miR-200a以及上皮性卵巢癌病理特征、预后的关系研究

薛艳军，林丽红 ，高雁荣 ，马媛 ，韩金利

（安阳市肿瘤医院1.妇科；2.检验科，河南 安阳 455000）

临床上上皮性卵巢癌的发病率或者病死率均维持在较高的水平，在具有相关家族史的群体中，上皮性卵巢癌的发病率可显著的上升[1,2]。通过对于上皮性卵巢癌临床预后的评估,能够为上皮性卵巢癌的诊疗提供参考。基因调控因子或者微小RNA因子,能够在恶性肿瘤的发生及中晚期病情进展过程中发挥作用。其中微小 RNA-200a（miR-200a），能够在癌基因的激活,肿瘤基因上游转录活性的调控等方面发挥作用,进而影响到肿瘤细胞的增殖调控。miR-200a 还能够影响到肿瘤细胞内信号通路的激活，进而影响到癌细胞的生物学特征[3,4]。部分研究者探讨了miR-200a 在其他恶性肿瘤患者中的表达情况, 认为在相关恶性肿瘤患者中,miR-200a 的高扩增表现能够显著促进患者病情的进展[5]，但在卵巢癌中的分析不足。为了揭示miR-200a的表达与卵巢癌的关系,本次研究选取在本院病理科经病理学检查证实的卵巢癌组织标本120 例，探讨了miR-200a 的表达及其与卵巢癌患者临床预后的关系。

1 资料与方法

1.1 资料 选取在本院病理科经病理学检查证实的卵巢癌组织标本120 例 (恶性组)、120 例卵巢良性肿瘤组织标本(良性组),组织标本收集时间2012年4 月-2015 年7 月：⑴上皮性卵巢癌患者的诊断标准参考中华医学会妇产科学分会制定的标准[6]；⑵卵巢癌组织来源于手术后，经病理学检查证实，均为上皮性卵巢癌；⑶患者手术前未接受放化疗、免疫学治疗；⑷一般资料、病理学资料完整；⑸本研究符合医学伦理委员会的相关要求。排除标准：⑴合并盆腔、腹腔其他类型肿瘤；⑵生殖系统、泌尿系统、盆腔感染性疾病；⑶自身免疫性疾病、类风湿性疾病。

恶性组，年龄 42～68 岁，平均 57.1±7.0 岁；国际妇产联盟分期（FIGO）标准：Ⅰ期22 例、Ⅱ期58例、Ⅲ期38 例、Ⅳ期2 例；发生淋巴结转移35 例；组织学分化程度：高分化20 例、中分化48 例、低分化52 例；病理学类型：浆液性囊腺癌88 例、粘液性癌32 例；术后辅助性化疗97 例。良性组，年龄 38～69 岁，平均 55.6±8.5 岁；其中黏液性囊腺瘤80 例、浆液性囊腺瘤40 例。两组患者的年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 RT-PCR 技术 取 50mg 组织置入 EP 管内，加入Trizol 进行组织溶解，加入0.3ml 氯仿，室温下震荡30s，放置30min，取上清液待测，加入等体积的异丙嗪溶液，室温放置30min，1000r/min 离心10min，取沉淀物，加入75%乙醇溶液1ml，溶解后1000r/min 离心 10min，取上清液，加入 20μlDEPC水计算 RNA 浓度，单位为：ug/ul。采用 SuperScript IV 逆转录试剂盒（南京碧云天生物公司批号：2018 2748）进行cDNA 合成，采用金斯瑞oligo 进行引物合成和设计，GADPH 作为内参，miR-200a 引物上游 5’ GAGGATGAT TGCTGACGTGGA 下游引物5’TCl CAGATGGTGAGCGAG 一 3’，CISILE2018高通量PCR 仪器购自罗氏检测公司。

1.3 统计学处理 统计分析采用SPSS 21.0 软件，年龄、miR-200a 相对表达等计量资料采用±s 表示，两组间比较采用独立样本t 检验或单因素方差分析法； 多因素分析采用Logistic 回归分析法；P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 恶性组和良性组标本中miR-200a 相对表达水平对比 恶性组标本中的miR-200a 相对表达水平显著高于良性组的黏液性囊腺瘤、 浆液性囊腺瘤，差异具有统计学意义（P＜0.05）,见表1。

表1 恶性组和良性组标本中miR-200a相对表达水平对比（±s）

表1 恶性组和良性组标本中miR-200a相对表达水平对比（±s）

组别 n恶性组良性组黏液性囊腺瘤浆液性囊腺瘤P 值120 miR-200a（相对含量） F 值1.734±0.391 80 40 0.955±0.208 0.978±0.210 38.1090.000

2.2 不同病理学特征上皮性卵巢癌组织标本中miR-200a 相对表达水平对比 FIGO 分期 （Ⅲ期+Ⅳ期）、低分化、发生淋巴结转移、3 年随访死亡的卵巢癌组织标本中的miR-200a 相对表达水平显著高于FIGO 分期（Ⅰ期+Ⅱ期）、高中分化、未发生淋巴结转移、3 年随访存活的患者，差异具有统计学意义（P＜0.05）；不同年龄分组、不同病理学类型的卵巢癌组织标本中的miR-200a 相对表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）,见表2。

2.3 miR-200a 表达与患者预后的关系 以患者的预后结局作为因变量，以FIGO 分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移情况、年龄分组、卵巢癌病理学类型作为自变量，经Logistic 回归分析，卵巢癌患者FIGO 分期（Ⅲ期+Ⅳ期）、低分化、发生淋巴结转移、miR-200a 相对表达高水平是上皮性卵巢癌不良预后的独立危险因素（P＜0.05）；不同年龄、不同卵巢癌病理学类型对卵巢癌患者的预后影响尚不显著（P＞0.05），见表3。

表2 不同病理学特征上皮性卵巢癌组织标本中miR-200a相对表达水平对比（±s）

表2 不同病理学特征上皮性卵巢癌组织标本中miR-200a相对表达水平对比（±s）

因素 n miR-200a（相对含量） t 值P 值年龄（岁）≥55＜55 FIGO 分期Ⅰ期+Ⅱ期Ⅲ期+Ⅳ期淋巴结转移-0.8050.422 78 42 1.701±0.383 1.758±0.344-4.5280.000 80 40 1.612±0.377 1.940±0.368-2.1660.032是 否35 85 1.397±0.359 1.561±0.384组织学分级高+中低分化病理学类型浆液性囊腺癌粘液性癌3 年随访存活死亡-5.0430.000 68 52 1.600±0.380 1.951±0.375-0.6250.533 88 32 1.720±0.368 1.768±0.383-7.6330.000 51 69 1.520±0.355 2.041±0.380

表3 miR-200a表达与患者预后的关系

3 讨论

不同卵巢生发上皮细胞的异常发生,能够显著促进卵巢恶性肿瘤的发生。在多囊卵巢、不孕或者月经推迟绝经的群体中,卵巢恶性肿瘤的发病率可明显上升[7]。通过对于卵巢癌临床预后的评估，能够在卵巢恶性肿瘤的诊疗过程中发挥重要的作用。临床预后相关分子标志物的研究，能够在疾病治疗方案的制定或者患者出院后的随访方面发挥作用。影像学检查虽然能够评估卵巢癌患者的临床病理特征进展情况,但其对于卵巢癌患者临床预后评估的可靠性较低,评估的滞后性及灵敏度并不理想。血清肿瘤指标能够在卵巢癌的诊疗过程中发挥作用,其中虽然现阶段临床上主要采用糖链蛋白125 进而评估卵巢癌的生存预后。但糖链蛋白125 评估卵巢癌临床预后的假阳性率及真性符合率仍然较低,其对于不同病理类型来源肿瘤评估的特异性程度较低[8,9]。而本次研究通过对于卵巢癌患者病灶组织中miR-200a 的表达分析，能够在揭示卵巢肿瘤发生机理的同时,为临床上卵巢肿瘤的生存预后评估提供参考。

miR-200a 是微小RNA 相关家族成员，其主要表达于细胞间质及细胞器周边,在炎症反应或者恶性肿瘤的发生早期，miR-200a 均可发生显著的波动。miR-200a 对于肿瘤细胞内核转录调控因子的激活，能够提高肿瘤细胞DNA 的分裂速度，提高肿瘤细胞异常分化的风险。基础分子生物学领域的研究还认为，miR-200a 对于癌细胞内AKT 信号通路的激活作用，能够增加肿瘤细胞免疫逃逸的风险[10]。部分研究者探讨了miR-200a 在卵巢癌患者中的表达情况，但多数研究者局限于对于miR-200a 的表观浓度表达研究[11,12],缺乏对于miR-200a的表达与卵巢癌生存预后的关系研究。

通过对于卵巢癌病灶组织中miR-200a 的表达分析，可以发现恶性组标本中的miR-200a 相对表达水平显著高于良性组的黏液性囊腺瘤、 浆液性囊腺瘤，差异具有统计学意义，并且在卵巢癌病灶组织中，miR-200a 基因的扩增水平明显的上升，高于卵巢良性组织，差异有统计学意义，表明miR-200a 的高表达能够影响到卵巢肿瘤的发生过程。之所以在卵巢癌中存在miR-200a 的高表达，主要由于肿瘤微环境的改变，影响到了肿瘤细胞非编码RNA 的活性，促进了非编码RNA 的调控异常。有其他研究者也认为,在卵巢浆液性肿瘤或者透明细胞癌患者中，miR-200a 的表达浓度可上升超过40%，在卵巢癌肿瘤高负荷较为明显或者肿瘤发生远处转移的患者中，miR-200a 基因扩增水平的上升更为显著[13-15]。在不同的临床病理特征中，可以发现随着卵巢癌FIGO 分期的进展、肿瘤细胞分化程度的下降及淋巴结转移的发生，病灶组织中miR-200a 基因的扩增水平可显著上升, 相关临床病理特征的进展越为明显，病灶组织中miR-200a的表达浓度越高，提示了miR-200a 的高表达能够显著促进卵巢癌综合性病情的进展。这主要由于miR-200a 的高表达，影响到了卵巢生发上皮细胞的生物学特征,促进了癌细胞粘附和浸润能力的增强，最终促进了FIGO 分期的进展和淋巴结转移的发生； 而miR-200a 对于癌细胞分化程度的影响，主要在于miR-200a 能够干预到肿瘤细胞的分化调控成熟能力。但本次研究并未发现miR-200a 在不同病理类型患者中的表达差异, 提示miR-200a 并不会影响到肿瘤细胞的分化来源。危险因素分析可见，卵巢癌患者 FIGO 分期、 低分化、 淋巴结转移、miR-200a高水平表达，均是影响卵巢癌不良临床结局的风险因素, 临床上对于具有相关临床特征的患者，应早期采用积极的治疗措施，进而改善卵巢癌的临床结局。

综上，miR-200a 在卵巢癌患者中的表达明显上升,在FIGO 分期较晚或者淋巴结转移的患者中，miR-200a 表达较高，同时miR-200a 相对表达高水平可能会增加上皮性卵巢癌不良预后的风险。