PCR、细菌培养法于阴道细菌检验的应用

闫清

山东国欣颐养集团淄博中心医院检验科，山东淄博 255120

细菌性阴道炎是临床比较常见疾病， 主要是因为细菌感染产生阴道菌群紊乱， 该疾病容易导致阴道内有益菌突然降低，并且被致病菌所取代[1]。 相关临床数据指出， 目前我国细菌性阴道炎的发病率为1.00%左右，如果该疾病患者未得到有效、及时处理，则病情进一步发展的同时， 病情恶化， 临床相关症状进一步加重，并且诱发子宫内膜炎疾病、慢性盆腔炎疾病等。 而且对于女性患者生殖系统而言， 细菌性阴道炎容易造成严重损伤，导致不孕等[2]。 由于细菌性阴道炎患者中大部分的病情缓解发展，因而未表现明显临床症状，致使患者自身及家属均未加以高度重视， 从而当临床就诊时，已演变为盆腔病变累及情况等。 所以，临床结合细菌性阴道炎疾病特点， 需给予开展早期临床检查诊断。 目前临床针对细菌性阴道炎的常规检查诊断方法为细菌培养法，但是该检查方法的耗时较长，而且检查诊断率较低，需要多次细菌培养等劣势，因而未能进行临床广泛应用。聚合酶链式反应（PCR）检验法是一种简易DNA 扩增法，随着该技术逐步成熟，已被越来越运用在临床医学检验中[3]。 该次研究方便选择2018 年6月—2019 年12 月期间该院50 例细菌性阴道炎患者设为对照组，将同时间段50 例细菌性阴道炎患者设为研究组，旨在探讨聚合酶链式反应（PCR）检验法和细菌培养法于阴道细菌检验的应用，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

采用随机数字表方法设计，方便选取该院50 例细菌性阴道炎患者设为对照组，将同时间段50 例细菌性阴道炎患者设为研究组。 研究组有50 例， 年龄23～59岁，平均（31.05±3.20）岁；病程 1～4 年，平均（1.65±0.35）年。 对照组有 50 例，年龄 25～57 岁，平均（30.85±3.85）岁；病程 2～5 年，平均（1.70±0.30）年。 两组的一般资料进行比较，结果显示差异无统计学意义（P＞0.05）。 提示具有临床可比性。

纳入标准:①具有齐全的临床资料；②伴有细菌性阴道炎相关典型症状；③18 周岁以上；④配合完成该次研究工作。 排除标准:①临床相关资料不齐全者；②伴有传染性疾病者；③伴有精神障碍疾病者；④不配合或者不自愿参与者。 该研究所选病例经过伦理委员会批准，患者或家属均知情同意。

1.2 方法

阴道分泌物采集具体操作如下:选择无菌阴道镜，以充分暴露患者宫颈， 于阴道后穹窿处以棉签取适量阴道分泌物，置于无菌时光中作保存，送实验室检查。

研究组（50 例）接受PCR 检验法，具体操作如下:首先放置试管于离心机， 转速调整为12 000 r/min，持续离心10 min，离心结束后，取上清液，并加入适量碱性裂解液；予以加热持续10 min，保持温度处于98℃；接着再放置于离心机，转速调整为12 000 r/min，持续离心5 min，离心结束后，取上清液；制作DNA 模板，添加DNA 即阳性，未添加DNA 即阴性；密切监测PCR 反应产物，予以扩增；常规提取无菌去离子水；作石蜡覆盖表面；行PCR 反应循环（总环数为32 环）。

对照组（50 例）接受细菌培养法，具体操作如下:将阴道分泌物取出，需保障在无菌环境下进行操作；选择无菌接种环并置于细菌分离培养基上进行接种；CO2培养箱温度调整为35℃，时间调整为48 h；持续观察培养物，并取出典型菌落；接着完成生化检验。

1.3 观察指标

比较两组的检测应用效果， 包括检查阳性率以及检查结果（肠球菌、棒状杆菌及加特纳菌的检出情况）。细菌培养检验阳性标准具体为:具有典型菌落，而且菌落为阳性（+）；PCR 阳性标准具体为:边缘整齐，且条带宽度＜1 mm，而且需注意和假阳性进行区别。

1.4 统计方法

经SPSS 23.0 统计学软件分析数据，计数资料采用[n(%)]表示，组间差异比较用 χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组检查阳性率的比较

研究组的检查阳性率高于对照组， 差异有统计学意义（P＜0.05）。 见表 1。

表1 两组检查阳性率的比较

2.2 两组的检查结果比较

研究组的肠球菌阳性率、 棒状杆菌阳性率及加特纳菌阳性率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组的检查结果比较[n（%）]

3 讨论

经临床相关文献资料查阅获知， 女性人群的身体健康状态与其自身白带存在密切相关性， 临床通过给予女性人群开展白带检查， 从而可以有效了解自身身体健康情况，若伴有明显的白带分泌物增多，则需要加强重视，应该尽早接受早期敏感化验检查项目，并结合检查结果从而及时判断是否出现细菌感染[4]。 随着社会高速发展及经济进步的影响下，人们生活压力、工作压力随之加重，以及日常生活习惯、饮食习惯等较大变化等因素影响，导致女性阴道疾病发生率也随之升高，尤其是阴道炎疾病。 就阴道炎疾病的发生发展而言，均与女性人群自身阴道内寄生菌群间平衡特点相关。 女性阴道内寄生菌的正常表现是相互平衡状态现象， 若出现失衡现象， 则会表现为大量的重要维持细菌平衡的细菌死亡， 并促使致病菌增殖明显， 进而出现失衡现象。 病菌繁殖期间会消耗大量营养物质，并且影响阴道上皮细胞代谢功能，从而出现酸碱水平紊乱现象，并且诱发阴道炎症[5]。

细菌性阴道炎的临床感染状态其实是因为混合阴道厌氧菌与阴道加特纳菌相互作用而形成， 从而导致阴道内微生态发生失衡现象， 并演变为显著的阴道分泌物含量增加，以及伴有严重瘙痒灼热症状、伴有白带有鱼腥臭味情况。 经临床相关研究显示，细菌性阴道炎主要包括4 种类型: ①嗜血杆菌类型； ②棒状杆菌类型；③厌氧菌类型；④加特纳菌类型[6]。 在实际临床细菌性阴道炎的发病比较缓慢，而且无显著临床症状表现，或者与其他常见妇科病症存在相似症状， 因此该疾病容易被忽视， 而在临床常规检查中也容易发生漏诊情况[7]。 细菌性阴道炎如果未得到及时有效的诊断与治疗，则随着疾病逐步发展，可演变为盆腔炎、宫颈炎等，个别严重者甚至致使不孕不育症，影响其身心健康、生活质量。 因此，临床需尽早检查、尽早发现、尽早诊断以及尽早给予积极治疗，以改善预后[8]。 PCR 检验法和细菌培养法均作为常用的临床诊断辅助措施， 可以将阴道内的感染类型、 感染程度及阴道内菌群失调情况等准确体现。 细菌培养法是妇科阴道疾病目前的临床诊断“金标准”，可以取得较好的临床检验效果。 但是细菌培养法的临床检出率不理想，而且需要高要求相关检验设备，且操作时间长，因此未能适合推广于临床工作中[9]。PCR 检验法是新型的阴道细菌检验技术， 又称为荧光定量检验法。 PCR 检验法主要是选用一段DNA 作为模板，借助DNA 聚合酶仪器与核苷酸底物的参与作用影响，扩增上述DNA 到足够数量，从而有助于临床进行结构分析、功能分析[10]。 其次，该检验方法的PCR 敏感性良好，其检验精准度、检验检出率均较高。 参考相关临床研究发现，PCR 检验法的操作较简便，而且相对而言，检验设备要求较低，故此可以利于预防出现或者减少偏差等不良情况的发生。

从该次研究结果数据可知: ①与实施细菌培养法的对照组相比较， 实施PCR 检验法的研究组的检查阳性率（90.00%）显著提高（P＜0.05）； 表明开展 PCR 检验法可以更利于临床检验效果的提高， 从而使细菌性阴道炎患者可以尽早接受积极对症治疗，以改善预后。 ②研究组的肠球菌阳性率 （22.00%）、 棒状杆菌阳性率（28.00%）、加特纳菌阳性率（80.00%）均显著提高（P＜0.05）。 研究结果与陈文霞[11]的研究结果“研究组阳性检出率（88.00%）明显高于参照组（54.00%）（P＜0.05）；研究组的肠球菌检出率 （24.00%）、 棒状杆菌检出率（28.00%）、加特纳菌检出率（36.00%）均显著高于参照组（14.00%、24.00%、16.00%）（P＜0.05）。 ”相符合。 证实临床进行阴道细菌检验过程中运用PCR 检验法的检验优势显著，可以快速取得结果，争取更多临床治疗时间以及提高临床治疗效果，改善疾病预后。 综合所得结果可知， 在细菌性阴道炎检验中实施PCR 检验法有更好效果，而且可以取得更高阳性检出率[12]。

综上所述，临床依据细菌性阴道炎疾病特点，在临床进行检查诊断过程中， 与细菌培养法相比较， 应用PCR 检验法的检查阳性率更高， 可以广泛应用于临床检查诊断中。