徐州市92 株非结核分枝杆菌菌种鉴定及药敏结果分析

朱春玲，魏素梅，侯远沛，刘成永

（徐州市传染病医院检验科，江苏 徐州 221004）

非结核分枝杆菌广泛分布于水、 土壤和空气中，容易导致免疫功能低下患者的感染[1]。从1990年-2010 年全国结核病流行病学调查报告显示非结核分枝杆菌的分离率逐年上升[2]。非结核分枝杆菌的感染存在地域差异，总体上呈现出南方高于北方，沿海高于内陆，温暖地区高于寒冷地区等特点[3]。徐州地区介于沿海与内陆之间，非结核分枝杆菌的菌种分布及耐药情况未有详尽的报道，分析本院近3 年非结核分枝杆菌感染及药敏情况，为临床诊治提供科学依据。

1 资料和方法

1.1 标本来源 92 例标本来源于 2016 年 1 月-2018 年12 月本院门诊和病房患者,男57 例,女35例，年龄 18~95 岁,平均年龄 54.85±21.21 岁。其中痰液60 例，肺泡灌洗液18 例，菌株13 例，脓液1例。

1.2 试剂和方法 分枝杆菌菌种鉴定试剂由亚能生物技术(深圳)有限公司提供，采用PCR-反向点杂交酶显色法。先将痰液、肺泡灌洗液和脓液用消化液消化后，加入特定的引物进行PCR 扩增，扩增产物和醋酸纤维膜上的分枝杆菌探针杂交,通过酶显色反应,鉴定为何种分枝杆菌。药敏实验采用《结核病诊断实验室检验规程》中的比例法进行[2],所用的 8 种药物分别为:异烟肼(INH)、利福平(RFP)、氧氟沙星(OFX)、乙胺丁醇(EMB)、丙硫异烟胺(TH13 21)、卡那霉素(KAN)、阿米卡星(AMK)、环 丝氨 酸（CS）,培养基为珠海贝索生物有限公司提供。

1.3 仪器选择 PCR 扩增仪为天隆生物科技有限公司提供，型号为TI988；恒温杂交仪为亚能生物技术(深圳)有限公司提供，型号为YN-H16。

1.4 统计学处理 采用 PEMS 3.1 医学统计软件进行统计分析，率的比较采用χ2检验，两组均数的比较采用t 检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

徐州市2018 年非结核分杆菌的感染率与2017、2016 年相比虽有所增高，但差异有统计学意义 （χ2=2.39,1.92;P=0.12,0.16），92 例非结核分杆菌不同年份的构成比,见表1。

表1 92 例非结核分杆菌不同年份的构成比

92 例患者中男性57 例，女性35 例，性别相比统计学差异显著（χ2=10.52,P=0.00）；60 岁以上患者48 例，60 岁以下患者44 例，比较差异有统计学意义（χ2=0.35,P=0.56）。

92 例非结核分枝杆菌采用基因芯片法鉴定出的菌种构成比为： 胞内分枝杆菌64.13%（59/92），堪萨斯分枝杆菌18.48%（17/92），脓肿分枝杆菌5.43%（5/92），龟分枝杆菌 4.35%（4/92），戈登分枝杆菌 3.26%（3/92），鸟分枝杆菌 3.26%（3/92），浅黄分枝杆菌 1.09%（1/92）。

92 例非结核分枝杆菌对利福平的耐药率为89.13%（82/92）、异烟肼为 97.82%（90/92）、氧氟沙星为 84.78%（78/92）、乙胺丁醇为 90.22%（83/92）、丙硫异烟胺84.78%（78/92）、卡那霉素77.17%（71/92）、 阿米卡星为 60.87%（56/92）、 环丝氨酸为79.34%（73/92）。92 例非结核分枝杆菌对 8 种抗结核药的耐药情况，见表2。

3 讨论

非结核分枝杆菌与结核分枝杆菌在形态上难以区分，临床症状和影像学表现极为相似，治疗方案却有所不同。以往菌种鉴定大多采用传统的罗氏培养法，耗时长，作为“金标准”的直接同源基因或序列比较法操作繁琐，设备昂贵，一般实验室难以开展[4]，为满足临床快速诊断的需要，本院引进深圳亚能生物技术有限公司生产的分枝杆菌菌种鉴定试剂，该试剂采用PCR-反向点杂交酶显色法,在一张纤维素膜上一次可鉴定出结核分枝杆菌和22 种非结核分枝杆菌菌种类型，快速方便[5]，为临床诊断和治疗提供科学依据。

据报道全球非结核分枝杆菌的感染率呈上升趋势[6]，2018 年徐州市非结核分枝杆菌的感染率与前两年相比较差异无统计学意义，但有所增高；男性患者的感染率显著高于女性,与北京市的报道相同[7]，60 岁以上老年患者与60 岁以下的中青年患者相比非结核分枝杆菌的总感染率差异不明显,而张汇征等人的研究认为，对于不同种类的非结核分枝杆菌,感染者的年龄分布和性别比例都有所不同[8]。

徐州市非结核分枝杆菌以胞内分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌感染为主,与北京市和甘肃省的报道类似[7,9]，与重庆和贵州的报道略有不同[10-11]，与自贡市的感染情况差异较大[12]，提示非结核分枝杆菌存在一定的地区差异,因此各个地区应该建立本地的菌种谱,为本地区非结核分枝杆菌患者的防治提供参考。

表2 92 例非结核分枝杆菌对8 种抗结核药的耐药情况[n(%)]

非结核分枝杆菌在自然界分布广泛,容易导致免疫力低下患者的机会感染[13]，其毒性和致病性低于结核分枝杆菌,对一线抗结核药物具有高度原始耐药性,本组资料提示徐州市的非结核分枝杆菌对利福平和异烟肼具有较高的耐药性,与临近的宿迁市报道类似,与苏州市的的药敏结果存在一定的差异，尤其是丙硫异烟胺和阿米卡星的差异较大[14,15]，因此各个地区应根据药敏结果合理用药,有利于患者早日康复。

总之，非结核分枝杆菌对一线抗结核药物具有高度耐药性,在患者治疗前采用基因检测法可快速准确的鉴定出分枝杆菌的类型,根据药敏结果精准治疗，既节约治疗费用，又利于患者的康复。