链球菌感染后肾炎患者血LXA4、LTB4、15-LO水平变化的意义

徐可，布海霞，郭利芹

（新乡市中心医院肾内科，河南 新乡 453000）

链球菌是自然界广泛存在的一种细菌,可引发人化脓性炎症、超敏反应性疾病等。链球菌感染后肾炎是链球菌感染引发的常见疾病之一,患者症状以蛋白尿、血尿、水肿以及高血压等为主[1]。本病好发于3~8 岁儿童中，男女比例约为2：1[2]。血脂氧素A4(Lipoxygenin A4，LXA4)是脂氧素家族重要成员,具有抗炎及促炎症反应消散能力； 白三烯B4（Leukotriene B4，LTB4）归属于白三烯家族，是中性粒细胞趋化因子，对单核-巨噬细胞等具有趋化及活化能力； 白细胞15-脂氧化酶 （Leukocyte 15-lipoxygenase，15-LO） 可通过细胞间的相互作用合成脂氧素[3,4]。为分析该三种指标在链球菌感染后肾炎患者中的表达水平及意义,本文选取我院治疗的52 例链球菌感染后肾炎患儿进行研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取 2017 年 1 月-2018 年 5 月在我院治疗的链球菌感染后肾炎患儿52 例为观察组，纳入标准：⑴诊断符合《儿科学》中的标准；⑵发病时间≤3d； ⑶患儿监护人知情同意。排除标准：⑴其他原发性肾小球疾病及慢性肾脏病；⑵合并有肝、心、肺等其他重要脏器疾病、恶性肿瘤、先天性畸形。同时选取健康儿童50 例作为对照组，观察组和对照组一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 两组一般资料比较

1.2 实验方法 抽取两组受检人员外周静脉血各7ml，置于肝素抗凝试管内, 取2ml 血样本选用ELISA 法检测血LXA4和LTB4水平,试剂盒由美国Neogen 公司提供，操作参照说明书进行。采用RTPCR 检测15-LO 相对表达： 取5ml 血样本选用明胶沉降法进行白细胞分离操作,并选用台盼蓝拒染色法检测白细胞活性, 白细胞成活90%显示成功。选用培养液将白细胞浓度调整为2×106/ml，常温下10cm 半径，3600r/min 离心 8min，收集白细胞,选用Trizol 法提取总RNA，参照美国Primega 公司提供的逆转录系统进行 RNA 逆转录，15-LO、β-actin引物序列由上海生工提供，其中15-LO 引物序列为：5’GGTTTTAGCGGTAGGCGGAGT3’ 及 5’CCCAATAAACACGCCAATACGATA3’，将扩增产物进行 PCR 反应 ，条件如 下 ：95℃，5min；92℃，30s；56℃，40s，72℃，10s，72℃，7min，共 35 个循环。选用3%琼脂糖凝胶进行电泳，并选用溴化乙锭进行染色操作，选用UVP 凝胶图像扫描仪读取积分吸光度，并计算15-LO mRNA 相对表达强度[5]。

1.3 统计学处理 统计分析采用SPSS19.0 软件，计量资料采用（±s)表示，组间比较使用t 检验或配对t 检验，计数资料比较使用χ2检验，相关性采用Pearson 相关分析。检验水准 α=0.05。

2 结果

2.1 两组血 LXA4、LTB4和 15-LO 水平比较 观察组血LXA4、LTB4以及15-LO 相对表达量明显高于对照组,差异比较有统计学意义(P＜0.05),见表2。

表2 两组血LXA4、LTB4 和15-LO水平比较

图1 RT-PCR图（1：对照组；2：观察组）

2.2 观察组不同肾功能患者血LXA4、LTB4和15-LO 水平比较 观察组 Ccr＜80 ml/(min·1.73m2)患者血LXA4、LTB4以及15-LO 相对表达量明显高于Ccr≥80ml/(min·1.73m2)患者，差异比较有统计学意义（P＜0.05），见表3。

2.3 相关性分析 将观察组血LXA4、LTB4和15-LO 与 Ccr 进行相关分析，结果显示：血 LXA4、LTB4和 15-LO 与 Ccr 呈负相关 （r=-0.343、-0.320 和-0.351，P＜0.05）。

表3 观察组不同肾功能患者血LXA4、LTB4 和15-LO水平比较

2.4 观察组治疗前后血LXA4、LTB4和15-LO 水平比较 观察组治疗后血LXA4、LTB4和15-LO 相对表达量明显低于治疗前，差异比较有统计学意义（P＜0.05），见表4。

表4 观察组治疗前后血LXA4、LTB4 和15-LO水平比较

3 讨论

链球菌感染后肾炎患者病理改变以毛细血管内增殖性肾小球肾炎为主,患者肾小球伴大量中性粒及单核细胞浸润情况，本病具有明显自限特征，其病理改变可于1~2 月后消失[6,7]。对于链球菌感染后肾炎的自限性，临床认为除与链球菌抗原被机体清除，局部促炎介质消退有关外，还可能与患者内源性炎性反应“刹车信号”脂氧素高表达，导致白细胞浸润衰退有关[8,9]。脂氧素属于花生四烯酸代谢产物，可通过15-LO、5-LO 等合成。脂氧素根据分子羟基位置及构象分为LXA4、LXB4等几类[10]。LXA4是多种自限性疾病及炎症消退的参与因子，并且LXA4缺陷可引发炎症失控[11]。LXA4可抑制TNF-α、IL-1β 等促炎以你这表达,并调节机体免疫应答，改善患者炎症[12]。LXA4可抑制中性粒细胞向炎症部位的转移，并调节促炎/抗炎因子表达平衡，增强单核巨噬细胞趋化,提升其对凋亡中性粒细胞的清除能力[13]。LTB4主要存在于活化巨噬细胞、中性粒细胞内，可通过LXA4水解酶诱导而表达。LTB4已被证实，其在多种肾炎中气道致病效用，而LTB4受体拮抗剂给药后，肾炎小鼠肾小球白细胞浸润及血尿症状可显著改善[14]。15-LO 主要表达于单核巨噬细胞、 上皮细胞以及血管内皮细胞等细胞内。本组研究中，观察组血LXA4、LTB4以及15-LO 相对表达量明显高于对照组，表明15-LO 高表达可促进LXA4亢进，并一定程度增强LTB4表达。有研究发现[15]，肾炎患者急性期血尿LXA4表达水平显著上升，并且合成LXA4的前置介质15-LO 表达水平也大幅上升，而LTB4表达水平上升2 周后逐步降低，分析其原因可能与亢进的LXA4可对LTB4生成抑制效应，但本组研究未证实这一结论，这与本组研究血样抽取时间不同有关。肾炎患者LXA4绝对数量是LTB4的10 倍以上，进一步的研究显示，15-LO、LXA4可抑制白细胞合成 LTB4，同时抑制LTB4 的中性粒细胞趋化能力[16]。但由于炎症患者自身具有的病理状态，患者LTB4水平依然高于健康人群，这也可能是患者LTB4依然较高的原因。本组研究还发现，观察组治疗后血LXA4、LTB4和15-LO 相对表达量明显低于治疗前，表明LXA4、LTB4和 15-LO 高表达与患者症状密切相关，临床或可通过检测 LXA4、LTB4和 15-LO 来评估患者预后。

肌酐是肌酸代谢产物，其分子量较小，可自由通过肾小球排出体外，因此，Ccr 成为临床常用的肾小球滤过功能评估指标。临床研究表明，Ccr＜80 ml/(min·1.73m2)提示肾小球滤过功能衰退。本组研究中，观察组 Ccr＜80 ml/(min·1.73m2)患者血 LXA4、LTB4以及15-LO 相对表达量明显高于Ccr≥80ml/(min·1.73m2)患者，表明 LXA4、LTB4、15-LO 与患者肾小球滤过功能密切相关,或可用于评估患者肾脏功能。相关性研究显示，血 LXA4、LTB4和 15-LO 与Ccr 呈负相关，这佐证了前述研究。

本研究通过分组实验，发现血LXA4、LTB4、15-LO 与链球菌感染后肾炎疾病发生及预后密切相关，同时还可有效反应患者肾脏功能，临床或可通过检测该三个指标来为链球菌感染后肾炎诊断、治疗以及预后分析提供参考意见。但由于本组研究取样地域单一，所纳入的数量有效，研究还存在一定不足，这有待我们进一步的大范围、大样本研究。

综上所述，链球菌感染后肾炎患者血LXA4、LTB4、15-LO 水平升高，与患儿肾功有一定关系，或可成为链球菌感染后肾炎诊治的实验室检测指标。