对SPRINTERXL/Europattern系统检测抗核抗体性能验证

陈甜甜，张春雷，占葆娥，曾学辉，张书楠，陈桂冰

（深圳市中医院检验科，广东 深圳 518001）

间接免疫荧光法 （indirect immunofluorescence，IIF）法是检测抗核抗体(（Antinuclear Antibody，ANA)的参考方法和首选方法[1]。而 IIF 手工操作模式容易受到试剂、操作、显微镜、判读经验、质量控制和滴度系统等多方面的影响，较难实现结果互认。SPRINTER XL+Europattern 全自动荧光免疫分析系统，是欧蒙医学诊断（中国）推出的全自动间接免疫荧光操作/酶联免疫一体机和全自动免疫荧光核型及滴度判读系统。本研究依据WS/T 505-2017《定性测定性能评价指南》[2]和《医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学定性检验领域的应用说明》[3]的具体要求，在全自动荧光免疫分析系统的基础上建立抗核抗体性能验证的方案，对检测系统检出限、诊断符合率和精密度（批内精密度和中间精密度）进行评价,具体报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验样本 收集近4 年卫生部临检中心室间质评样本1511-1515,1521-1525,1611-1615,1621-1625,1711-1715，1721-1724，1811,1813,1814,1821,1822，健康体检人群阴性样本8 例。ANA 颗粒阳性样本1 例（滴度 1:1000），颗粒弱阳性样本 1 例（滴度 1:100），均质弱阳性样本 1 例（滴度 1:100）。所有患者均签署知情同意书。WHO 参考血清，WHO 66/233 ANA 核均质 100 IU/ml；阴性质控品，批号201801001，北京康彻思坦生物技术有限公司；阳性质控品（核颗粒），批号20180918，广州市康润生物制品开发有限公司。

1.2 仪器和试剂 仪器：全自动荧光免疫分析系统（SPRINTER XL+Europattern，欧蒙医学诊断(中国)有限公司）；试剂：抗核抗体IgG 检测试剂盒（间接免疫荧光法），批号 CF171031AE，欧蒙(杭州)医学实验诊断有限公司。

1.3 操作方法

1.3.1 检出限验证

1.3.1.1 实验方案 将100IU/ml 的WHO 参考血清用PBS 按照1:2,1:3,1:4 稀释，将阳性检测结果最低稀释度（稀释度1:3，浓度33.33IU/ml）每天检测4次，连续检测5d，计算阳性检出率。

1.3.1.2 判断标准 阳性检出率≥95%的稀释倍数对应的浓度为改检测系统的检出限。

1.3.2 诊断符合率验证

1.3.2.1 实验方案 用全自动荧光免疫分析系统收集并检测卫生部近年室间质评血清34 例（其中阳性样本20 例，阴性样本14 例。全部样本室温自然解冻，离心取上清，实验前由2 名具有10 年以上工作经验的技术人员手工检测复核，结果与往年室间质评上报结果一致方能入选），体检阴性样本6 例，评估符合率。

1.3.2.2 判断标准 阴性符合率≥80%，阳性符合率为≥80%。

1.3.3 精密度验证

1.3.3.1 精密度验证方案 选取抗核抗体阴性样本2 份、弱阳性样本2 份、阳性样本1 份共5 份样本。每份样本同时检测20 次计算阴阳性符合率评估批内精密度；5 份样本每天检测4 次，连续检测5天计算阴阳性符合率评估中间精密度。

1.3.3.2 判断标准 阳性血清检测的结果，要求特异性、荧光强度基本一致（不超过一个梯度），阴性血清检测的结果为阴性。

1.3.4 质控 每批次实验须同时检测阴、 阳性质控品及阴、阳性对照。质控品和对照结果应与预期结果一致，否则应重新实验。

1.3.5 结果判读 样本、 质控品和对照严格按照说明书由SPRINTER XL 完成稀释及加样、 洗板，封片，由Europattern 自动判读结果，并由2 名工作10年以上的检验医生复核，以人工复核的结果为准。

1.4 结果统计 最低检出限采用IU/ml 表示，符合率和精密度采用百分率表示。

2 结果

2.1 检出限验证结果

表1 检出限验证结果

2.2 诊断符合率验证结果

2.3 精密度验证结果

3 讨论

ANA 阳性常见于系统性或器官性自身免疫性疾病，也可见于感染、 肿瘤患者以及部分健康人群，检测ANA 对自身免疫性疾病的诊断、鉴别诊断、 分型以及活动性监控都有重要意义。IIF 检测ANA 采用的检测基质为人喉癌上皮细胞，其抗原成份丰富，可以检测大量自身抗体[4]，在临床被广泛采用。但目前国内实验室检测现状看，基于IIF方法检测ANA 的性能验证研究较少、性能验证方案尚未形成共识、不同实验室之间ANA 滴度结果的可比性差，缺乏统一的规范和标准，较难实现临床不同医疗机构之间的检验结果互认。近年卫生部室间质评回报结果也显示ANA 准确率高，但滴度结果实验室之间可比性差[5-8]。

CNAS-CL02-A004：2018 《医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学检验领域的应用说明》对定性实验性能验证提出要求，实验室至少应对检出限和符合率进行验证。检出限是由给定测量程序得到的测得量值，对于此值，在给定声称物质中存在某成分的误判概率为α 时,声称不存在该成分的误判概率为β，表明检测系统识别阴、阳性的浓度，但目前ANA 多数厂家试剂说明书并没有这个参数。本研究采用WHO 参考血清做梯度稀释，能够较准确的反应检测系统的检出限，适用于不同实验室、 不同方法学和不同试剂厂家之间进行比对。符合率是检测系统最主要的性能参数，本研究主要采用卫生部室间质评样本进行符合率验证，并参照室间质评合格标准，拟定了验证合格标准为大于等于80%。在符合率验证过程中，笔者不建议自己留样，应选择国家卫生部临检中心、各省市临检中心室间质评样品、 可朔源的企业参考品或专业公司的全球质评样本、 或来源其它已通过15189 认可的实验室。

表2 诊断符合率验证结果

表3 精密度（重复性）验证结果

ANA 检测的自动化、标准化、信息化及实验室之间的结果互认是实验室的发展趋势。本研究中探讨ANA 的性能验证方案建立在欧蒙全自动荧光免疫分析系统（SPRINTER XL+Europattern）的平台上，该检测系统的自动化及标准化程度很高，具有很多优点。第一，研究中对阴性、1:100，1:1000 两种不同滴度不同核型样本进行批内、 批间多次检测，检测滴度和核型一致率100%，表明该检测系统检测具备良好的重复性，结果判读识别稳定。第二，近期在该检测系统与人工判读的比对试验中发现，判读系统与人工判读在单一核型和复合核型都有较高的一致性[10]，表明该系统自动判读结果稳定可靠，具备良好的准确性。第三，该判读系统采用透射光LED 光源，光源寿命长，使用寿命内光强稳定、无衰减，克服传统汞灯光源自然衰减过程中引起的滴度判读差异。笔者认为，只有建立在一个可靠分析系统基础之上的性能验证方案才能够有效保证实验室的检测质量。欧蒙全自动荧光免疫分析系统（SPRINTER XL+Europattern）克服了传统的手工操作在不同实验室之间或同一实验室内部不同员工操作精度和主观判断的影响,保证了准确性和重复性，值得推广。

目前,ANA 检测的临床筛查价值越来越大[11-17],在持续推进ANA 检测质量的过程中，还有大量的工作需要同步推进。第一，ANA 检测标准化在制度上必须保证对技术人员的标准化培训,如卫生部临检中心及各省市临检中心等职能部门不断规范ANA 检测滴度稀释系统。第二，不断改进室间质评方案，室间质评样本应包括《抗核抗体检测的临床应用专家共识》 建议的13 种必报核型以及15 种选报核型[1]，对难以收集的样本可采用图片等方式不断提高实验室判读水平[9]等。第三，实验室内部应加强对检测系统的性能验证和人员比对。只有规范化的培训和标准化的操作,才能够持续不断的提高和保证实验室检测质量。

综上所述，SPRINTER XL+Europattern 全自动荧光免疫分析系统自动化程度高，判读准确，排除了手工操作和主观判读等因素影响，验证结果表明各性能指标能够满足要求，此检测系统能够适用于临床检测，应大力推广。