高效价冷凝集素对红细胞凝集及交叉配血的影响

李 亮，王 波，曹承华

1.南阳市中心医院输血科(河南 南阳 473200)

2.河南大学基础医学院(河南 开封 475004)

交叉配血是指临床上供血者的红细胞悬液和受血者的血清、受血者的红细胞悬液和供血者的血清同时进行凝集试验，其目的在于验证受血者和供血者的ABO血型鉴定是否正确，从而避免出现溶血性输血反应[1]。临床中多种原因会导致患者血液中冷凝集素效价增高而导致交叉配血试验不合、血型鉴定困难，影响输血治疗。研究表明[2]自身红细胞在低温时会发生凝集现象，尤其是4℃时会出现明显的红细胞凝集。为保障临床用血的安全，探讨不同温度条件下高效价冷凝集素对红细胞凝集及交叉配血的影响，故选取了50例因为紧急情况需要进行输血的患者展开相关研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料选取南阳市中心医院于2016年12月-2019年12月间收治的50例需要采取输血治疗的患者，其血红蛋白均低于60 g/L；经过院医学伦理委员会批准，所有患者及其家属均知情同意并且自愿参与本次研究。排除：①合并有自身免疫性疾病的患者；②合并有严重肝肾功能障碍的患者；③临床治疗依从性差的患者；④血型为Rh(-)的患者；⑤临床资料缺失不全的患者；⑥传染性疾病患者。其中男性24例，女性26例，年龄22～80岁，平均年龄(44.29±11.75)岁。原发疾病：自身免疫性贫血14例，骨髓异常增生综合征10例，高球蛋白血症8例，多发性骨髓瘤9例，慢性肺心病3例，传染性单核细胞增多症2例，阵发性睡眠性血红蛋白尿2例，外伤2例。

1.2研究方法①血液样本采集：静脉采血，分别采集EDTA抗凝样本4 mL和不抗凝样本5 mL；②红细胞处理：抗凝管中提取红细胞样本，37℃水浴30 min，检测无凝集后进行后续操作，若发生凝集则重复进行水浴，直至无凝集发生。③血清处理：干燥管中取出血清样本后加入处理过的红细胞，比例为1∶1，混合后置于4℃环境下冷藏30 min，进行冷吸收处理，必要时可进行多次处理。

冷吸收处理后的样本即刻进行分离处理，3 000 r/min离心5 min，随后进行交叉配血、冷凝集素试验、ABO反定型实验等。①血清交叉配血：采用盐水法和凝聚胺法实施交叉配血，步骤参照ABO正反定型试剂卡(美国Ortho Clinical Diagnostics，Inc公司)说明书执行，主、次侧凝集则表示配血不符，使用24℃ 0.9%氯化钠溶液洗涤红细胞，3次后配合2%红细胞悬液再次进行交叉配血。②电子交叉配血：采用全自动血库系统；不规则抗体为阴性的前提下，结合血鉴定结果确认血型匹配的一致性；不规则抗体为阳性则鉴定抗体对应红细胞确定抗体性质，再判断血型匹配的一致性。分别在室温20℃和37℃时进行交叉配血。③冷凝集素试验：在采集的血清标本中加入O型健康人的红细胞或同型血，在20℃和37℃条件下观察红细胞凝集情况。④ABO反定型实验：根据说明书操作鉴定ABO血型，采用盐水试管法抗A抗B血型定型试剂对患者红细胞进行正定型，用ABO试剂红细胞对患者血清进行反定型。

1.3观察指标观察患者血清交叉和电子交叉主次侧配型的结果，分别记录患者在不同温度下电子交叉配血试验的结果以及ABO血型的正反定型，分析患者的冷凝集素试验红细胞凝集情况和交叉配血的结果。交叉配血成功判定标准：主、次侧未见凝集，显微镜下可见红细胞散在、弥漫排序，排除免疫反应对结果的影响后可确定。

1.4统计学处理使用SPSS 21.0软件行统计分析，计数资料采用率(%)表示，比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1血清学交叉配血和电子交叉配血结果比较两种交叉配血方式的不规则抗体筛查阳性和主侧差异无统计学意义(P>0.05)；血清学交叉配血方式的次侧相合显著低于电子交叉配血方式(χ2=10.283，P<0.05)，见表1。

表1 比较输血患者血清学交叉配血和电子交叉配血的结果

2.2不同温度下的电子交叉配血结果比较在20℃时，电子交叉配血出现凝集率显著高于37℃时(P<0.05)，见表2。

表2 比较不同温度下的电子交叉配血结果

2.3不同温度下红细胞ABO血型鉴定结果比较两种温度下O型和正定型A型、反定型B型均有出现红细胞凝集现象，并且在温度为20℃时自身对照和O型出现凝集，见表3。

表3 不同温度下红细胞ABO血型鉴定结果比较

3 讨论

交叉配血试验在临床上包含有主试验和副试验两种，其中主试验是采用供血者的红细胞血液和受血者的血清做试验，从而检测两者之间是否存在反应的抗体；副试验则是采取受血者的红细胞悬液和供血者的血清进行试验，检测两者之间是否含有不合抗体[3-4]。交叉配血试验的目的在于鉴定受血者与供血者之间的ABO血型是否匹配正确，尽可能地避免受血者出现溶血性输血反应[5-6]。冷凝集素是临床上一种冷反应型抗红细胞抗体，又被称之为冷型血凝素，同时也是一种可以存在于正常人血清之中的抗体，正常生理情况下并不会促使机体内红细胞发生凝集，而在0～5℃温度下最容易和红细胞膜抗原相结合，但是低效价一般不具备临床意义[7-8]。临床上在进行交叉配血试验时，高滴度的冷凝集素会对交叉配血试验的结果产生一定程度的影响，进而会影响到患者的输血治疗[9]。作为目前临床上极为重要的治疗手段之一，输血治疗的安全性和有效性非常重要，而目前临床上所使用的配血方法主要是电子交叉配血和ABO血型正反定型，如何避免冷凝集素对配血的影响，进而保证患者临床输血的安全是临床研究的一大热点[10]。根据有关资料显示[11]，当温度低于一定程度时，冷凝集素的浓度就会大大升高，从而使得循环之中的自身抗体会和红细胞表面抗原进行结合，进而导致血液凝集的现象出现。如果因为高效价冷凝集素影响了配血的结果使得临床输血治疗中给患者输入了假阴性配血，其后果将会非常严重，如出现肾功能损害、溶血反应等情况，如果不能够及时进行有效处理，还会对患者的生命安全造成极大的威胁[12]。

在本次研究中，两种交叉配血方式的不规则抗体筛查阳性和主侧差异并无统计学意义；血清学交叉配血方式的次侧相合显著低于电子交叉配血方式，与既往研究结果相符[13]。在20℃时，电子交叉配血出现的凝集例数显著多于37℃时，其差异具有统计学意义。两种温度下O型和正定型A型、反定型B型均有出现红细胞凝集现象，并且在温度为20℃时自身对照和O型出现凝集。在温度低于37℃时当向患者的血清标本中加入O型健康人或同型红细胞会出现红细胞凝集现象；当温度处于4℃时可以看见红细胞明显凝集；当温度回升为37℃时，其凝集现象又会消失。采用盐水法和凝聚胺法实施交叉配血试验时，室温下次侧管和主侧管均会出现程度不一的凝集颗粒；用同样的方法和处理过的患者血清再次在37℃下轻摇试管，主次侧都没有出现凝集，将其倒入预温好的载玻片中，显微镜下能够看到红细胞弥漫、散在排列，可以排除其他亚型抗体所导致的免疫反应对结果的干扰，交叉配血成功。

综上所述，在低温条件下采用高效价冷凝集素能够促进患者红细胞的凝集，对电子交叉配血试验的结果和ABO血型正反定型造成一定程度的干扰，进而会影响到患者的临床输血治疗。