P504s、CK-HMW、p63、S-100 蛋白与前列腺癌病理分级的关系

段凯军 李青

（河南省商丘市第四人民医院病理科 商丘476100）

前列腺癌是我国发病率位居前二的男性恶性肿瘤，由于发病隐匿、早期症状不明显，多数患者确诊时已为晚期。 随着直肠超声前列腺穿刺活检技术及血清前列腺特异性抗原（PSA）的应用，前列腺癌的早期检出率已显著提升[1]。 前列腺穿刺活检是诊断前列腺癌的可靠手段， 但活检获得的样本量有限，且在病变不典型的情况下，单凭光镜镜检、苏木精-伊红染色（HE 染色），很难对微小病灶做出明确诊断[2]。前列腺癌病理诊断强调肿瘤细胞异形性、 浸润现象及腺体结构异常，而前列腺癌的病理形态差别不大，光镜下进行病理诊断较为困难，故需要免疫组化协助诊断[3]。 本研究分析免疫组化指标α-甲酰基辅酶A- 消旋酶（P504s）、 人高分子量细胞角蛋白（CK-HMW）、p63 蛋白、S-100 蛋白与前列腺癌病理分级的关系，探讨其对前列腺癌诊断的意义。 现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集我院2017 年1 月～2020 年10 月前列腺穿刺活检标本，前列腺癌标本92 例，纳入PCa 组； 良性前列腺增生标本80 例， 纳入BPH组。 纳入标准：经组织形态学检查，参考免疫组化结果最终确诊为前列腺癌或良性前列腺增生；首次就诊病例。 PCa 组年龄46～79 岁，平均（66.21±7.62）岁；Gleason 分级评分[4]：≤7 分44 例，＞7 分48 例。BPH 组年龄47～82 岁，平均（65.73±7.79）岁。 两组年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 检测方法 所有标本行免疫组化检测P504s，CK-HMW、p63、S-100 蛋白的表达，光镜下观察PCa组标本病理组织学形态，进行Gleason 分级评分。

1.2.1 常规病理观察 将获取的标本采用体积分数为10%的甲醛液固定，石蜡包埋，连续切片，行常规HE 染色。 根据HE 染色切片中肿瘤组织学形态，观察切片中组织形态结构、排列方式及肿瘤浸润情况、间质变化。

1.2.2 免疫组织化学检测 采用免疫组化实验（SP）法进行检测。试剂盒：链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶与生物素标记的第二抗体与底物色素混合液；抗体：小鼠抗CK-HMW 单克隆抗体、DAK-p63抗体、 兔抗人P504s 单克隆抗体（13H4）、 兔抗人S-100 多克隆抗体，均来自Dako 公司。染色步骤：石蜡切片进行脱蜡、水化，并采用自来水冲洗；按照第一抗体相关要求，对组织进行抗原修复；去除磷酸缓冲盐溶液，过氧化物酶阻断试剂滴于切片，孵育10 min（室温）；去除血清，第一抗体滴加在切片上，孵育60 min（室温）或过夜（4℃），磷酸缓冲盐溶液冲洗3 min，反复冲洗3 次；去除磷酸缓冲盐溶液，将生物素标记的第二抗体滴加于切片上，孵育10 min（室温），再采用磷酸缓冲盐溶液冲洗3 min，反复冲洗3 次；去除磷酸缓冲盐溶液，链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶滴加于切片，孵育10 min（室温），磷酸缓冲盐溶液冲洗3 min，反复冲洗3 次；去除磷酸缓冲盐溶液， 将新鲜配制的DAB 显色试剂滴加于切片上；采用自来水冲洗，终止显色，再以苏木素复染，磷酸缓冲盐溶液返蓝；对切片进行梯度乙醇脱水处理，二甲苯透明化，并采用中性树胶封固。

1.2.3 免疫组织化学结果评估[5]由2 名病理医师对免疫组织化学结果进行判断。 显微镜下随机选择5 个视野， 计算各视野中阳性细胞数占上皮细胞总数百分比， 并结合染色强度进行评分。 阳性细胞占比＜1%记0 分， 阳性细胞占比2%～25%记1 分，阳性细胞占比26%～50%记2 分， 阳性细胞占比51%～75%记3 分，阳性细胞占比＞75%记4 分。 染色强度：无染色记0 分，弱染色记1 分，中等染色记2 分，强染色记3 分。 阳性细胞占比评分与染色强度评分相乘为总分，根据总分分为：-，0～1 分；+，2～4 分；++，5～8 分；+++，9～12 分。

1.3 观察指标 比较P504s，CK-HMW、p63、S-100蛋白在PCa 组、BPH 组中的表达阳性率， 及P504s，CK-HMW、p63、S-100 蛋白在不同Gleason 分级中的表达强度； 采用Spearman 相关性分析P504s，CK-HMW、p63、S-100 蛋白表达强度与Gleason 分级的相关性。

1.4 统计学方法 以SPSS20.0 统计学软件及Origin 8.0 软件进行数据处理及绘图。计数资料采用频数表示，进行χ2检验；等级资料比较采用秩和检验；相关性检验采用Spearman 分析。 所有检验均为双侧检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 P504s、CK-HMW、p63、S-100 蛋白表达情况比较 P504s 在PCa 组中表达阳性率高于BPH 组，CK-HMW、p63、S-100 蛋白在PCa 组中表达阳性率低于BPH 组（P均＜0.05）。 见表1。

表1 P504s、CK-HMW、p63、S-100 蛋白表达情况比较[例（%）]

2.2 P504s 在PCa 组不同Gleason 分级中的表达强度比较 PCa 组中，Gleason 评分≤7 分者P504s 表达强度低于Gleason 评分＞7 分者（P＜0.05）。 见表2。

表2 P504s 在PCa 组不同Gleason 分级中的表达强度比较[例（%）]

2.3 CK-HMW 蛋白在PCa 组不同Gleason 分级中的表达强度比较 CK-HMW 蛋白在PCa 组不同Gleason 分级中表达强度差异无统计学意义（P＞0.05）。 见表3。

表3 CK-HMW 蛋白在PCa 组不同Gleason 分级中的表达强度比较[例（%）]

2.4 p63 蛋白在PCa 组不同Gleason 分级中的表达强度比较 p63 蛋白在PCa 组不同Gleason 分级中表达强度差异无统计学意义（P＞0.05）。 见表4。

表4 p63 蛋白在PCa 组不同Gleason 分级中的表达强度比较[例（%）]

2.5 S-100 蛋白在PCa 组不同Gleason 分级中的表达强度比较 S-100 蛋白在PCa 组不同Gleason 分级中表达强度差异无统计学意义（P＞0.05）。 见表5。

表5 S-100 蛋白在PCa 组不同Gleason 分级中的表达强度比较[例（%）]

2.6 P504s，CK-HMW、p63、S-100 蛋白表达强度与Gleason 分级的相关性 Spearman 相关性分析结果显示，Gleason 分级与P504s 表达强度呈正相关性（P＜0.05）， 与CK-HMW、p63、S-100 蛋白表达强度无显著相关性（P＞0.05）。 见表6。

表6 P504s，CK-HMW、p63、S-100 蛋白表达强度与Gleason 分级的相关性

3 讨论

前列腺穿刺活检技术是诊断前列腺癌的金标准，但前列腺癌区别于其他脏器腺癌，其生物学行为及形态结构较为独特。 前列腺癌较少出现单核、多核瘤巨细胞，也少见显著的核异型，主要表现为核仁增大，故传统的恶性指标如核分裂、核异型、血管淋巴管及包膜侵犯对其诊断价值不高[6]。前列腺癌病理诊断主要观察肿瘤细胞异型性、 浸润情况及腺体结构异常改变，由于其病理形态复杂、差别微小，故在光镜下诊断较为困难，需结合免疫组化进行判断[7]。

P504s 是一种前列腺癌细胞标志物， 存在于胞质过氧化物中。 既往研究采用基因芯片筛选发现，P504s 与正常前列腺上皮组织无反应， 而在前列腺癌中过表达[8]。 P504s 在前列腺癌免疫组化染色后，可在低倍镜下区分于正常组织。据文献报道，前列腺癌88%以上胞质内P504s 弥漫性强阳性表达[9]。 本研究中，P504s 在PCa 组中表达阳性率为96.74%，显著高于BPH 组的12.50%，与既往研究一致[10]。 且有充分研究证实，P504s 的表达与前列腺癌的生物学行为有密切关系，P504s 高表达可在一定程度上提示恶性程度高、预后不佳[11]。 Gleason 分级系统是目前应用最广泛的前列腺癌组织病理学分级系统，是根据低倍镜下观察到的腺体生长方式、分化程度、间质浸润状态来评分，可作为前列腺癌诊断、预后的预测指标，与前列腺癌患者病情发展、转归、预后有密切关系[12]。 本研究结果显示，P504s 在Gleason 评分≤7 分的患者中表达强度小于Gleason 评分＞7分的患者；Spearman 相关性分析结果显示，Gleason分级与P504s 表达强度呈正相关性， 表明P504s 与前列腺癌病理分级密切相关，P504s 的表达可能在肿瘤的发生、发展、远处转移中发挥重要作用。

基底细胞缺失是前列腺癌诊断的重要形态学依据[13]。 CK-HMW 是基底细胞的重要标志物，在前列腺腺体基底细胞中存在， 故CK-HMW 高表达提示基底细胞完好未被侵犯，可作为前列腺癌诊断、分期的辅助指标[14]。 p63 是一种核蛋白，可在具有增殖功能的基底细胞层中选择性表达， 故通常只在前列腺良性病变或正常前列腺组织中表达， 而在前列腺癌中不表达或低表达， 其诊断意义与CK-HMW 基本类似[15]。 S-100 蛋白是一种酸性钙离子结合蛋白，是病理诊断中较为常见的免疫组化标志物。 研究显示，S-100 蛋白具有广泛的细胞内外生物学作用，在细胞外具有巨噬细胞激活、白细胞趋化、细胞增殖调节作用，这一功能使其在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用。 S-100 蛋白可与p53 蛋白相互作用，促进p53 蛋白依赖的细胞凋亡， 因此是一种肿瘤抑制因子[16～18]。本研究结果显示，CK-HMW、p63、S-100 蛋白在PCa组中表达阳性率分别为4.35%、4.35%、48.91%，在BPH 组 表 达 阳 性 率 则 为100.00% 、100.00% 、87.50%， 表明CK-HMW、p63、S-100 蛋白均可作为鉴别前列腺良恶性病变的指标。 CK-HMW、p63、S-100 蛋白在不同Gleason 分级中的表达强度差异无统计学意义， 且Spearman 相关性分析结果显示，Gleason 分级与三者表达强度均无显著相关性， 表明CK-HMW、p63、S-100 蛋白并非可有效预测前列腺癌病情发展、预后的生物标志。

综上所述，P504s，CK-HMW、p63、S-100 蛋白在前列腺癌的鉴别诊断中有重要的应用价值，P504s可作为评价前列腺癌病情与预后的重要参考指标。