止泻方剂与肠道菌群关联性探析*

王雪，朱林平

1.天津中医药大学，天津 301617；2.天津中医药大学第二附属医院，天津 300150

随着科研技术的发展，肠道细菌的种类被日益 丰富，人们对其作用的认识也越来越明晰。大量实验证实，止泻方剂能明显调整肠道菌群生物活性，改善临床症状，一些肠道菌群也具有减毒增效作用。目前的研究一般都是通过ERIC-PCR技术记录益生菌及有害菌数量变化来反映中药的抑菌作用，但对其抑菌机制的研究较少。本文以此着手，从菌群活性、抗感染机制、中药在生物体内的转化等方面，探讨常用止泻方剂与肠道菌群的关联性，现论述如下。

1 中药复方对肠道菌群的影响

中药复方可明显增加有益菌数量，减少有害菌数量。目前已知的杀菌、抑菌机制为：①破坏菌体细胞壁、细胞膜结构，使菌体内蛋白质、AKP等胞质内容物外流，从而导致细菌死亡［1］；②阻断菌体蛋白合成路径，使细菌代谢功能紊乱，从而抑制细菌生长［2］；③为有益菌生长提供适宜的肠道内环境，并促使其在胃肠道黏膜表面黏附定植，再利用菌群间的竞争性排斥作用，间接拮抗有害菌生长［3］。现以下列方剂为例，阐述常用止泻方剂对肠道菌群的影响及其抗感染机制。

1.1葛根芩连汤葛根芩连汤具有解表清里的功效，是治疗湿热泄泻的首选方剂。超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）能清除体内生成的过量自由基，过氧化氢酶（catalase，CAT）能催化H2O2分解为H2O和O2，防止细胞膜被过氧化，丙二醛（malondialdehyde，MDA）是造成细胞膜损伤的物质基础。研究发现，葛根芩连汤能明显上调直肠组织中的SOD、CAT活性水平，降低MDA含量，发挥防治直肠炎的作用［4］。余林中等［5］研究发现，方中黄连、炙甘草组合能明显降低小肠推进率，减少腹泻次数。黄芩具有退热作用，与葛根配伍则药效增强；炙甘草能减轻胃肠道实质性损害。刘茜明等［6］用氨苄西林灌胃建立巴马小型猪抗生素相关性腹泻模型，采用葛根芩连汤治疗14 d后，对其不同肠段的细菌菌群结构多样性进行检测，发现较建模之初，乳酸杆菌、双歧杆菌等有益菌数量明显增多，金黄色葡萄球菌、大肠杆菌，1型、2型志贺菌，肠炎杆菌数量明显减少。由此可见，葛根芩连汤具有抗菌、抑制肠道蠕动、解热消炎作用［7］。

1.2保和丸保和丸载于《丹溪心法》，具有增加胃肠运动、提高胃蛋白酶活性、促进消化液分泌、抗感染、降血脂等作用，主要用于治疗消化不良、急慢性胃肠炎、腹泻属食积内停者，其荡涤积垢而止泻的作用机制属“通因通用”治法。方中山楂可消肉食油腻之积，神曲化酒食陈腐之积，莱菔子除谷面之积。在其有效成分中，有机酸能够促进消化腺活动、帮助食物的吸收，改善患者的食欲；橙皮苷能增强肠道平滑肌的收缩运动，促进胃排空和小肠推进；连翘苷的专属性较强，主要清除食积产生的热能［8］。已知消化酶如淀粉酶、蛋白酶主要由肠道自身分泌，纤维素酶、木聚糖酶需要依靠肠道微生物才能产生，其活性可以间接反映相应肠道微生物的变化。有学者通过实验研究发现，保和丸能下调木聚糖酶、淀粉酶、蛋白酶和蔗糖酶活性水平，促进梭菌目、脱硫弧菌目、产氢细菌目菌群数量，减少拟杆菌目、芽孢肝菌目、乳杆菌目、伯克氏菌目等菌群数量［9-10］。

1.3参苓白术散浆细胞是胃肠道黏膜固有层的重要成分之一，它能产生大量分泌型IgA，这是胃肠道防止细菌入侵的主要物质，一旦此过程障碍，致使分泌型IgA缺乏，就会引起胃肠道内有害菌过度繁殖，导致疾病发生［11］，这恰合“百病皆由脾胃衰而生”理论。参苓白术散出自《太平惠民合剂局方》，方中山药健脾益气、补肺脾肾，山药多糖可提高昆明种小鼠肠道内双歧杆菌和乳酸杆菌数量，降低肠杆菌与肠球菌，使肠道微生态趋于平稳［12］。白术、茯苓可降低模型小鼠的肠道pH值，明显促进小肠上皮细胞修复，改善肠蠕动功能，对肠道正常菌群均有扶植作用，并可提高双歧杆菌的黏附性［13］。薏苡仁提取物在体外能促进乳杆菌、双歧杆菌等益生菌生长，抑制有害菌生长［14］。杨旭东等［15］采用参苓白术散灌胃脾虚小鼠，发现其益生菌数量逐渐恢复正常，肠壁肌层厚度显著增加，紊乱的肠黏膜微绒毛、肿胀化线粒体均有显著改善。蒋雨琪等［16］发现，参苓白术散能明显改善腹泻患儿降钙素原、sIgA含量、血清二胺氧化酶及粪便球／杆菌比例水平。保和丸的止泻机制有：①增加SOD活性，下调MDA含量，缓解肠黏膜损伤；②下调促炎细胞因子［肿瘤坏死因子-α、白细胞介素（interleukin，IL）-8、IL-6］水平，上调抗感染细胞因子水平，从而增强肠道免疫功能；③下调血浆金属蛋白酶（由肠黏膜基质细胞和炎性细胞产生，过度表达会促成结肠黏膜损害和炎症发生）水平，改善肠黏膜通透性；④通过促进Occludin蛋白表达，下调Caspase-8蛋白水平而加速受损肠黏膜的修复，通过增加AQP4蛋白表达，改善机体水液代谢功能而达到止泻目的；⑤通过减少p38MAPK蛋白含量，抑制炎症损伤和细胞凋亡［17］。

1.4四神丸四神丸出自《证治准绳》，是治疗脾肾阳虚泄泻的经典方剂，它可从机械、免疫及化学屏障、肠道菌群等方面维持肠道黏膜屏障的完整性，通过调节肠上皮细胞的增殖与凋亡，调节Rho／ROCK、TLRs／NF-kB及Ghrelin-CaM-MLCK信号通路，改善肠道功能［18］。王迪等［19］研究发现，乙酰胆碱、氯化钡可引起肠道痉挛，使肠管平滑肌活动量增加，从而导致腹泻，四神丸对其有明显的抑制作用，可降低脂质过氧化所致细胞毒性，消除肠黏膜炎症。王晓东等［20］用四神丸灌胃脾虚小鼠后，小鼠肠道内杆菌、类杆菌、球菌、乳酸杆菌数量逐渐恢复正常，肠黏膜炎症改善。

1.5痛泻要方目前，较明确的腹泻机制包括肠组织中促炎因子的过度表达、5-羟色胺信号系统的异常、胃肠道菌群平衡失调以及内脏高敏感等［21］。痛泻要方是治疗肝郁脾虚型腹泻的经典名方，出自《丹溪心法》，方中白术含有苍术酮、白术内醋、挥发油等化合物及多糖，对多种有害菌有不同程度的抑制作用，并能提高小鼠血液中白细胞吞噬各种病菌的能力。防风有较强的抑菌作用，能有效抑制绿脓杆菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌的生长［22］。陈皮可以抑制胃溃疡，轻度抵抗幽门螺旋杆菌，改善胃肠蠕动，促进胃排空［23］。痛泻要方止泻的作用机制为：①调控肠道神经介质与免疫细胞间的关系；②调控外周神经丛初级感觉神经元的敏感性；③降低肥大细胞MC相关因子的表达，减少肥大细胞产生；④降低中枢促肾上腺皮质激素释放因子CRF表达，以降低内脏高敏感性，促进肠上皮屏障重建与黏膜修复［24］。另外，研究者发现，痛泻要方还具有调控脑-肠互动、纠正胃肠激素水平、提高免疫力、抑制肠道平滑肌收缩及保护肠黏膜屏障等多种功能［25-26］。

1.6其他低剂量应用黄连解毒汤对双歧杆菌和乳酸杆菌的生长起促进作用，对条件致病性的生长起抑制作用。而长期高剂量服用黄连解毒汤，则会产生类似滥用抗生素的破坏作用，使肠道组织受损［27］。补中益气汤能增强小鼠肠黏膜的免疫功能，使肠道益生菌如枯草芽孢杆菌、肠球菌数量得到提升［28］。大黄牡丹皮汤可以提高保加利亚乳酸杆菌整体的繁殖水平，显著提高代谢产物L乳酸、D乳酸的分泌量［29］。健脾清肠汤可以降低大肠杆菌含量，增加双歧杆菌、乳酸杆菌等有益菌数量［30］。

2 肠道菌群对于中药在体内代谢的生物转化机制

正常情况下，肠道黏膜菌群的表层以肠球菌和大肠埃希菌为主；中层以类杆菌为主；深层以乳酸杆菌和双歧杆菌为主［31］。实验研究发现，乳酸菌对病原菌入侵有较好的抵御作用，能维持肠道内环境稳定［32］。双歧杆菌通过促进B淋巴细胞分化成熟，提高自然杀伤细胞杀伤力，加速T淋巴细胞增殖，从而使宿主建立的免疫系统趋于完备［33］。而条件致病菌如产气荚膜梭菌，则通过产生内毒素来抑制机体免疫功能，从而导致机体疾病的发生。

黄芩苷是黄芩中黄酮苷的主要成分，不能直接吸收，而是在肠道菌群的作用下转化为代谢产物黄芩素后被吸收，在体内重新结合，从而发挥药物作用［34］。葛花的主要异黄酮成分是尼泊尔鸢尾异黄酮，张国哲［35］发现，其在肠道菌群的作用下发生化学反应，产生代谢产物鹰嘴豆芽素A，从而发挥作用。人参的主要活性成分是人参皂苷，它的生物活性很低，在人体内的代谢主要通过双歧杆菌、梭菌等菌群的作用［36］。乌头碱在人肠内细菌的环境下易发生化学反应，使具有较高毒性的双酯型生物碱转化为相对应的单酯型和脂类生物碱，从而降低毒性［37］。华蟾毒精、羟基华蟾毒精可由人肠内细菌分别代谢为去乙酰基华蟾毒精和去乙酰基羟基华蟾毒精，原形化合物能有效抑制癌细胞活性，而其代谢产物无活性［38］，这提示肠道菌群可使药物的某些成分丧失药用价值，也提示含有华蟾毒精等成分的抑癌制剂除口服外，存在更有效的给药途径。

3 结语

止泻方剂与肠道菌群的关联性可简单概括为彼此的双向调节作用。一方面，肠道菌群与中药复方发生化学反应，将不能被机体直接吸收的成分转化为可被吸收的效用成分，进而帮助中药复方发挥作用；另一方面，中药复方不仅可破坏细菌细胞壁、细胞膜结构，阻断其蛋白质合成，抑制有害菌生长，还可促使优势菌群在胃肠道黏膜表面黏附定植，恢复菌群动态平衡状态。因此，临床采用止泻方剂可调整肠道菌群活性，改善菌群紊乱造成的一系列临床症状。目前，关于止泻方剂选择性杀灭有害菌的分子生物学的作用机制尚未明确，且无菌动物造模方法难以达到理想水平。今后应进一步加强相关实验研究，为临床应用提供理论依据。