℃离心5 min，取10 mL上清液于40 ℃水浴减压旋转蒸发至近干，用10 mL 4%甲酸水溶解用HLB柱净化。

样品净化：HLB柱使用前分别用5 mL甲醇、5 mL水活化。将待净化液过柱，用5 mL 1%甲酸水淋洗，5 mL 2%氨水-甲醇洗脱，将洗脱液于40 ℃氮吹至近干，用2 mL水溶解过膜，上机。

1.3.2 标准溶液的配制

分别吸取1.00 mL胭脂红、苋菜红、日落黄、柠檬黄、赤藓红、新红、靛蓝、亮蓝标准溶液以及0.50mL诱惑红标准溶液，用水定容于10 mL容量瓶中，配制成50 μg/mL的混合标准储备液。取50.0 μg/mL的混合标准储备液，逐级稀释成0.20，0.50，0.80，1.00，2.00和5.00 μg/mL，按照色谱条件进样，以各色素峰面积对浓度做线性回归分析。

1.3.3 色谱条件

Syncronis C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱温40 ℃；流速1.0 mL/min；进样量5 μL；二极管阵列检测器；流动相：甲醇和0.02 mol/L乙酸铵溶液，梯度洗脱，流动相梯度洗脱程序如表1所示。