儿童穿孔性阑尾炎患者外周血单核细胞表面HLA-DR/CD14表达率及与临床诊疗的相关性

刘 涛，李站虎（西安市儿童医院，西安710003）

穿孔性阑尾炎是指阑尾由于多种因素诱发炎症进一步恶化形成穿孔的疾病，穿孔后细菌易进入血液循环引起败血症，是临床上常见的急腹症之一。通常小儿穿孔性阑尾炎的发生率与成人相比较高，这是由于小儿阑尾炎病情发展快造成的，治疗的关键是早期诊断和及时手术[1]。CD14 是一种白细胞分化抗原，CD14+单核细胞表面 HLA-DR 在抗原提呈过程中发挥关键作用，研究表明外周血单核细胞表面HLA-DR/CD14表达率与机体免疫功能密切相关，另外其还可用作感染性疾病的早期预后指标[2]。目前关于外周血单核细胞表面HLA-DR/CD14 的表达与穿孔性阑尾炎间的相关性研究尚不深入，基于此本研究拟分析外周血单核细胞表面HLA-DR/CD14表达率与小儿穿孔性阑尾炎患者临床诊疗的相关性，旨在为小儿穿孔性阑尾炎的早期诊治提供合理依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选择西安市儿童医院2016年1月～2017年5月收治的49 例经传统开腹阑尾切除术治疗的穿孔性阑尾炎患儿为开腹术组，选择同期我院经腹腔镜阑尾切除术治疗的55 例穿孔性阑尾炎患儿为腹腔镜组，另选取同期我院健康体检25 例患儿为对照组。比较三组的平均年龄、平均身高和平均体重差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

纳入标准：符合穿孔性阑尾炎的诊断标准。 排除标准：①精神异常者；②并发严重脏器疾病者；③糖皮质激素、免疫抑制药物服用史者。

1.2 仪器与试剂 CD14-PE，HLA-DR/异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)，小鼠免疫球蛋白(immunoglobulin，IgG)-FITC，医用低速离心机(德国Heraeus 公司)，FACSCalibur 型流式细胞仪(美国Becton-Dickinson 公司)，流式专用试管(上海百赛生物有限公司)。

1.3 方法 采集开腹术组患儿、腹腔镜组患儿和对照组EDTA-K3静脉抗凝血2 ml，取三个干净的流式试管，分别标注为开腹术组、腹腔镜组和对照组，于开腹术组管和腹腔镜组管加入5 μl HLADR/FITC，5 μlCD14-PE，对照组管加入5 μl 小鼠IgG1/FITC，10 μl CD14-PE。手动或振动仪混匀静脉抗凝血，各取10 μl 分别加入开腹术组管和腹腔镜组管及对照组管中，完全充分震荡混匀后放于室温暗室内作用15 min，于各管中加入20 μl 红细胞裂解液充分振动混匀后放于室温下暗室内作用15～20 min，待混悬液至清亮，准备开始上机离心，将转速设定为1 000 r/min 离心5 min 后弃掉上清。每管中各加入5ml PBS，以1 ml 鞘液充分混匀后上机进行分析。以CD14/PE 射门，检测HLA-DR/FITC+/PE+双性细胞的百分率。

1.4 统计学分析 采用SPSS 21.0 统计学软件分析数据，符合正态分布计量资料采用以均值±标准差(x±s)表示，行t检验，计数资料以n(%)表示，行χ2检验。P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 三组外周血单核细胞表面HLA-DR/CD14表达率的比较 见表1。术前开腹术组和腹腔镜组的外周血HLA-DR/CD14表达率均低于对照组，其差异具有统计学意义(F=50.231，P=0.002)，术后2和5天，开腹术组和腹腔镜组的外周血HLA-DR/CD14表达率较术前均显著升高，其差异具有统计学意义(P＜0.05)，对照组外周血HLA-DR/CD14表达率较术前升高，但是其差异无统计学意义(P＞0.05)。术后2 天和5 天，腹腔镜组的外周血HLA-DR/CD14表达率高于开腹术组，且低于对照组，差异有统计学意义。

表1 三组外周血单核细胞表面HLA-DR/CD14表达率的比较(x±s,%)

2.2 腹腔镜组与开腹术组外周血单核细胞表面HLA-DR/CD14表达率变化的比较 见表2。相较于开腹术组，腹腔镜组外周血单核细胞表面HLADR/CD14表达率变化的幅度较大，其差异具有统计学意义(P＜0.001，表2)。

表2 腹腔镜组与开腹术组外周血单核细胞表面HLA-DR/CD14表达率变化的比较(x±s,%)

3 讨论

阑尾炎是常见的外科急腹症，诊断和治疗的不及时易发展为穿孔性阑尾炎。随着医疗技术的进步，手术方法已由传统的开腹阑尾切除术逐渐变为腹腔镜阑尾切除术。小儿急性阑尾炎穿孔较为多发，6～10 岁是患儿的高发阶段。近年来，小儿急性阑尾炎穿孔的发病率呈逐年攀升趋势，对患儿的身体和心理带来了极大的负面影响。治疗的关键是早期诊断和及时手术。

CD14 是一种糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白，参与机体免疫反应中的固有免疫应答，CD14 与多种疾病相关，在宿主抵御感染中具有双重作用[3]。HLADR 是单核细胞表面参与外来抗原加工、处理和提呈的关键分子，已有研究指出HLA-DR/CD14 足量表达对机体的固有免疫极为重要[4-5]，另外当严重感染并发脓毒症时，患者 HLA-DR/CD14 的表达量显著下调[6-7]，因此HLA-DR/CD14 的表达率与机体的免疫功能密切相关[8-9]，临床诊疗上其还可用作感染性疾病的早期预后指标[10]。目前关于外周血单核细胞表面HLA-DR/CD14 的表达与穿孔性阑尾炎间的相关性研究尚不深入，本研究拟分析外周血单核细胞表面HLA-DR/CD14表达率与小儿穿孔性阑尾炎患者临床诊疗的相关性，结果显示术后腹腔镜组的外周血HLA-DR/CD14表达率高于开腹术组，并且腹腔镜组外周血HLA-DR/CD14表达率变化的幅度较大，能促使患儿的HLA-DR/CD14表达率尽快恢复至正常值，增强患儿的免疫功能，促进康复。

综上所述，腹腔镜阑尾切除术患儿外周血单核细胞表面HLA-DR/CD14表达率较高，能有效增强患儿免疫功能，对康复产生积极作用。