酸枣仁改善睡眠药理作用及其机制研究

刘莹，管彤，梁昊都，李国玉

(哈尔滨商业大学，黑龙江 哈尔滨 150076)

失眠也称为睡眠障碍，指难以入睡，或睡着后易醒，或醒后再难以入睡，甚至彻夜不眠，导致患者睡眠质量下降，影响患者正常生活、生理功能的一种疾病[1]。脑中睡眠相关神经递质关联情况见图1。中医常用酸枣仁配伍其他中药治疗失眠,其记载最早可追溯到《神农本草经》，之后明代李时珍《本草纲目》中明确指出了酸枣仁在改善睡眠方面的功效以及相应的使用方法。酸枣仁是中医临床最常用于治疗失眠的单味药，也是最早被列为药食同源的中药之一[2]。酸枣仁在改善睡眠方面疗效显著，可以用于长期治疗，是治疗失眠的理想药材。目前已有大量文献对酸枣仁及其配伍组方改善睡眠的机制进行研究，本文将文献中的研究结果进行总结，以期为该药的进一步研究提供参考。

图1 脑中睡眠相关神经递质关联图

1 酸枣仁单味药影响睡眠药理作用及机制

Peng、Yuan等[3-4]让焦虑小鼠口服酸枣仁95%醇提物，发现低浓度酸枣仁醇提物可以缓解小鼠的焦虑状态，高浓度时能有效催眠小鼠，与地西泮相比，酸枣仁作用效果稍慢，但作用时间更长久，服用后对患者学习记忆的损害也比较小。Xie等[5]采用ELISA法检测小鼠腹腔注射酸枣仁提取物后血清中IL-6、IFN-γ、IL-1β、TNF-α、IL-10和IL-4含量,结果发现，小鼠血清中以上物质的含量均有改变，这表示酸枣仁对细胞因子具有一定的调节作用，据此猜测酸枣仁的免疫调节功能和镇静催眠作用与其对细胞因子的调节作用有关。贡济字、赵启铎、李宝莉等[6-8]通过压榨、超临界萃取等方法取得酸枣仁油，发现酸枣仁油在减少小鼠自主活动方面效果显著，能够增加小鼠睡眠次数，延长睡眠时间，减少睡眠潜伏期，这一结论足以证明酸枣仁油同样具有影响小鼠睡眠的作用，其在睡眠方面的作用不能忽视。近年来，研究人员对睡眠已经有了一定的探索与研究,睡眠的调节主要依靠大脑中的血清素、谷氨酸、GABA(γ-氨基丁酸)以及多种神经递质共同调节。Yan等[9]通过UPLC-ESMS/MS及MRM方式发现酸枣仁水提物可以调节大脑中单胺类及氨基酸类神经递质的含量。Wang等[10]发现枣仁中的某些成分还能够与突触处的多种与睡眠相关的受体靶向结合，从而影响睡眠。Martínez、Zhou等[11-12]通过后来的药理研究，最终确认，酸枣仁主要是通过改变GABA和5-羟色胺含量来影响失眠，从而达到镇静催眠的最终效果的。Ma、石皓月等[13-14]提出，酸枣仁能够影响脑中GABA水平，这与谷氨酸脱羧酶(GAD)密切相关。Glu是一种兴奋性氨基酸类神经递质，Li等[15]表示Glu在谷氨酸脱羧酶的作用下能够合成GABA，酸枣仁中的某种活性成分能够激活谷氨酸脱羧酶，从而增强这种这一合成过程，增加GABA的水平最终影响GABA能系统。Ma等[13]表示酸枣仁还能有效增加α-和γ-亚基的表达使GABAA受体对其他药物敏感，达到改善睡眠的效果。

酸枣仁化学成分复杂，现在已经被证实与睡眠相关的有效成分为酸枣仁皂苷类[16]、生物碱类、黄酮类及类黄酮类成分[17]，在延长睡眠时间、缩短受试动物睡眠时间方面效果显著。Jian等[18]通过实验研究发现酸枣仁皂苷的镇静催眠效果比黄酮类成分效果更加明显。

酸枣仁中的皂苷类成分一直是酸枣仁影响睡眠的主要活性成分，但是Jie等[19]通过实验发现酸枣仁皂苷对睡眠的作用受昼夜节律影响明显，白天可以显著增加总睡眠和REM(快速眼动失眠)，但对NREM(非快速眼动失眠)无明显影响，在夜里能够显著增加总睡眠和NREM睡眠。Liu等[20]推测酸枣仁皂苷A(Jujuboside A)可能通过影响血液中的某些化学物质，间接影响与睡眠相关的受体、神经递质等，而不是直接作用于中枢神经系统中的神经递质，从而表现出镇静作用。Zhang等[21]猜测Ju A对谷氨酸的作用与钙调蛋白拮抗剂有一定的相似之处，两者都能抑制细胞内钙离子浓度的升高，谷氨酸通过NMDHR(谷氨酸离子型受体)使钙离子内流，细胞内钙离子含量升高，而酸枣仁皂苷A对这一过程有显著的拮抗作用。Shou、Zhang等[22-23]推测酸枣仁皂苷A是通过谷氨酸介导的兴奋性信号通路抑制大鼠海马的兴奋状态。You等[24]发现低浓度的酸枣仁皂苷能够诱导GABAA受体亚单位(α1，α5，β2亚基)基因表达水平增加，以此增强GABA与受体的结合，经酸枣仁皂苷A处理过的小脑颗粒细胞，可使其谷氨酸脱羧酶(GAD65/67)过度表达。You、Han等[24-25]指出酸枣仁皂苷A也可以通过影响GABA含量来改善睡眠。Zhang等[26]发现患有老年痴呆的小鼠因为睡眠不足，导致兴奋性信号的通路被干扰，由此产生了记忆障碍，而酸枣仁皂苷A能通过改变GABA含量的方式阻止这种损伤。Yoon等[27]表示通过口服酸枣仁皂苷A，可以对因使用KA(红藻氨酸)导致的细胞内钙离子浓度升高有一定的抑制作用，对KA诱导的海马神经元的损伤、凋亡有明显的缓解及保护作用，同时还能增加细胞内氯离子浓度。而且，相比起地西泮，使用酸枣仁皂苷A长期治疗失眠不会产生药物依赖性，低剂量的酸枣仁皂苷A更可能成为治疗长期失眠的潜在良药。Zhang等[28]发现酸枣仁皂苷B是酸枣仁皂苷A主要肠道菌群代谢产物;Wang等[29]成功构建果蝇失眠模型，并给予其酸枣仁皂苷B，结果表明因失眠导致的差异代谢产物的含量逐渐趋于正常数值，证明酸枣仁皂苷B也具有改善睡眠的作用。Song等[30]利用RTFQ-PCR技术顺利发现酸枣仁皂苷B可以提高GABAA受体表达的能力，这就可以提高氯离子通道开启的频率，增加氯离子内流，从而影响睡眠。

孙燕[31]将酸枣仁生物碱与酸枣仁皂苷配伍使用，发现两者合用后的安神作用强于两者单独使用，这间接证明了酸枣仁生物碱的镇静催眠作用，通过测量灌胃前后小鼠血清中神经递质的含量，猜测其解郁安神的机制或许与5-HT、NE含量的增加有一定的关系。杨奕[32]观察应用酸枣仁生物碱的慢性应激抑郁小鼠均比未使用组小鼠的体重、自主活动次数及糖水摄入量明显增加，这一现象再次证明了酸枣仁生物碱具有解郁的作用，同时还发现使用酸枣仁生物碱的小鼠脑内MAO-A、MAO-B活性降低，单胺氧化酶水平降低，单胺类神经递质含量升高，这再次证明了其影响睡眠或许与其能够影响5-HT的含量有关。Ma、Villanaueva等[33-34]证实酸枣仁中阿朴啡类生物碱sanjoinine A与其他GABAA受体激动剂在剂量依赖性下的行为相似，能够激活GABAA受体，Cl-通道打开，Cl-内流增加，最终，突触后膜神经元超极化。Han等[35]发现sanjoinine A能够激活激活GAD65/67(谷氨酸脱羧酶)，从而猜测sanjoinine A是通过增强谷氨酸合成GABA的过程，提升GABA含量的方式影响间接的影响睡眠。同时，Sergio、Du等[36-37]均发现sanjoinine A还是一种很好的钙调素抑制剂，所有这些都证明sanjoinine A在改善睡眠方面作用显著。

酸枣仁中的黄酮类成分也能发挥镇静催眠的作用，黄酮类成分能够通过血脑屏障到达神经中枢是其能够影响睡眠的重要原因之一。Li等[38]通过研究表示酸枣仁中黄酮类成分Spinosin具有强烈的抗焦虑作用。祝凌丽等[39]将酸枣仁中的3种单体成分Spinosin、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B组合使用，发现Spinosin和酸枣仁皂苷B组合可以通过影响GABA水平的方式改善睡眠，由此猜测Spinosin和酸枣仁皂苷B有协同作用，Spinosin能够缩短睡眠潜伏期，增加总睡眠时间，增加NREM(非快速眼动睡眠)和REM(快速眼动睡眠)睡眠时间。Wang等[40]通过实验发现，Spinosin改善睡眠都需要5-羟色胺酸(5-HTP)即五羟色胺的前体物质存在，5-HT能够调节人类神经兴奋，主要负责在神经细胞间传递信息，使人产生愉悦情绪，继而改善抑郁情绪，Spinosin诱发睡眠，与5-HT为协同作用。Wang等[41]猜测Spinosin可能是突触后5-HT1A受体的拮抗剂，显著拮抗5-HT1A激动剂。Lee、Liu等[42-43]明确表示GABA能和5-羟色胺能系统都直接或间接参与了Spinosin的影响睡眠的作用，Spinosin之所以能发挥解郁作用，与GABAA和5-HT1A有很大的关系，但是具体的机制还需要进一步研究。Cheng等[44]利用柱色谱分离酸枣仁95%醇提物，顺利从酸枣仁中首次提取出新的化合物6‴-阿魏酰斯皮诺素(6‴-feruloylspinosin)，Chen等[45]发现使用了酸枣仁水提物的失眠大鼠血浆中Spinosin、6‴-feruloylspinosin、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B几种物质的药代动力学均发生变化，证明6‴-阿魏酰斯皮诺素和睡眠与睡眠有相关性。Li等[46]发现使用了6‴-阿魏酰斯皮诺素的大鼠的自主活动、入睡数量和睡眠时间都有不同程度的改变，这一结果表明，斯皮诺素可与6‴-阿魏酰斯皮诺素共同发挥镇静催眠作用。

酸枣仁中的类黄酮类成分对睡眠的作用同样不可忽视，Li等[47]发现6-羟基黄酮(6-hydroxyflavone)与GABAA受体/苯二氮卓受体有很强的亲和力，通过影响GABA的含量的方式来影响睡眠。

2 酸枣仁配伍方剂改善睡眠的药理作用及机制

徐飞飞等[48]将酸枣仁与党参、茯苓三种药食同源中药配伍使用，发现其水提物在改善氯苯丙氨酸诱导的失眠模型小鼠的睡眠效果显著，通过检查小鼠下丘脑、海马、皮层发现，口服56 g/kg时效果最佳，主要是通过提高下丘脑中5-羟色胺含量，维持海马中Glu/GABA平衡的方式改善睡眠。酸枣仁汤最早见于《金匮要略》，是临床常用的治疗失眠的方剂，对缓解焦虑、改善睡眠状态有明显的作用，郑俊等[49]给睡眠剥夺大鼠灌胃使用酸枣仁汤，与模型组相比，大鼠Glu含量下降，GABA含量增加，酸枣仁汤通过对GABA含量变化的影响来影响睡眠的过程。睡眠被剥夺有时还会引起心肌细胞的凋亡，酸枣仁汤能够有效减缓这种凋亡，对其有一定的拮抗作用。史琴等[50]研究发现酸枣仁汤还可以改变失眠大鼠皮质钠-钾三磷酸腺苷酶和钙-镁三磷酸腺苷酶的活性从而影响失眠，对于因原发性肝癌伴肝血不足引起的失眠也有一定的改善作用。王思宇等[51]发现酸枣仁汤能在提高患者血清中5-HT含量的同时改善患者体内的炎症，在肝癌的治疗中有一定的辅助作用。酸枣仁汤在学习记忆方面也有一定的作用，郭帆等[52]通过实验表示这种功能与抑制海马NLRP3炎性小体通路有关,与正常组比较,模型组大鼠海马中p-IκBα的蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,褪黑素组和酸枣仁汤组大鼠海马中IκBα的蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01)。猜测酸枣仁汤具有改善睡眠剥夺大鼠学习记忆的作用,其机制可能与其抑制海马中TLR4/NF-κB信号通路相关。Fang等[53]发现酸枣仁水提物和丹参乙醚提取物联用能显著缩短戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠潜伏期，增加睡眠时间，延长运动恢复时间,说明酸枣仁和丹参联合治疗失眠症也是一种较好的方法。

3 展望

通过前述文献总结，酸枣仁作为具有镇静催眠的中药，其研究相关报道颇多，基本阐明了酸枣仁依靠皂苷类、酸枣仁油、黄酮类及生物碱类等成分发挥其改善睡眠的药理作用，并主要是改变脑中神经递质GABA、5-HT等的含量从而最终提高睡眠质量，并确认酸枣仁中与睡眠相关的药效物质。以上均为该药的现代药理研究，酸枣仁作为传统中药，是否可以开展其中药特性的相关研究呢？中医关于失眠有“胃不和则卧不安”的理论说法，针对胃气失和导致的失眠，王亮、李曾妮等[54-55]表示临床上常用酸枣仁配伍姜半夏等中药进行治疗；同时，酸枣仁皂苷A经过肠道菌群代谢的产物就是酸枣仁皂苷B，两者均是改善睡眠的活性物质，由此推测，酸枣仁是否也能够通过“微生物-肠-脑”的方式来影响睡眠？这都为酸枣仁的后续研究提供了可能的方向。目前对于酸枣仁药理作用方面的研究主要集中在脑中与睡眠相关神经递质影响上，但是对酸枣仁本身药性及借此对相关脏器(如心脏)和微观物质的作用研究尚有很大空间。酸枣仁在治疗失眠方面效果显著，要想使其在临床上发挥更大效用，尚需相关动物模型的配合，以便对该药的作用机制、药代动力学等方面做更深入的研究和探讨。