ACE基因多态性和高血压合并脑出血的关系探讨

胡东伟 林 芬

1.广东省潮州市人民医院神经外科，广东潮州 521000；2.广东省潮州市中心医院，广东潮州 521000

血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme，ACE）是一种广泛分布于循环系统的限速酶，属于肾素-血管紧张素系统[1]。ACE 可通过对血管紧张素Ⅰ的促进作用使其转化为血管紧张素Ⅱ，从而由无活性向高度血管吸收活性转变，最终实现促进醛固酮分泌的目的[2-3]。国内文献[4-7]报道多围绕ACE 基因（I/D）多态性与高血压、左心室肥厚、心肌梗死、扩张型心肌病等心血管疾病的发生密切相关，在脑血管方面可参考研究并不多见。脑出血是一种由遗传因素、环境因素等多因素相互作用与影响而引发的复杂疾病，黄燕等[8]研究指出，ACE 基因的DD 基因型和D 等位基因可提高脑血管病的发病风险，且为自发性脑出血的危险因素。但目前对于非自发性脑出血患者ACE 基因多态性的研究极少报道。基于此，本研究旨在ACE 基因多态性和高血压合并脑出血的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019 年7 月至2020 年7 月广东省潮州市人民医院（我院）收治的35 例高血压合并脑出血患者及35 例健康体检者作为研究对象，全部为汉族。高血压合并脑出血组的纳入标准：既往均有高血压病史且本次体检血压≥140/90 mmHg，经颅脑CT 和神经系统检查均确诊为脑实质出血。两组排除标准：严重心、肾、肝功能不全患者及存在认知障碍或精神病史患者。全部受检者均自愿参与并本人或家属签署知情同意。本研究经我院伦理委员会批准进行。

1.2 方法

1.2.1 DNA 提取 于清晨两组受检者空腹状态下，采集患者EDTA-K2 抗凝血5 ml，选用深圳亚能生物技术有限公司生产的DNA 提取试剂盒，按试剂盒的操作步骤提取基因组DNA，所提DNA 于-20℃保存。

1.2.2 PCR 扩增体系 包括[上游（5’-CTGGAG ACCACTCC CATCCTTTCT-3’）、下游（5’-GATGTGG CCATCACATTCGTCAGAT-3’）各1 μl，均由杭州博日公司提供的Life Express 96 孔PCR 仪基因扩增仪合成引物]、北京艾德莱生物科技有限公司提供的TaqDNA 聚合酶、dNTP 混合物2 μl、Buffer 2.5 μl×模板DNA1 μl。首先5 min 95 ℃预变性后1 min 95 ℃按照变性、随后退火至65 ℃保持1 min、最后升至72 ℃保延长90 s，根据上述顺序进行35 个周期的循环后，终末延伸72 ℃5 min。

1.3 观察指标

1.3.1 一般资料 采用问卷调查方式结合病历资料记录，统计两组患者年龄、性别、吸烟史、饮酒史、体重指数（body mass index，BMI）并比较。

1.3.2 判读基因型 取上述PCR 扩增产物在125 v电压下行2%琼脂糖电泳40 min（DYY-6C 型双稳定时电泳仪，北京六一生物科技有限公司），研究者于紫外灯下摄片并观察，若存在且仅存在1 条490bp 的电泳带标记为Ⅱ基因型，若存在且仅存在1 条190bp 的电泳带则标记为DD 基因型，若上述电泳带均存在且同时出现标记为ID基因型，如图1。统计各基因型出现频率。

1.4 统计学方法

应用SPSS 23.0 软件处理全部数据，用（）表示符合正态分布的计量平均数资料并行独立样本t检验，计数资料用频率表示并行χ2检验，采用平衡定律检验基因型分布，单因素P＜0.05 的项目行多因素Logistics回归分析，P＜0.05 为差异有统计学意义。

图1 ACE 基因I/D 多态性结果

2 结果

2.1 两组各项资料单因素分析

高血压合并脑出血组患者与健康体检患者性别构成、饮酒史差异无统计学意义（P＞0.05）；年龄＞65 岁、吸烟史、BMI 组间差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组一般资料比较

2.2 两组ACE基因频率比较

两组ID、Ⅱ基因型频率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；但高血压合并脑出血患组DD 基因型频率和D 等位基因频率明显高于健康体检者，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

2.3 多因素Logistics回归分析

将单因素分析中差异显著的项目和等位基因频率分别赋值进行二分类多因素Logistics回归分析，结果显示：携带ACE 基因D 等位基因BMI、年龄＞65 岁、吸烟史是高血压合并脑出血的独立危险因素（P＜0.05），见表3 ～4。

表2 各组ACE基因多态频率比较[n（%）]

表3 相关变量赋值表

表4 多因素Logistics回归分析

3 讨论

脑血管病是一种多因素、多基因疾病，其遗传因素研究的重视程度正随分子生物学发展不断提高。蒙兰青等[9]发现，虽然D 等位基因和高血压的发生率无显著相关性，但在高血压合并缺血性脑血管病患者中D 等位基因频率显著增高，故其认为D等位基因和高血压患者并发脑血管病息息相关，并可能是脑血管病发生的独立危险因素。欧阳嵘等[10]检测62 例健康对照者、78 例原发性高血压患者和114 例高血压性脑出血患者的ACE 基因I/D 多态性，结果显示最后一组D 等位基因和DD 基因型频率相较于另外更高，提出ACE 基因DD 基因型可能为中国汉族人群脑血管疾病的遗传标志，且携带D 基因型的高血压患者脑出血易感性更高。但也存在持有否定意见的研究，任庆平等[11]以高原地区藏族人民为对象探讨ACE 基因多态性与脑出血间关系，并得出二者之间并无相关性的结论。

本研究以35 例健康体检者为对照，对35 例高血压合并脑出血患者进行ACE 基因I/D 多态性检测，从以往文献[12]中可总结，高血压与ACE 基因I/D 多态性间相关性并不确定，但诸多研究[13-14]提出，有脑卒中家族史的高血压患者与ACE 基因I/D多态性呈显著相关，提示此方面值得进一步研究。值得注意的是，本研究高血压合并脑出血组患者虽和健康对照组比较差异不明显，但结果可见前者D等位基因和DD 基因型频率明显较高（P＜0.05）。但可能受本研究样本量较少影响，统计学检验具备意义但并不非常显著，故未来可增加样本数量继续深入研究。

Das 等[15]研究发现ACE 基因I/D 多态性与脑出血、脑卒中等脑血管疾病易感性相关。但目前关于脑出血患者与ACE 基因多态性相关研究极为少见且结论并不一致[16]，且关于高血压合并脑出血患者的相关研究更是鲜有报道。本研究结果显示，ACE 基因多态性与高血压合并脑出血的发生密切相关，且携带D 等位基因是其危险因素可显著高血压合并脑出血的发病风险。此外，多因素Logistics回归分析结果还发现BMI、年龄＞65 岁、吸烟史与高血压合并脑出血的发病存在相关性，提示临床应积极评估高龄（＞65 岁）、有吸烟史及BMI ＞25 kg/m2的高血压患者发生脑出血的可能性，并及时给予降压等处理以选择合适治疗方案。

综上所述，ACE 基因多态性携带的D 等位基因与高血压合并脑出血间存在明显相关性，可能是高血压合并脑出血的危险因素，此外BMI、年龄＞65 岁、吸烟史均与高血压合并脑出血密切相关，临床应给予高度重视。