分光光度法测定药用辅料中亚硝酸盐的含量

2021-05-12吴兴兴唐力朱怡君伍成祥

生物化工 2021年2期

吴兴兴，唐力，朱怡君，伍成祥

（常州制药厂有限公司，江苏常州 213000）

药用辅料一般情况下被认为是惰性物料，但药用辅料中所含的活性杂质会间接催化或直接参与药物的降解反应。例如，微晶纤维素等诸多辅料中存在的硝酸盐及亚硝酸盐等杂质。一些含胺基团的药物在一定条件下可以与亚硝基发生反应，生成一种基因毒性杂质[1]。虽然辅料中亚硝酸盐杂质的含量较低，但微量的亚硝酸盐即可与某些胺基类药物反应生成基因毒性远超亚硝酸盐本身毒性的杂质。因此，对于胺基类药物制剂，选取亚硝酸盐含量低的辅料是有效控制药品中基因毒性杂质且代价较低的一条途径。

目前，现行版《中国药典》[2]四部收载的质量标准中，未涉及药用辅料中亚硝酸盐的检查方法。在纯化水的“检查”项下也仅以颜色对比的方法对纯化水中亚硝酸盐的含量限度作了定性规定。本文拟利用食品中亚硝酸盐的盐酸萘乙二胺分光光度法对药用辅料中的亚硝酸盐进行检测，探究该方法的精密度、回收率等，并对市场上常见的药用辅料进行检测，以验证该方法的适用性。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

（1）检测试剂：对氨基苯磺酰胺，上海恒远生物科技有限公司；盐酸萘乙二胺、亚硝酸钠、盐酸，南京化学试剂有限公司。

（2）药用辅料：无水磷酸氢钙，湖州展望药业有限公司；磷酸氢钙，连云港德邦化工有限公司；乳糖，KERRY；预胶化淀粉，卡乐康；硬脂酸镁，安徽山河药用辅料股份有限公司；7个生产厂家的微晶纤维素，分别为明台化工股份有限公司、JRS、曲阜天利药业有限公司、FMC、湖州展望药业有限公司、安徽山河药用辅料股份有限公司、江苏西典药用辅料有限公司。

UV2600型紫外分光光度计，日本岛津；ME4002型电子天平，梅特勒-托利多。

1.2 试验方法

1.2.1 溶液的制备

（1）检测试剂：配制浓度为4 g/L的对氨基苯磺酰胺的20%（V/V）稀盐酸溶液；配制浓度为2 g/L的盐酸萘乙二胺溶液。

（2）线性标准溶液：分别称取适量的亚硝酸钠，以纯化水制备浓度分别为0.649 μg/mL、1.326 μg/mL、2.652 μg/mL、5.304 μg/mL、7.960 μg/mL的亚硝酸钠标准溶液；分别吸取1 mL上述亚硝酸钠标准溶液，加对氨基苯磺酰胺的稀盐酸溶液1 mL及盐酸萘乙二胺溶液1 mL，制得浓度分别为0.216 μg/mL、0.442 μg/mL、0.884 μg/mL、1.768 μg/mL、2.653 μg/mL的线性标准溶液。

（3）供试品溶液：分别称取适量的药用辅料，以纯化水制得浓度为0.1 g/mL的储备液。分别吸取1 mL上述储备液，加对氨基苯磺酰胺的稀盐酸溶液1 mL及盐酸萘乙二胺溶液1 mL，制得浓度分别为0.033 g/mL的供试品溶液。

1.2.2 方法学验证

1.2.2.1 确定最大吸收波长

将浓度为0.442 μg/mL的线性标准溶液于紫外分光广度计上进行全波长扫描，得到最大吸收波长。

1.2.2.2 线性考察

于最大吸收波长处检测线性标准溶液的吸光度值，并绘制标准曲线。

1.2.2.3 精密度

将浓度为0.442 μg/mL的线性标准溶液连续进样6次，计算6次吸光值的RSD值。

1.2.2.4 回收率

分别取浓度为2.653 μg/mL、0.884 μg/mL、0.216 μg/mL的线性标准溶液，检测吸光度值，平行测定3次，与根据标准曲线线性回归方程计算而得的吸光值进行对比，计算高、中、低3个浓度的回收率。

1.2.3 药用辅料中硝酸盐含量分析

于最大吸收波长处检测供试品溶液的吸光度值，根据标准曲线回归方程计算供试品中亚硝酸钠的含量。