血清PAPPA、HSP90α 在NSCLC患者中的变化及其临床意义

金灿辉，崔贯一，王爱红，孟元普

（河南科技大学第一附属医院胃肠肿瘤外科，河南 洛阳 471000）

基础方面的研究认为，肿瘤调控蛋白的改变，能够在非小细胞肺癌（英文全称，NSCLC）的发生过程中发挥重要的调控作用[1]。肿瘤蛋白的改变，能够通过影响到癌细胞转录、 肿瘤细胞增殖及癌细胞凋亡抑制过程,最终影响到肺癌的发生发展[2]。热休克蛋白90α（英文全称，HSP90α）是肿瘤热休克蛋白家族成员, 其能够通过诱导肿瘤微环境的改变，加剧肿瘤细胞浸润和粘附能力的增强，最终促进肺泡上皮细胞的侵袭和转移过程[3,4]；妊娠相关血清蛋白A（英文全称，PAPPA）是妊娠滋养细胞间质成分分泌的糖蛋白，其不仅能够维持妊娠状态，同时还能够提高肿瘤细胞伪足形成的风险，提高上皮细胞突破基底膜组织的能力。为了揭示PAPPA、HSP90α 在肺癌患者中的表达情况，从而深入揭示PAPPA、HSP90α 在 NSCLC 病情进展过程中的作用, 本次研究选取 2016 年 8 月-2018 年 5 月本院经病理学检查确诊的60 例NSCLC 患者, 探讨了PAPPA、HSP90α 的表达及其与肺癌患者临床病理特征的关系。

1 对象与方法

1.1 对象 选取 2016 年 8 月-2018 年 5 月本院经病理学检查确诊的60 例NSCLC 患者为 NSCLC组、体检中心获取的60 例健康成年人作为志愿者为对照组。NSCLC 组，年龄 44～76 岁，平均 61.8±8.2 岁；男 36 例、女 24 例；TNM 分期：Ⅰ期 14 例、Ⅱ期 19 例、Ⅲ期 20 例、Ⅳ期 7 例；病肿瘤部位：中央型24 例、周围型36 例；肿瘤经病理学检查分化程度：高分化 16 例、中分化27 例、低分化 17 例；发生淋巴结转移34 例； 肿瘤直径≥3cm 23 例、＜3cm 37 例。对照组 60 例,年龄 40～75 岁,平均 60.2±12.0 岁；男 31 例、女 29 例。两组患者的年龄、性别比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 相关标准 诊断标准：NSCLC 患者诊断标准参考中华医学会呼吸病学分会制定的标准[5]；纳入标准：⑴患者年龄范围19～79 岁以内；⑵经胸部CT、MRI 检查及病理学检查确诊； ⑶既往未接受放化疗、免疫学治疗；⑷对照组血液标本来源于本院体检中心结果健康的自愿者；⑸本研究符合《赫尔透辛基宣言》相关医学伦理规定。排除标准：⑴合并肺结核、哮喘、慢阻肺、肺部纤维化等疾病；⑵长期使用糖皮质激素、免疫抑制剂；⑶其他部位感染及其他系统的重大疾病；⑷类风湿性疾病、免疫系统疾病患者。

1.3 检测方法 采用患者的肘部静脉血5ml，1000r/min 离心10min，取上清液待测。密封袋中取出实验板条，空白孔中加入样品或者稀释液100μl/孔，检测孔中加入标本100μl/孔, 胶纸封闭实验表条孔,36℃条件下孵育60～90min,磷酸盐缓冲液清洗5次,空白对照孔中加入生物素抗体稀释液100μl，检测孔中加入生物素抗体检测液100μl，胶纸封闭实验表条孔，36℃条件下孵育30～60min，空白对照孔中加入酶结合稀释液100μl，检测孔中加入酶结合检测液100μl，胶纸封闭实验表条孔，磷酸盐缓冲液清洗 5 次,加入 TMB 显色底液（品牌：YSRIBIO湖州英创生物科技公司）,避光36℃孵育15min，加入终止液 100μl，3min 内检测 OD450 值，BioTek 酶标仪购自美国伯腾仪器有限公司。

1.4 统计分析 本研究中所有数据的分析均采用SPSS21.0 版本，计量指标采用±s 表示，组间比较采用t 检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 二组血清 PAPPA、HSP90α 水平比较 NSCLC组患者的血清PAPPA、HSP90α 水平显著高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）,见表1。

表1 二组血清 PAPPA、HSP90α 水平比较（±s）

表1 二组血清 PAPPA、HSP90α 水平比较（±s）

组别 n NSCLC 组对照组t 值P 值60 60 PAPPA（ng/ml）10.84±3.17 6.20±2.53 8.862 0.000 HSP90α（μg/L）381.4±133.9 72.0±26.4 17.560 0.000

表2 不同病理学特征的NSCLC组患者血清PAPPA水平比较(±s)

表2 不同病理学特征的NSCLC组患者血清PAPPA水平比较(±s)

因素 n PAPPA（ng/ml） t 值TNM 分期Ⅰ+Ⅱ期Ⅲ+Ⅳ期吸烟-3.790 33 27 9.27±2.83 12.18±3.11 0.541是 否25 35 11.15±2.81 10.74±2.95分化程度高+中低分化淋巴结转移-1.357 43 17 10.20±3.06 11.33±2.46 3.735是 否34 26 11.74±2.91 8.87±3.00病灶直径（cm）≥3cm＜3cm 0.844 23 37 11.20±2.96 10.52±3.08 P 值0.000 0.590 0.180 0.000 0.402

表3 不同病理学特征的NSCLC组患者血清HSP90α 水平比较(±s)

表3 不同病理学特征的NSCLC组患者血清HSP90α 水平比较(±s)

因素 n HSP90α（μg/L） t 值TNM 分期Ⅰ+Ⅱ期Ⅲ+Ⅳ期吸烟-3.598 33 27 344.0±128.4 461.9±123.6 0.639是 否25 35 394.8±125.4 373.5±128.6 P 值0.001 0.525分化程度高+中低分化淋巴结转移-2.4890.016 43 17 361.0±114.2 445.4±128.7 2.2220.030是 否34 26 413.0±131.4 339.7±120.0病灶直径（cm）≥3cm＜3cm 0.6370.526 23 37 396.0±128.6 375.3±118.3

2.2 不同病理学特征的NSCLC 组患者血清PAPPA、HSP90α 水平比较 不同 TNM 分期、是否发生淋巴结转移的NSCLC 组患者的血清PAPPA 水平组间比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）；是否吸烟、不同分化程度、不同病灶直径的NSCLC 患者血清PAPPA 水平差异无统计学意义(P＞0.05),见表2。

不同TNM 分期、是否发生淋巴结转移、不同分化程度的NSCLC 组患者的血清HSP90α 水平组间比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）；是否吸烟、不同病灶直径的NSCLC 患者血清HSP90α 水平差异无统计学意义（P＞0.05）,见表3。

3 讨论

NSCLC 的发生,能够显著增加肺癌患者的病死率，导致肺癌患者整体临床结局的恶化。在高龄、长期吸烟或者合并有相关乙肝基因携带的群体中，NSCLC 具有更高的发病风险和致残风险[6]。临床上NSCLC 中晚期病情进展的风险较高, 早期疾病的诊断及中晚期临床结局的预测缺乏可靠的指标。通过对于NSCLC 患者病情或者临床病理特征的评估,能够为临床上肺癌的诊疗及病情预后评估提供依据。现阶段临床上已有的相关指标如癌胚抗原等非特异性肿瘤标志物,虽然能够在肺癌的诊断过程中起到一定的参考作用。但癌胚抗原与肺癌患者的组织学分级、 淋巴结转移等病理特征的关系并不密切[7,8]。通过寻找临床上新的NSCLC 指标标志物, 不仅能够进一步揭示NSCLC 的发生机理, 同时还能够为临床上NSCLC 的病情整体评估提供参考。

PAPPA 是妊娠状态过程中滋养细胞分泌的糖蛋白成分，其主要成分为非特异性的多肽结构，能够在上皮细胞连接、 滋养细胞损伤修复等过程中发挥作用。近年来相关研究认为，PAPPA 还能够在其他脏器组织中存在低水平的表达,其表达浓度的维持,能够影响到炎症反应或者恶性肿瘤的发生过程；HSP90α 是热休克蛋白成员,其作为热休克蛋白家族的重要组成成分,能够在癌细胞信号通路的激活方面发挥作用。HSP90α 对于癌细胞转录调控基因的激活，能够增强癌基因的转录翻译速度，促进肿瘤细胞增殖速率的加快[9]。有研究者探讨揭示了热休克蛋白在肺癌患者中的表达情况,认为在肺癌患者中,热休克蛋白的表达浓度或者表达阳性率均可明显上升[9-11]，但对于PAPPA 的表达分析不足。

通过蛋白定量分析技术探讨了PAPPA、HSP 90α 在肺癌患者血清中的表达情况，发现在肺癌患者中，PAPPA、HSP90α 蛋白的表达浓度均明显高于对照组，推测 PAPPA、HSP90α 的高表达均能够影响到NSCLC 的病情进展过程，其中PAPPA、HSP90α 的高表达趋势取决于肿瘤细胞的增殖活跃状态和肿瘤病情进展速度。有其他研究者也发现，在肺癌患者中，PAPPA 蛋白的表达浓度水平虽然仍然维持在较低的水平,但NSCLC 患者中PAPPA 的表达浓度可较正常对照人群上升3~4 倍，同时肺癌患者的短期内恶病质的表现越为明显，PAPPA 蛋白的表达水平的上升越为显著[12]。在探讨PAPPA、HSP90α 的表达与肺癌患者临床病理特征的关系过程中,发现在临床分期为中晚期或者发生了显著引流部位淋巴结转移的患者中，PAPPA蛋白的表达浓度较高，提示PAPPA 的高表达能够显著影响到肺癌的临床病理特征。这分析其原因，主要由于PAPPA 能够提高生长因子的活性，促进癌细胞核DNA 的分裂，增强了癌细胞结构蛋白的合成速度，最终促进了肺癌病理或者生物学行为的恶化。但在不同分化程度的患者中，PAPPA 的表达并无明显的差异，表明PAPPA 并不能影响到肺癌细胞的分化成熟过程。在临床分期进展明显、淋巴结转移或者癌细胞低分化的患者中，HSP90α 的表达浓度较高，表明HSP90α 的表达同样能够显著影响到肺癌患者的临床病理特征。这主要由于HSP90α 能够通过提高癌细胞内MAPK 或者P16/AKT 信号通路的激活，增加了癌细胞上皮-间质转换的风险，诱导了癌细胞粘附淋巴结组织能力的增强，最终促进了相关病理特征的进展[13-16]。

NSCLC 组患者的血清 PAPPA、HSP90α 水平较健康人群显著升高,并能够影响到肺癌患者的临床分期、淋巴结转移等病理特征。