苗药血人参及其制剂对“气弱血弱体弱”冷病模型小鼠的作用研究

许 欢，张永萍,2*，段 丽

1.贵州中医药大学(贵州 贵阳 550025)

2.贵州省中药民族药炮制与制剂工程技术研究中心(贵州 贵阳 550025)

3.国药集团同济堂(贵州)制药有限公司(贵州 贵阳 550025)

苗医理论认为人体中的气是人体生灵能的主要表现形式，气的不足也是生灵能减退的表现，必然会导致体能和各相应架组功能的下降。气弱的总体表现主要为疲乏无力、心慌气短、易累易疲倦、声音低微、脉弱神衰等。血中含有各种供生物质的精微，是人体内最重要的组分。血液的不足导致供生物质的减少，也必然导致身体的衰弱和体能的不足[1]。苗医理论认为“积劳成疾”，过度劳累，这种“乱”会导致内脏、筋骨等受损，进而导致身架受损；冷病因为气不足，表现为患病后体质衰弱，内脏功能不足或亏损，或架构失常。不同内脏的亏损或架构失常，其表现症状也不同。如血弱表现为面唇苍白无血色、全身软弱、易疲劳等；气弱表现为神疲乏力、心慌气短、声音低微等。苗医治疗冷病采用补体法，包括补气法、补血法等。苗药理论中补气药是指以补充人体生灵能，提高人体机能活性为主要功效的药物。血人参是豆科蝶形花亚科植物茸毛木蓝(IndigoferastaclrvoidesLindl.)的根，是贵州苗族常用药。血人参植物主要含有挥发油、黄烷醇、甾醇体类等活性化学成分[2-4]，具有抗氧化、降血糖、降血脂、保肝、抗癌、抑菌、抗病毒等作用[5-8]。血人参性温，味微苦涩，有补气摄血、滋阴补肾之功效，主治崩漏、跌打、风湿、肝硬化、痢疾及疳积等[9]。芪胶升白胶囊是贵州苗药制剂之一，由血人参、大枣、阿胶、淫羊藿等中药组成，具有提高免疫力、抗肿瘤、抗疲劳、抗病毒等作用，用于白血病的治疗中[10]。在课题组前期的研究基础上[6,8]，通过建立“气弱血弱体弱”型冷病动物模型探寻血人参乙酸乙酯(YSYZ)部位及芪胶升白胶囊对机体能量代谢、血液系统、免疫机能等方面的影响，探索苗医药气弱体虚及冷病热治理论的实验研究方法，为苗药血人参及芪胶升白胶囊的开发应用奠定一定的实验基础。

1 材料与方法

1.1实验动物健康SPF级KM小鼠，雄性，体质量(18～22)g，购于重庆腾鑫生物科技有限公司(许可证号：SCXK(军)2012-0011)。

1.2药物与试剂血人参(贵州德昌祥药业有限公司，批号：160211)；血人参YSYZ部位(实验室自制)；芪胶升白胶囊(贵州德昌祥药业有限公司，批号：25270051)；小鼠ATP酶(ATPase)ELISA试剂盒(深圳子科生物科技有限公司，批号：20171115)；小鼠环磷酸腺苷(cAMP)ELISA试剂盒(深圳子科生物科技有限公司，批号：20171111)；小鼠环磷酸鸟苷(cGMP)ELISA试剂盒(深圳子科生物科技有限公司，批号：20171111)；番泻叶(购自贵阳一品药业，生产批号：20160311)。

1.3主要仪器ZZ-6小鼠自主活动测试仪(成都泰盟科技有限公司)；AUY200电子分析天平(日本岛津)；ALC-2013电子秤(北京爱科勒有限公司)、计时器(深圳昂升科技有限公司)；ELX800型酶联免疫检测仪(美国GE公司)；移液器(德国 Eppendorf 公司)；AL204电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)。

1.4方法

1.4.1 药品的配制 芪胶升白溶液的配制：取芪胶升白胶囊内容物，天平称重后，用0.25%羧甲基纤维素钠配成2.00、1.00、0.50 g/mL溶液，4℃保存备用；血人参YSYZ部位溶液的配制：取血人参YSYZ部位，天平称重后，加蒸馏水配制成0.33、0.17、0.08 g/mL溶液，4℃保存备用；八珍颗粒溶液的配制：取八珍颗粒，天平称重后，加蒸馏水配制成1.17 g/mL溶液，4℃保存备用。

1.4.2 动物造模及药物干预 雄性KM小鼠，适应性喂养3 d，随机分为正常组、模型组、八珍颗粒阳性对照组(剂量1.17 g/kg，以下简称阳性组)、YSYZ部位高中低剂量组(剂量分别为：0.33、0.17、0.08 g/kg，以下简称YSYZ组)、芪胶升白胶囊高中低剂量组(剂量分别为：2.00、1.00、0.50 g/kg，以下简称芪胶组)，每组10只。每天早上8点灌胃40%番泻叶水浸液，10点进行竭力游泳(水温23～25℃，力竭指标为动物失调；慌张，鼻部在水面上下浮动，头浸入水下10 s不能上浮为力竭标准)，下午2点给予相应药物，给药容积0.1 mL/10 g，尾部放血0.2 g(小鼠用75%酒精棉球擦拭尾部，使血管扩张充血，剪去鼠尾尖端1～2 mm左右，进行放血，放血后，用棉球压迫止血)，隔2 d放1次，如此重复4周。

1.5指标检测

1.5.1 小鼠一般状态观察及游泳时间的测定 实验过程中注意观察小鼠身形、活动、对外界刺激反应情况、皮毛、饮食、二便等是否正常。每周称量体质量，实验3周后，进行疲劳游泳时间的测定，第4周实验结束后，禁食不禁水12 h，眼球取血于抗凝管中，4 000 r/min，10 min分离血浆于-20℃保存备用。

1.5.2 小鼠免疫器官指数的计算 取小鼠脾、胸腺，去除周围脂肪组织，称重，计算脏器指数，脏器指数=脏器质量(mg)/体质量(g)。

1.5.3 ELISA法检测小鼠血浆ATP、cAMP、cGMP水平 将血浆及试剂平衡至室温，试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡，严格按照试剂盒说明操作。

2 结果

2.1对小鼠一般状态的影响给药前各组小鼠体质量无明显差异，小鼠身形匀称，活动自如，对外界刺激反应正常，皮毛浓密、色乳白有光泽，饮食、二便均正常。造模后各组小鼠皮毛稀疏且暗淡无光泽，饮食减少，鼠尾冰冷。药物治疗后，阳性药物组、YSYZ高剂量组、芪胶高剂量组小鼠身形匀称，活动自如，皮毛浓密、色乳白有光泽。

2.2对小鼠体质量和游泳时间的影响实验前各组小鼠体质量无明显差异，实验后，正常组小鼠体质量稳定增加。实验1周时，模型组、阳性组、YSYZ高剂量组、芪胶高、低剂量小鼠体质量较正常组明显减轻(P<0.05或P<0.01)；实验2周时，阳性组、芪胶各剂量组小鼠体质量较模型组明显增加(P<0.05或P<0.01)；实验3周时，芪胶中低剂量组小鼠体质量较模型组明显增加(P<0.05)；实验4周时，与正常组比较，各治疗组小鼠体质量差异有统计学意义(P<0.01)。模型组小鼠竭力游泳时间较正常组小鼠显著减少(P<0.01)，各组小鼠竭力游泳时间均高于模型组，实验3周时，与模型组比较，阳性组、YSYZ高剂量组、芪胶低剂量差异具有统计学意义(P<0.01)；实验4周时，与模型组比较，阳性组、YSYZ高剂量组、芪胶中低剂量组小鼠竭力游泳时间差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，见表1、2。

2.3对小鼠免疫器官的影响各实验组脾指数明显高于正常组，除YSYZ中剂量组差异无统计学意义，其余各实验组差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)；芪胶升白胶囊高剂量组脾指数高于模型组，其余各组脾指数均小于模型组，其中YSYZ中剂量组差异有统计学意义(P<0.01)；各组小鼠胸腺指数变化不显著，见表3。

表1 各组小鼠体质量变化的比较

表2 各组小鼠竭力游泳时间

表3 各组小鼠胸腺、脾指数的比较

2.4对小鼠ATP、cAMP、cGMP、cAMP/cGMP比值影响与正常组比较，各实验组ATP酶活性均增强，除YSYZ高剂量组及芪胶高、中剂量组差异无统计学意义，其余各实验组差异有统计学意义(P<0.01)；与模型组比较，YSYZ高剂量组、芪胶高中剂量组ATP酶含量明显减少(P<0.01)；与阳性药物组比较，正常组、YSYZ高剂量组、芪胶高中剂量组ATP酶含量明显减少(P<0. 01)。与正常组比较，各实验组cAMP酶含量均增加，模型组、阳性药物组、YSYZ低剂量组、芪胶低剂量组差异有统计学意义(P<0.01)，芪胶中剂量组差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，各实验组cAMP酶含量均减少，除阳性药物组和芪胶低剂量组，其余各组差异有统计学意义(P<0.01)；与阳性药物组比较，正常组、YSYZ部位高中剂量组、芪胶高中剂量组cAMP酶含量明显减少(P<0.01)。与正常组比较，各实验组cGMP酶含量均增加，模型组、阳性药物组、YSYZ各剂量组、芪胶中、低剂量组差异有统计学意义(P<0.01)，芪胶剂量组差异具有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，YSYZ高剂量组、芪胶高中剂量组含量明烛降低(P<0.05或P<0.01)；与阳性药物组比较，YSYZ高剂量组、芪胶中低剂量组含量明显降低(P<0.05)，芪胶升白胶囊高剂量含量明显降低(P<0.01)。与正常组比较，YSYZ中剂量和芪胶低剂量组cAMP/cGMP比值明显减小(P<0.05)，见表4。

表4 各组小鼠ATP、cAMP、cGMP及cAMP/cGMP比较

3 讨论

苗医理论认为人体中的气(主要指惠气)是人体生灵能的主要表现形式，气的不足也是生灵能减退的表现，必然会导致体能和各相应架组功能的下降。气弱的总体表现主要为疲乏无力、心慌气短、易累易疲倦、声音低微、脉弱神衰等；血中含有各种供生物质的精微，是人体内最重要的组分。血液的不足导致供生物质的减少，也必然导致身体的衰弱和体能的不足；苗医理论认为“积劳成疾”，过度劳累，这种“乱”会导致内脏、筋骨等受损，进而导致身架受损。中医学中的“饥则损气”，长期慢性饥饿可导致以脾胃气虚为主的全身性气虚表现。“劳则耗气”，强迫小鼠长时间大运动量运动，使之过度疲劳可耗气伤精，劳累之后更加纳呆食差，气虚则血虚。故采用“放血”、“疲劳”等方法建立“气弱血弱体弱”冷病动物模型。本组结果表明。治疗后各组小鼠竭力游泳时间均高于模型组，各组小鼠身形、活动等得到一定改善，其中YSYZ高剂量组、芪胶高剂量组小鼠身形匀称，活动自如，皮毛浓密、色乳白有光泽，表明血人参极其制剂对“气弱血弱体弱”冷病模型小鼠具有一定的治疗作用。

ATP、cAMP、cGMP是细胞功能的重要调节物质，在细胞代谢及多种生理效应中具有关键作用。血浆中的cAMP、cGMP来源于组织细胞，是细胞内重要的第二信使，是激素、神经递质、药物效应的中间枢纽，保证机体正常的生理功能，在疾病的发生、发展过程中起重要作用。正常情况下，cAMP、cGMP的水平要保持动态平衡。一旦平衡失调，细胞功能也将发生明显变化[11]。 cAMP、cGMP这种拮抗性调节作用与人体的阴阳相关。学者通过多年研究认为：凡中医辨证阳虚者，cAMP/cGMP比值明显降低；而辨证为阴虚者则表现为 cAMP含量升高，cAMP/cGMP比值无明显降低。因此临床上测定cAMP和cGMP的含量及其比值，可以成为判断阴虚、阳虚的一个客观指标，同时也可作为其病情演变的指标之一[12]。本实验中YSYZ高剂量组、芪胶高中剂量组小鼠血浆ATP酶含量较模型组减少，差异有统计学意义(P<0.01)；各实验组小鼠血浆cAMP酶含量较模型组均减少，除阳性药物组和芪胶低剂量组，其余各组差异有统计学意义(P<0.01)；YSYZ高剂量组、芪胶升白胶囊高中剂量组小鼠血浆cGMP含量较模型组降低，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，说明血人参及其制剂(芪胶升白胶囊)对“气弱血弱体弱”冷病模型小鼠的体质量、脏器指数、血浆ATP、cAMP、cGMP值具有一定的调节作用，尤其是YSYZ部位高剂量组、芪胶高剂量能调节小鼠偏离正常值的ATP、cAMP、cGMP值。

综上所述，苗药血人参及其制剂对“气弱血弱体弱”冷病模型小鼠具有一定的改善作用，其作用机制可能与影响小鼠的体质量、免疫器官及调节小鼠偏离正常值的ATP、cAMP、cGMP水平表达有关。