江西特产中药茶芎抗ADP诱导的血小板聚集研究*

吴先昊 尹小明 袁源见 黄斌 田莹莹 曾强 赵诗云＃

（1江西省中医药研究院 南昌330046；2江西省人民医院 南昌330006）

茶芎来源于伞形科藁本属植物茶芎（Ligusticum chuanxiong Hort.cv.fuxiong）的干燥根茎，是江西九江地区栽培的特产中药材，九江地区常用来泡茶，故名“茶芎”。茶芎与川芎、台芎、西芎合称芎，始见于《神农本草经》，列为上品。茶芎升散，通行经络，郁在中焦、胸膈痞满作痛，须茶芎开提其气以升之，故茶芎总解诸郁，直达三焦，通阴阳之气血[1～2]。在古代，茶芎常作为川芎的替代品用于处方中。与川芎不同，茶芎长期不开花，以无性繁殖为主。九江修水地区将其用来泡十锦茶，长年饮用，可增强体质，促进新陈代谢。现代药理研究表明茶芎中含有苯酞类、挥发油、藁本内酯、挥发性生物碱、茶芎多糖等成分，茶芎及其成分具有抗炎、增强免疫、增加颈总动脉流量、保护内皮细胞等作用[3～5]。本研究探讨茶芎对大鼠血小板聚集的影响及可能机制。现报道如下：

1 材料与方法

1.1 实验动物 SD大鼠，SPF级，雄性，体质量180～220 g，购于江西中医药大学实验动物中心，许可证号：SCXK（赣）2018-0003。

1.2 受试药与试剂 茶芎采自九江瑞昌，经虞金宝研究员（江西省中医药研究院中药研究所）鉴定为伞形科藁本属植物茶芎。茶芎水提物由本课题组提供，取240 g干燥样品，切成饮片，加水煎煮2次，合并滤液浓缩至1 000 ml。阿司匹林（国药准字J20171021）、二磷酸腺苷（ADP）（美国海伦娜公司）。1.3 主要仪器 AggRam血小板聚集仪（型号BJF52001，美国海伦娜公司）。西斯美康血凝仪（型号CS-5100），试剂均为原装进口配套。

1.4 实验方法 SD雄性大鼠40只，随机分为4组，每组10只，即空白对照组、阿司匹林肠溶片组（60 mg/kg）、茶芎水提物高剂量组（2.4 g/kg）、茶芎水提物低剂量组（0.6 g/kg）。阿司匹林肠溶片组、茶芎水提物各剂量组连续灌胃给药7 d，第6天给药后禁食，自由饮水过夜，第7天进行末次给药，2 h后用乙醚麻醉，腹主动脉取血。

1.5 观察指标 大鼠腹主动脉取血两份，用3.8%枸橼酸钠溶液按1:9抗凝。一份参照文献[6]，用血小板聚集仪记录血小板5 min最大聚集率（PAGmax），并计算各给药组血小板聚集的最大抑制率（IR），IR=（空白对照组PAGmax－给药组PAGmax）/空白对照组PAGmax×100%。另一份全血以转速3 000 r/min离心15 min，取血浆，用西斯美康血凝仪检测凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）和纤维蛋白原（Fib）含量。

1.6 统计学处理 采用SPSS19.0统计学软件对数据进行统计分析，计量资料以（±s）表示，采用两独立样本t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 茶芎水提物对ADP诱导大鼠血小板聚集的影响 茶芎水提物高剂量组、阿司匹林肠溶片组5 min PAGmax均低于空白对照组，差异有极显著性（P＜0.01）；茶芎水提物低剂量组与空白对照组比较，PAGmax有降低趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05）。阿司匹林肠溶片组、茶芎水提物高、低剂量组IR分别为31.5%、13.2%、3.8%，说明茶芎具有抗血小板聚集作用，且呈剂量依赖性。见表1。

表1 茶芎水提物对ADP诱导大鼠血小板聚集的影响（n＝10，±s）

表1 茶芎水提物对ADP诱导大鼠血小板聚集的影响（n＝10，±s）

注：与空白对照组比较，△P＜0.01。

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2.2 茶芎水提物对大鼠凝血象的影响 与空白对照组比较，茶芎水提物高剂量组、阿司匹林肠溶片组APTT和TT显著延长，差异有极显著性意义（P＜0.01）；与空白对照组比较，茶芎水提物高剂量组、阿司匹林肠溶片组PT明显延长，差异具有显著性（P＜0.05）。与空白对照组比较，茶芎水提物高、低剂量组大鼠血液中Fib含量均明显减少，差异具有显著性（P＜0.05）。见表2。

表2 茶芎水提物对大鼠凝血象的影响（n＝10，±s）

表2 茶芎水提物对大鼠凝血象的影响（n＝10，±s）

注：与空白对照组比较，△P＜0.05，▲P＜0.01。

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3 讨论

血栓是心脑血管疾病的重要诱因，而血小板过度激活是血栓形成的中心环节，心、脑血管血栓性疾病占我国人口病死原因的首位[7]。血小板活化后会聚集并黏附在血管内形成血栓，造成血管栓塞的发生。其机理是血管、组织损伤或异物使血小板过度活化和凝血系统过度激活，进一步促进血小板聚集、凝血因子活化和纤维蛋白生成，导致血栓和纤维蛋白的生成与降解失衡，如不加以控制将引起血管栓塞。研究表明，血栓形成的危险因素包括糖尿病、高血压、高血脂、吸烟、遗传等。血小板在聚集剂的激活下，其膜上纤维蛋白原受体暴露，在Ca2+的参与下纤维蛋白原与血小板结合，使相邻的血小板连接在一起，最终导致血小板聚集成团[8]。诱导血小板聚集的物质分为生理性和病理性聚集剂，生理性聚集剂有胶原、凝血酶、肾上腺素、5羟色胺（5-HT）、组胺、血栓烷A2（TXA2）、ADP等，病理性聚集剂有病菌、药物、免疫复合物等。聚集剂引起血小板膜上相应受体激活和细胞信号传导，从而降低环磷酸腺苷（cAMP）浓度，提高游离Ca2+浓度。抗血小板聚集、降低血液黏度、抑制血栓形成是防治血栓性疾病的重要方式。根据作用靶点不同，抗血小板聚集的机理分为：（1）抑制血小板环氧化酶，从而抑制花生四烯酸转变成前列腺素G2和H2，导致产生的TXA2下降，血小板内cAMP含量升高，血小板聚集抑制；（2）与Ca2+结合，除去血浆中的Ca2+，从而抗血小板聚集，如枸橼酸钠；（3）纤溶酶原激活，纤溶酶（一类丝氨酸蛋白酶）对纤维蛋白分解液化，从而清除血栓[9]。凝血四项是临床检验血栓性疾病的常用指标，PT反映外源性凝血途径，主要由凝血因子（FⅦ）的活性来决定；APTT反映内源性凝血途径，主要反应凝血因子Ⅱ（FⅡ）、Ⅴ（FⅤ）、Ⅷ（FⅧ）、Ⅸ（FⅨ）、Ⅺ（FⅪ）等活性；TT主要反映纤维蛋白原的活性，与凝血因子Ⅰ（FⅠ）相关；Fib是由肝细胞分泌的参与凝血和止血过程的一种糖蛋白，Fib转变成不溶性纤维蛋白导致血液凝固。

阿司匹林常用于急性冠脉综合征的治疗以及动脉粥样硬化的二级预防，具有良好的效果，其机理为抑制环氧合酶的活性，从而减少TXA2的合成，抑制血小板聚集，进而防止血栓形成，降低心脑血管事件的发生。虽然阿司匹林在防治血栓性疾病方面发挥了重要作用，但其对血小板的抑制作用是不可逆的，且有出血的副作用，使其在临床上的长期应用受到了限制。中医药在防治慢性疾病方面有其特有的优势，具有多靶点、毒副作用小等特点。因此，从中医药中寻找用于防治心脑血管疾病的药物显得尤为重要。茶芎具有活血行气、祛风止痛等作用，常用于头风头痛、风湿痹痛等症。本研究表明，茶芎水提物高剂量组可明显降低ADP诱导的血小板聚集率，延长PT、APTT、TT时间，降低大鼠全血中Fib含量。至于茶芎是通过哪条途径使血小板聚集率下降，有待今后进一步研究。