中晚期肝癌患者TACE治疗后外周血中lncRNA-ANRIL的表达水平与患者预后相关性分析

张洪宇,芮雅宝,李 军,陆 通,王燮辰,蒲艳军,王旭垠,闫 蕾

原发性肝癌是常见的一种恶性肿瘤，发病率呈上升趋势，且具有较高病死率，严重威胁患者生命健康、影响患者生活质量[1]。原发性肝癌早期症状较为隐匿，潜伏时间长，发现时通常已属中晚期，大部分失去最佳手术治疗时机。而经导管肝动脉化疗栓塞术(TACE)成为中晚期肝癌主要治疗方法，其在延长患者生存期、抑制肿瘤生长等方面有良好疗效[2-3]。近年来研究发现，长链非编码RNA(lncRNA)与癌症发生、发展及转移关系紧密，而尚无有关长链反义非编码RNA(lncRNA-ANRIL)与肝癌关系的报道[4]。本文通过分析中晚期肝癌患者TACE治疗后外周血中lncRNA-ANRIL的表达与患者预后相关性，以期为改善患者预后提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料:选择我院于2015年1月-2019年1月收治的中晚期肝癌患者97例，符合《原发性肝癌诊疗规范(2011版)》[5]诊断标准，且均行TACE术治疗。纳入标准：①经临床表现、影像学及病理学证实为原发性肝癌，且TNM分期为Ⅲb-Ⅳ期；②符合TACE术指征，且临床资料完整；③获得知情同意。排除标准：①转移性肝癌、血管瘤及其他恶性肿瘤者；②TACE术禁忌者；③术前合并急慢性感染者或凝血功能障碍者；④精神疾病者；⑤妊娠或哺乳期妇女。纳入的97例患者中，男性59例，女性38例；年龄31～78岁，平均年龄(56.73±8.97)岁；体质指数(BMI)22.41±1.28 kg/m2；TNM分期：Ⅲb期56例，Ⅳa期28例，Ⅳb期13例。受试者均经医院伦理委员会批准。

1.2 方法:所有患者均行TACE术治疗，具体方法：穿刺点选取患者右侧腹股沟下方韧带中点下1～2 cm处，以Selding穿刺及时，经肝总动脉、腹主动脉及股动脉将5F导管超选择至肿瘤供血动脉，固定导管头端，注入700 mg 5-氟尿嘧啶、40 mg表阿霉素、80 mg顺铂与5～30 mL碘化油乳剂充分混合成化疗药碘化油乳剂，行肿瘤血管栓塞。术后进行常规营养支持、补液等治疗。

1.3 预后评价:所有患者均随访至2020年1月31日，观察患者总体生存时间和无进展生存时间，以死亡或随访末为终点，其中以复发、转移和死亡为预后不良，反之为预后良好。

1.4 观察指标:①观察术前、术后7 d和术后1个月肝功能变化，分别于术前、术后7 d和术后1个月清晨空腹采集3 mL外周静脉血，离心半径10 cm，3 000 r/min，离心12 min，取上清液，采用Dxc 800TB全自动生化仪测定肝功能指标总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平。②观察术前、术后7 d和术后1个月外周血lncRNA-ANRIL表达，分别于术前、术后7 d和术后1个月清晨空腹采集3 mL外周静脉血，采用一步法总RNA提取试剂Trizol(美国Invitrogen公司)提取总RNA，且逆转录为cDNA，进行实时荧光定量RCR(RT-PCR)。使用primer 6.0软件设计引物，RT-PCR反应，95 ℃反应30 s，35个循环；设定95 ℃ 10 s、60 ℃ 30 s。采用2-△△Ct计算相对表达量。具体引物见表1。③观察不同预后情况外周血中lncRNA-ANRIL表达水平。④GAPDH是糖酵解反应中的一个酶，其在组织中一般都高水平表达且表达量相对恒定，被用作该实验操作的标准化内参。

表1 具体引物

2 结果

2.1 术前、术后7 d和术后1个月肝功能变化比较:术前血清TBIL、DBIL、AST和ALT水平比较差异无统计学意义(P>0.05)；术后7 d和术后1个月血清TBIL、DBIL、AST和ALT水平较术前升高，而术后1个月低于术后7 d(P<0.05)，见表2。

表2 术前、术后7 d和术后1个月肝功能变化比较

2.2 术前、术后7 d和术后1个月外周血lncRNA-ANRIL表达比较:术前外周血lncRNA-ANRIL表达比较差异无统计学意义(P>0.05)；术后7 d和术后1个月外周血lncRNA-ANRIL表达较术前降低，且术后1个月低于术后7 d(P<0.05)。见表3。

表3 术前、术后7d和术后1个月外周血lncRNA-ANRIL表达比较

2.3 预后情况:所有患者均随访至2020年1月31日，随访12～60个月。平均总生存期为38.83个月(见图1，目录后)。根据预后情况分为预后良好组52例(53.61%)与预后不良组45例(46.39%)。

2.4 不同预后情况外周血lncRNA-ANRIL表达比较:预后良好组外周血lncRNA-ANRIL表达低于预后不良组(P<0.05)，见表4。

表4 不同预后情况外周血lncRNA-ANRIL表达比较

3 讨论

正常肝脏组织主要由门静脉供血，占75%以上；肝癌主要由其所在的肝叶动脉供血，占95%左右。因此，选择性阻断肝动脉可使肿瘤组织缺血、坏死。肿瘤生长过大或多发、跨叶时通常需接受多支供血，有时也会由于主要供血动脉被栓塞而通过侧支循环供血。故而，临床上采用经肝动脉治疗能够在区域范围内将肝癌细胞有效杀灭且对非瘤肝组织影响较小[6]。TACE作为一种介入姑息治疗手段，将化疗药物主要通过介入方法直接注入肿瘤供血动脉中，并应用碘化油乳化进行栓塞，使肝动脉供血阻断，维持肿瘤病灶局部较高药物浓度，从而促进肿瘤病灶缩小和肿瘤细胞坏死[7]。本文研究表明，术后7d和术后1个月血清TBIL、DBIL、AST和ALT水平较术前升高而术后1个月低于术后7d，提示TACE治疗后，可短暂导致患者肝功能损害，且逐渐出现好转，认为TACE导致肝功能损害的机制可能是由于TACE治疗肿瘤同时造成非肿瘤组织缺血缺氧及缺血后再灌注损伤，导致自由基介导的肝细胞损伤；且应用大剂量化疗药物灌注入肝脏中，从而使部分化疗药物进入癌变组织旁的非癌区难以避免，不同程度杀伤正常肝细胞。随着近年来临床上微导管的使用，TACE对肝功能损伤明显减轻。

lncRNA成为近年来研究热点，主要是长度200个碱基且不具备编码蛋白功能的一类RNA分子。研究表明，许多lncRNA在多种肿瘤发生、发展、侵袭及转移过程中发挥作用[8-10]。lncRNA已被证实在肝癌、胃癌等消化系统肿瘤中诊断价值较大。Ma等[11]学者研究报道显示，ANRIL能够通过街道上皮细胞-间充质转化的发生，促进肝癌转移。Lan等[12]学者研究报道显示，ANRIL能够通过表皮生长因子受体依赖性信号通过，促进胃癌侵袭-转移级联反应及促进胃癌细胞生长，且胃癌组织中ANRIL表达高于正常组织。本文研究表明，术后7d和术后1个月外周血lncRNA-ANRIL表达较术前降低，且术后1个月低于术后7d，预后良好组外周血lncRNA-ANRIL表达低于预后不良组，提示TACE治疗后可下调外周血lncRNA-ANRIL表达，且与预后密切相关。

综上所述，中晚期肝癌患者TACE治疗后外周血lncRNA-ANRIL表达降低，且与预后密切相关，预后越差lncRNA-ANRIL表达越高。