一起异地引入羊发生羊肠毒血症的诊断

贺胜，简莹娜，王戈平，李秀萍，马利青

(1.青海省民和县李二堡镇畜牧兽医站，民和 810807；2.青海大学畜牧兽医科学院，西宁 810016)

2020年9月，青海省民和县松树乡某农户从海西州某地购买了154只成年绵羊，运回后1周左右，陆续出现卧地不起，呻吟，腹泻，有时出现摇头等神经症状。期间虽经过治疗，但没有奏效，后送检至省级专业实验室检验，诊断为D型产气荚膜梭菌引起的绵羊肠毒血症，现报道如下：

1 临床症状

羊只运回的第1周表现异常，第2周开始部分羊只出现精神沉郁，腹泻，先排出暗绿色或者黄棕色的粥状粪便，散发恶臭气味，后变为稀便，混有粘液，有腹痛表现。1周后粪便变干呈块状，偶见带血。患羊精神沉郁，往往低头面墙呆立，或独自卧在墙角。后期卧地不起，四肢呈游泳状划动，口吐白沫或流涎水。严重者哀叫而死，共死亡7只。

2 剖检症状

对其中的5只病死羊进行了剖检。胸腔积液，液体呈淡黄色3/5；心包积液，心脏冠状沟脂肪有出血点4/4；肝脏肿大，呈土黄色；胆囊充盈，比体积增大1×以上3/5；肺脏肿大、淤血2/2；肾较大，且较软，呈棕红色3/5；小肠阶段性充血，出血，内充满水样内容物2/5；肠系膜淋巴结肿大，奶白色3/5；十二指球状肠膨大部内膜有弥散性出血点2/5；胃粘膜脱落，部分有出血斑块2/5。

3 实验室诊断

3.1 涂片镜检

取新鲜病死羊的心、肝、脾、肺、肾、肠淋巴等组织涂片，革兰氏染色阳性，镜检可见两端钝圆的粗大杆菌，呈单个或者2～3个排列，有荚膜。

3.2 细菌的分离培养

将上述无菌采集的心、肝、脾、肺、肾、肠淋巴等组织依次接种至普通肉汤、厌气肉肝汤和鲜血平板培养基上。经24 h培养后，厌气肉肝汤培养基上有泡沫，培养基变浑浊；鲜血平板培养基上有圆形、表面突起、呈灰白色半透明状菌落，且在菌落周围形成溶血环。厌气肉肝汤和鲜血培养基培养物染色镜检为革兰氏阳性杆菌。

3.3 生化试验

该菌可利用葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖，但不发酵甘露醇。可生成硫化氢气体，甲基红试验、靛基质试验、尿素试验以及V-P试验都呈阴性，无法利用枸椽酸盐。

3.4 动物试验

取病死羊小肠水样内容物，用1倍量的灭菌生理盐水进行稀释，3,000 rpm 离心10 min，取上清液。选取8只健康15 g左右的实验小鼠，随机分为对照组和试验组，每组各4只。其中，试验组静脉注射上清液0.2 mL/只共2只；0.5 mL/只共2只；对照组分别注射生理盐水0.2 mL/只，0.5 mL/只各2只。结果0.5 mL/只试验组小鼠在注射上清液后约5 h左右死亡，0.2 mL/只试验组小鼠在注射上清液后约15 h左右死亡，对照组小鼠都表现正常，说明实验组肠内容物存在毒素。

3.5 PCR检测

将分离细菌进行基因组DNA提取，经PCR检测(引物详见见表1)，扩增出325 bp 的α毒素基因片段和585 bp 的ε毒素基因片段(详见图1)，诊断为 D 型产气荚膜梭菌。

表1 产气荚膜梭菌毒素检测引物表

图1 分离菌株毒素PCR检测结果图DL2000 DNAmaker；N-：为阴性对照；α、β、iota、ε分别为不同的毒素基因。

4 结论

经现场调查、临床症状、剖检变化和细菌分离培养、生化实验、肠内容物毒素检查及分离菌株的多重PCR检测，此次死亡病例确诊为由D型产气荚膜梭菌感染引起的绵羊肠毒血症。

5 防治

羊肠毒血症也叫做软肾病，是由于感染D型产气荚膜梭菌而导致的一种急性非接触性传染疾病，D型产气荚膜梭菌在羊肠道中大量繁殖并产生毒素引起急性毒血症，可引起羔羊、绵羊、山羊、牛以及灰鼠发病[1]。由于其具有非常高的死亡率往往给养殖户造成严重的经济损失。病羊和带菌羊是肠毒血症的传染来源。肠毒血症常见经口感染，绵羊对该病非常易感，呈散发状态[2]。

本次实验室诊断结果认为该病例是由D型产气荚膜梭菌引起的绵羊肠毒血症，至于本次病例是在产地，运输过程或运回后感染的，有待于进一步的调查。根据实验室诊断结果，专业人员对购入羊群进行了羊四联疫苗的注射工作，注射后很快杜绝了羊肠毒血症的发生。病死羊只运送至指定地点，挖2m以上深坑，底层倒入生石灰和消毒药深埋[3]。该菌在自然界及动物中广泛存在，引进羊只必须免疫接种羊三联或四联疫苗，尤其在羊群转场或进入换草场之前，加强免疫接种是预防本病发生的最为可行的方法[4]。