新型超声组织处理仪在气管/肺活检标本中的应用研究

文/廖小杰，谭凌峰

肺癌是导致中国人癌症死亡的首要原因[1]。70%以上的气管/肺肿瘤的病理诊断都是由纤维支气管镜、穿刺活检或细胞学标本诊断的[2]。病理科接收到气管/肺活检标本后的首要任务是确定病变是肿瘤还是其他，若是肿瘤或特殊感染，还要进行免疫组织化学染色或特殊染色协助进一步诊断。在临床病理工作中，从接收标本、取材、常规脱水、制片到发出病理诊断报告，往往需要3~5d，对于需要进行免疫组织化学染色或特殊染色的标本，其病理报告需要更长的时间。本文应用新型超声处理仪及配套环保试剂进行气管/肺小活检标本的快速石蜡切片技术，并对其处理后的组织进行免疫组织化学染色或特殊染色，明显缩短制片时间，应用效果良好，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

（1）标本。收集了柳州市工人医院2020 年11 月-2021 年3月送检由纤维支气管镜、穿刺活检的气管/肺活检标本252 例，其中143 例使用新型超声组织处理仪处理（超声法组），其余109例使用传统方法处理（传统法组）。

（2）主要实验仪器及试剂。JYCL-2 超声组织处理仪及选自佛山南海钧镒生产的快速石蜡制片专用试剂（加强型）；LEICA ASP300S 全自动脱水机；爱华BMJ-1B 包埋机；Thermo HM325轮转式切片机；派斯杰RS36 型HE 染色机；罗氏Benchmark XT 免疫组织化学仪。免疫组织化学一抗选自福州迈新生产的即用型CK（pan）（AE1/AE3）鼠抗人单克隆抗体、即用型CK5/6（D5/16B4）鼠抗人单克隆抗体、即用型CK7（OV-TL12/30）鼠抗人单克隆抗体、即用型TTF-1（MX011）鼠抗人单克隆抗体、即用型NapsinA（MX015）鼠抗人单克隆抗体、即用型P40（ZR8）兔抗人单克隆抗体、即用型Ki-67（MX006）鼠抗人单克隆抗体、即用型Syn（MX038）鼠抗人单克隆抗体、即用型CgA（MX018）鼠抗人单克隆抗体以及美国罗氏生产的ALK（D5F3）兔单克隆抗体等；二抗及DAB 选用美国罗氏生产的Ultraview Universal DAB试剂盒；特殊染色选自BASO 公司生产的抗酸染色液（冷染法）试剂盒及病理糖原染色液（PAS）试剂盒等。

1.2 方法

（1）标本处理。新型超声组织处理仪组织处理流程：提前20min 开启JYCL-2 超声组织处理仪预热试剂至设置的温度，组织取材后于10%中性缓冲福尔马林53℃固定25min，样本释放剂分别52℃处理30min 及56℃处理30min 后，于62℃石蜡浸蜡25min,常规包埋切片。传统方法组织处理流程：组织取材后于10%中性缓冲福尔马林固定6~24h 后上脱水机处理，分别于75%酒精、80%酒精、95%酒精及100%酒精中梯度脱水，然后于二甲苯中透明，石蜡浸蜡，常规包埋切片。

（2）HE 染色。4μm 石蜡切片经80℃烤片15min，上HE 染色机行自动HE 染色，后经常规脱水透明、中性树胶封固后于显微镜下观察结果，并根据《临床技能操作规范·病理学分册》[3]对HE 切片评价。

（3）免疫组织化学染色。4μm 石蜡切片经65℃烤片1h，上免疫组织化学仪行自动免疫组织化学染色，后经常规脱水透明、中性树胶封固后于显微镜下观察结果。

（4）特殊染色。抗酸染色：6μm 石蜡切片经80 ℃烤片15min，常规脱蜡至水后，石炭酸复红染色10min，流水冲洗后滴加酸性酒精脱色，流水冲洗后滴加亚甲基蓝复染30s，流水冲洗，沥干，中性树胶封固镜检。

2 结果

2.1 HE 染色

超声法组切片切面完整，切片平摊，透明度很高，细胞核与细胞质对比清晰；与传统法组所制片无明显差异（图1）。超声法组与传统法组的甲级片分别为93.8%、94.2%，达到病理切片质控要求。

图1 气管/肺活检标本HE 染色；①为肺腺癌（超声法）；②为肺鳞状细胞癌（超声法）；③为肺肉芽肿性炎症（超声法）；④为机化性肺炎（超声法）；⑤为肺腺癌（传统法）；⑥为肺鳞状细胞癌（传统法）；⑦为肺肉芽肿性炎症（传统法）；⑧为机化性肺炎（传统法）

2.2 免疫组织化学染色

超声法组处理后的组织中的抗原保存良好，免疫组织化学染色抗体在组织细胞结构上定位清晰准确，无背景染色，与传统法组无明显差异（图2）。

图2 气管/肺活检标本免疫组化染色及特殊染色 ①为肺腺癌表达TTF-1 蛋白（超声法）；②为肺鳞状细胞癌表达CK5/6 蛋白（超声法）；③为肺腺癌表达ALK(D5F3)蛋白；④为肺肉芽肿性炎症抗酸染色查见抗酸杆菌（超声法）；⑤为肺腺癌表达TTF-1 蛋白（传统法）；⑥为肺鳞状细胞癌表达CK5/6 蛋白（传统法）；⑦为肺腺癌表达ALK(D5F3)蛋白（传统法）；⑧为肺肉芽肿性炎症抗酸染色查见抗酸杆菌（传统法）

2.3 特殊染色

超声法组处理后的组织经特殊染色后，组织中相应的病原微生物能较好地显示出来，如抗酸染色清晰地显示抗酸杆菌（图2）。

3 讨论

病理诊断是疾病诊断的金标准，传统的组织处理方法步骤繁多，耗时长，往往需要十数个小时，需在脱水机中脱水过夜，从而使得报告的实效性降低。因此，缩短制片时间，尤其是标本的脱水时间对于缩短报告时间非常重要。新型超声组织处理仪是一种新型的组织处理设备，它通过精确控制温度及超声波的空化效应加快了脱水试剂的渗透作用，从而极大地缩短了组织脱水的时间，使得脱水时间从传统脱水方法的14h 缩短至2h。

由纤维支气管镜、穿刺活检的气管/肺活检标本，组织的厚度均≤0.3cm，应用新型超声处理仪处理后，发现组织脱水效果良好，制片稳定。行HE 染色后，染色对比清晰，红蓝分明，层次分明，与常规方法无明显差别；气管/肺小活检标本诊断常用的免疫组织化学染色CK(Pan)、CK7、TTF-1、CK5/6、NasinA、P40、Ki-67、Syn、CgA、CD56、ALK(D5F3 等均表达良好，定位准确，背景清晰；特殊染色如抗酸染色、PAS 等能清晰地显示病原微生物，染色分明，易于分辨。因此，快速组织处理系统在气管/肺活检标本中使用效果良好，结果准确。马健波等[4]研究表明，使用新型超声组织处理仪处理宫颈锥切组织，组织处理质量好。雷琎等[5]研究表明，使用超声法处理肠、肺、肝、肾、扁桃体、乳腺、子宫颈及胃组织，不会对HE 及免疫组织化学染色产生影响，有推广使用的潜力。

气管/肺活检标本应用新型超声组织处理仪制作石蜡切片，操作简便，在保证切片质量的同时可大大缩短制片时间，极大地满足了病理诊断及患者对于后续诊疗的需求，组织形态、抗原性、特殊结构及微生物均保留完好。使用环保型试剂，对于广大的病理技术工作者起到了良好的保护作用，是值得各个病理实验室推广的方法。