医疗污水中粪大肠菌群测定方法及研究进展

◇保山市疾病预防控制中心 杨秀红

医疗机构污水在排放前要妥善处理，通过做好管控工作，有利于切断传染病传播途径，为人体健康与生态环境安全提供有力保护。抽取辖区内医疗机构污水41份，用多管发酵法（多步骤）、多管发酵法（单步骤）对其进行粪大肠菌测定。医疗机构在污水消毒后1小时，排放前进行采样。本文在分析粪大肠菌群时主要用多管发酵法（多步骤）、多管发酵法（单步骤）等方法，并通过综合比较与研究，提出在现阶段粪大肠菌群测定中能够省略其他步骤，并在严谨的验证与完善后，亦可成为较好的选择。

粪大肠菌群有着极强的耐热特征，在44.5℃±0.5℃温度条件下能够正常生长，在总大肠菌群中属于非常关键的构成部分。粪便内细菌为粪大肠菌群主要来源，并与水中很多病毒的关系非常密切，在缺少活的宿主情况下，肠道病毒一般无法繁殖，进入水环境后期存活能力明确提升，且时间在数天到数月之间。在出现粪便污染现象后，将引起肠道病原菌污染的问题，由此带来肠道传染病以及流行病等情况。基于此对粪大肠菌群的测定具有重要意义，能够对水源被粪便污染的程度作出有力监控与准确反映，相关部门获得检测数据后，能够为制定流行疾病发生与传播的防控方案创造有利条件。近年来污水中粪大肠菌群测定时通常采用多管发酵法。针对这种情况，本文仅对多管发酵法检测进行了研究，并提出了改进措施，旨在为监测人员找到更加有效与简单的测定方式提供可靠依据。

1 技术背景

在污水粪大肠菌群测定过程中，主要根据粪大肠菌群检出结果判断医疗污水是否存在污染。粪大肠菌群含量水平，可以将粪便污染情况反映出来，由此作为其对人体健康危害程度的依据。粪便作为人类肠道排泄物，在医疗污水中不仅包括健康人粪便，也包括肠道患者、带菌者等粪便，因此分辨内既有正常细菌，也含有大量的肠道致病菌，比如志贺氏菌、沙门氏菌等[1]。若是医疗污水内存在粪便污染的现象，将引起肠道致病菌污染的问题，并因此带来流行病，我们必须充分了解其对人体健康造成的潜在危险。在病原微生物传播的防控工作中，需要采取有效、准确的测定手段，在医疗污水粪大肠菌群测定中常用多管发酵法，但是传统方式存在实验步骤多、检测周期长、操作较为繁琐等不足，需要进行研究与分析，找到可行的改进措施。

2 材料与方法

2.1 实验材料

为了准确获取医疗污水中粪大肠菌群的含量，本文在测定中主要材料来源于辖区内41份消毒后的出水。在培养液浓度与量方面，当接种体积为10 mL时，试管中需要装有3倍浓度乳糖蛋白胨培养液5 mL。当接种量不超过1 mL时，需要接种普通浓度乳糖蛋白胨培养液10 mL。

2.2 实验方法

取辖区内41份医疗机构消毒后的出水，按多管发酵法《医疗机构水污染物排放标准》附录A进行。具体来说，在测定粪大肠菌群含量的过程中，主要包括以下步骤：首先，在乳糖胆盐培养液中接种样品，在44 ℃条件下培养24 h；其次，采取平板分离的措施，在EMB中接种产酸发酵管，在37 ℃条件下培养24 h；最后，采取染色镜检的方法，通过革兰氏阴性无芽孢杆菌对第一步的培养液进行接种，并于44 ℃条件下培养24 h。

2.3 数据统计

选择excel和SPSS1 7.0软件对获得的数据进行整理与统计。

3 结果

3.1 水样检测

用多管发酵法（多步骤）和多管发酵法（单步骤）为医疗机构污水处理消毒前后的出水进行比对实验。在检测中应该先对水样进行混合，结合水样污染情况将接种量确定下来，通常来说各样品需要有至少3个水样量接种，相同接种水样量至少为5管[2]。在加入水样的前后，要把培养管关口通过酒精灯进行消毒，再进行封口。

3.2 检测方法－多管发酵法（多步骤）

（1）取污水样品10 ml、1 ml、0.1 ml样品在含有乳糖胆盐培养液的试管内进行接种，试管中设置有小倒管，每个稀释度5管，在44 ℃的条件下培养24 h。

（2）乳糖胆盐培养液变色、产气时小倒管内出现气泡。24 h培养后，在EMB培养基中分别划线接种产酸的试管内培养液。置于37 ℃条件下培养箱中，持续18 h～24 h。

（3）挑取可疑大肠菌群菌落，采取革兰氏染色和镜检等方式。可疑菌落有：①深紫黑色，带有金属光泽；②紫黑色，这类菌落略有金属光泽；③淡紫红色，菌落的中心色比较深。涂片是革兰氏阴性无芽胞杆菌，选择上述1～3个在5 ml乳糖蛋白胨培养液倒管与倒管的试管中接种，在44 ℃条件下的培养箱内保持24 h。取出试管后进行观察，若是其既产酸又产气，则可以判定为粪大肠菌群阳性管。

3.3 检测方法－多管发酵法（单步骤）

取污水样品10 ml、1 ml、0.1 ml样品在含有乳糖胆盐培养液的试管内进行接种，其中同样设置有小倒管，每个稀释度5管，在44 ℃条件下培养24 h。在培养结束后，将试管取出认真、细致观看，若是颜色从紫色变为黄色，且产生了气泡[3]。简单来说就是试管既产酸又产气，则判定为粪大肠菌群阳性管。

3.4 检验结果

在对医疗污水中粪大肠菌群测定过程中，结合不同接种量的发酵管呈现的阳性结果数目，得出具体检验结果如表1所示。

表1 检验结果对比

3.5 讨论

粪大肠菌群作为人体肠道中的一种细菌，当脱落、死亡后将随着粪便由人体排向外界，在微生物分解作用下将形成二氧化碳。若是粪大肠菌群含量超出一定水平，则无法通过微生物对其进行分解，细菌长时间存在外界，将带来污染的问题，影响人们正常生活与社会和谐稳定[4]。对此我国在污水排放标准中明确了粪大肠菌群的含量，若是其含量较高，则表明医院在污水处理上不到位，需要接受相应的处罚与制裁。

在本文中所用的两种方法检测的粪大肠菌群结果，结果完全一致。都可以对水样内微生物污染程度作出准确、全面的判断，这在未来医疗污水厂对水质微生物污染进行评价过程中，将成为一种常用的标准检测方法。

4 结语

总之，粪大肠菌群作为在人和温血动物肠道内生存的肠道细菌，在排泄中会进入外界，在粪便干重中超过了1/3。本文选择多管发酵法的两种方法测定辖区内医疗机构排放污水中的粪大肠菌群含量，并通过对比与分析后获得最终结果。在今后医疗污水粪大肠菌群测定中运用文中提出的方法，可以省略后面几个步骤，能更快捷的得到较准确的数据。