羊捻转血矛线虫感染及诊断方法研究现状

薄震宇，刘欣超，周金星，靳二辉，李文超，胡忠泽，顾有方*

(1. 动物营养调控与健康安徽省重点实验室，安徽 凤阳 233100；2. 安徽科技学院动物科学学院，安徽 凤阳 233100)

目前，羊在养殖业中占较大的比重，其饲养模式已从传统的农户散养发展到大规模集约化饲养，这有利于统一管理，改善养殖场周围的生态环境，能有效提高生态资源的利用率[1-2]。羊胃肠道线虫病是危害羊健康的主要动物寄生虫病，是不断影响养羊业持续下降之一，大量感染导致羔羊死亡，对全球养殖业产生巨大威胁[3-5]。

养殖户大量使用驱虫药以减少羊捻转血矛线虫感染。然而，捻转血矛线虫对常用的驱虫药具有耐药性。所以，研发出预防捻转血矛线虫感染药物迫在眉睫[6]。此外，肉、奶和其他产品中的驱虫药残留影响人体健康，并引起公众极大关注[7]。本文对捻转血矛线虫的感染情况及诊断方法作一简要综述。

1 羊捻转血矛线虫的感染现状

1.1 总体感染

Raza等[8]和 Singh等[9]分别报道巴基斯坦旁遮普南部和印度马图拉地区山羊捻转血矛线虫的感染率为 31.10%和 53.34%。黄占欣等[10]研究中发现羊胃肠道中存在大量的蠕虫，其中捻转血矛线虫的感染率达到了36.4%，并确定了捻转血矛线虫为邯郸地区羊胃肠道蠕虫中的优势虫种，与许开云等[11]报道的结果相一致。陈亮等[12]使用饱和盐水漂浮法对兰州地区进行羊寄生虫感染研究调查，结果发现捻转血矛线虫的感染为50%。林琳等[13]对山羊采取完全剖检法进行调查，结果发现捻转血矛线虫的感染率为65.61%，福建省各地均有发生。万继成[14]对新蔡县的初步研究中共调查了360份粪便样品，其中感染捻转血矛线虫共有302份，感染率为83.89%，高于魏彩艳等[15]对榆林市的调查结果。可能因为榆林市在2003年的时候就已经开始禁止对羊进行放牧散养，而且也在养殖规模中设置了不少的限制。

1.2 不同地区羊的感染

在我国，捻转血矛线虫广泛分布，不同省份之间的感染率各不相同[16]。张玉仙等[17]对北京地区(平谷、房山、通州、顺义、大兴)5个不同区县的不同规模的羊养殖场进行了捻转血矛线虫的感染调查，结果发现，该虫的感染具有显著的地区差异性，其中通州的感染率竟然高达100%，且与通州养殖户的放牧时间以及放牧的形式有关。通州主要是早晚放牧，而且是散养，而平谷、房山和顺义羊场集约化程度高，防治措施相对完善。

1.3 不同饲养模式羊的感染

黄占欣等[10]研究发现集约化饲养的羊群(11.7%)远远比放牧散养的羊群(90.5%)蠕虫的感染率低。其中放牧散养中羊捻转血矛线虫感染率为66.1%，而集约化饲养的羊群胃肠道捻转血矛线虫感染率只有5%。关于集约化和放牧之间的差异极显著，与王永利[18]在北京地区进行的相关的调查研究的结果是一致的。说明集约化饲养更有利于羊群的身体健康，降低捻转血矛线虫的感染，提高机体的生产性能。万继成[14]在调查河南新蔡县山羊寄生虫感染情况发现捻转血矛线虫为优势虫种，克井镇、大浴镇、坡头镇和王屋镇的4个不同地区的4个规模化养殖场分的感染率分别为71.11%、91.11%、73.33%和62.22%，而4个放牧散养户的感染率分别为82.22%、97.78%、93.33%和100%，新蔡县地区放牧散养户捻转血矛线虫的平均感染率(93.33%)明显高于规模化养殖户(74.44%)，其中王屋镇的散养户感染率竟然达到了100%。

1.4 不同品种羊的感染

研究表明，一些绵羊品种对捻转血矛线虫具有天然抵抗力[19]。由于感染引起免疫应答的相对能力不同，不同品种之间的捻转血矛线虫易感性差异更大，阿萨姆邦山羊的最低感染率可能是由于土著动物有更强的抗病能力[20]。González等[21]比较了加纳利群岛上2个绵羊品种对捻转血矛线虫的易感性，绵羊试验感染了20 000个幼虫，感染后第7天和28天剖检动物，对未成熟的蠕虫计数中没有发现绵羊品种之间的差异。但是，与绵羊品种相比，绒毛绵羊的平均粪便卵数比其他品种绵羊的低，子宫内卵数和雌虫发育不良的数量也较低。表明绒毛绵羊品种对捻转血矛线虫感染有更强的抵抗力，而且这种抵抗力可能在成虫水平上起作用。魏彩艳等[15]对榆林市榆阳区4个不同羊品种进行了寄生蠕虫的初步调查，结果表明不同羊品种的捻转血矛线虫感染率和感染强度各不相同，其中陕北绒山羊的感染率为57.5%，小尾寒羊感染率为37.5%；当地山羊和土种绵羊感染率分别为37.5%和27.5%。土种山羊和绵羊对该虫的感染率普遍低于其他地区引进来的山羊和绵羊，可能是因为当地羊对本土的捻转血矛线虫感染具有一定适应性，习惯了本地的饲养模式与环境，而引进来的羊对本地水土不服，导致身体机能下降，抗病能力降低，感染捻转血矛线虫的程度较高。

1.5 不同季节羊的感染

岳建伟等[22]研究发现临河地区舍饲羔羊消化道线虫排卵的季节动态，捻转血矛线虫全年呈现1个高峰期，为9月份、 6月份出生的夏羔，在9月龄前并没有观察到捻转血矛线虫的感染，而3月份生的春羔在翌年的9月份首次检出捻转血矛线虫，由此推断，捻转血矛线虫的感染时间为6到10月份，夏季感染较为严重。Durani 等[23]也报道了7到8月份捻转血矛线虫的最高感染率，水分的存在有利于幼虫的发育，这与早期观察到感染情况相似。秦建华等[24]报告河北省坝上高原地区绵羊主要胃肠道线虫的季节性发病情况。结果表明，年内有2个高峰期(3至6月份；9至次年1月份)感染，并且捻转血矛线虫有明显的春季上升现象。宋铭忻等[25]报道中国黑龙江省松花江地区绵羊捻转血矛线虫成虫的卵产量和蠕虫感染的季节性发生率，发现年内捻转血矛线虫成虫的卵产量和蠕虫感染达到2个高峰，从 4 月下旬到 5 月下旬，卵的产量和蠕虫感染增加，并在 5 月下旬达到峰值，然后立即下降，直到 7 月下旬，在8 月初达到第2个高峰再次下降，然后一直保持较低水平，直到明年4月份。7月份最热，松花江地区冬季寒冷多雨，夏季炎热多雨，平均气温在 20～25 ℃，而1月最冷，平均温度低于-20 ℃，且年降水量约500 mm。显然，夏季的温暖天气将促进这两个地区的捻转血矛线虫的发展，而冬季的寒冷天气会抑制其发展，从而导致季节动态。

罗拉体等[26]对凉山州高寒山区和二半山区进行调查研究，发现捻转血矛线虫是羊的优势虫种，危害最大，感染率分别为24%和45%。而且在高寒山区和二半山区的羊感染最高峰都是在当地气温比较高的5月份和9月份，二半山区的气温普遍高于高寒山区，致使前者的感染率也高于后者。周才瑛等[27]对浏阳黑山羊进行捻转血矛线虫感染调查，发现不同季度的感染情况不同，春、夏、秋、冬四季分别感染39.1%、46.7%、81.3%、53.3%。感染呈上升趋势。说明气温是影响寄生虫感染的主要因素。

2 诊断方法

到目前为止，捻转血矛线虫感染的临床诊断取决于临床体征和体外培养幼虫的鉴定。死后诊断是调查过程中最常用的方法。此外，近年来也采用了基于虫体核酸的分子诊断方法。

2.1 形态学鉴定

根据形态学鉴定血矛线虫卵。对比进行幼虫体外培养和L3幼虫的鉴定是一种较好的方法[28]。体外培养是通过收集的新鲜粪便中加入适量的锯末或蛭石进行直接培养，然后利用贝尔曼氏收集并鉴定。该方法存在检测灵敏度较低的缺点，尤其是在样本中虫体数量较少时，检测效果更差。

2.2 血清学检测

替代诊断包括ELISA在内的血清学技术，在短时间内更具准确性和更有诊断能力[29]。主要是基于不同抗原(如体细胞和排泄分泌(ES)抗原)的免疫分析，已经被应用来检测特定抗体，主要缺点是共享抗原组成而产生交叉反应[30-31]。ESPs由于具有良好的敏感性和特异性而被广泛用作抗原诊断，发挥重要的免疫作用。肌球蛋白(TpMy)也可检测山羊捻转血矛线虫早期(感染后14 d)感染；潜在的早期免疫诊断抗原，以肌球蛋白为基础的间接ELISA对山羊感染捻转血矛线虫的诊断具有较高的敏感性和特异性，这也是一种血清学诊断方法，比常规显微镜检查更灵敏可靠[32]。免疫印迹在靶蛋白的选择中也起着初步的作用，免疫印迹法和优化酶联免疫吸附试验(ELISA)检测山羊早期感染过程中的捻转血矛线虫[33]。一些发现证明，与常规显微镜检查相比，基于rHc-TpMy的血清诊断是更准确的检测捻转血矛线虫感染的工具。据报道，ELISA和免疫印迹分析是检测山羊感染捻转血毛线虫的潜在诊断工具[34]，Naqvi等[35]以重组肝细胞癌相关抗原59为基础，联合间接ELISA和免疫印迹建立了诊断羊捻转血矛线虫感染方法。

2.3 PCR检测

PCR具有灵敏度高、特异性强、适用于低感染率动物的检测等突出优点，比显微镜和血清学更快速和准确。Elmahalawy等[36]开发了用于检测反刍动物中的毛圆线虫感染的PCR方法。该检测由4个基因特异性的引物/探针组成，能够在多重感染的情况下对目标DNA进行敏感和特异的扩增。在过去的10年里，已开发出多种基于PCR(基于hmcp 3和 hmcp 6半胱氨酸蛋白酶基因、ITS1序列、Hcher-1基因等)的检测方法作为辅助诊断。

3 展望

捻转血矛线虫病传播危害极大，要对其危害有充分的认识。目前，各地羊胃肠道线虫感染依然严重，无论是急性还是慢性，都对饲养户带来严重的经济损失，为了减少养殖户的损失，需要加强捻转血矛线虫病的宣传和学习，让养殖者具备基础诊断和治疗能力。除此尚需开展更多相关研究工作，以实施更具成本效益的控制策略。诸如为了尽早发现耐药性的紧急情况并监测其发展以减少耐药性的不利影响，应评估更高效、更准确的现场检测耐药性方法的效果，在全国范围内调查耐药性的严重程度；开发出更灵敏、更具体的方法，以便在现场使用和检测混合感染。进一步开展与该寄生虫的生物学及其与宿主相互作用有关的基础研究，以建立更有用的诊断方法，开发有效的药物和治疗方法。

捻转血矛线虫病防控单靠药物治疗是远远不够的，为了加快我国羊养殖业的可持续发展，必须加大捻转血矛线虫病的防控力度，加强饲养管理，通过补充蛋白质、微量元素、维生素等方法提高羊的免疫力。