Nectin 4在乳腺癌中的表达及其临床意义*

万洋洋，接晶，陶国华

（南通大学第二附属医院检验科，江苏226001）

乳腺癌在世界范围内是最常见的女性恶性肿瘤，2018年约210万乳腺癌新发病例，约62 679例患者死于乳腺癌[1]。据美国最新数据统计，乳腺癌发病率在女性肿瘤中居第1位，死亡率居第2位[2]。在我国乳腺癌死亡率占女性肿瘤第5位，女性乳腺癌发病率每年增加3%～4%，呈逐年上升趋势。迄今为止，乳腺癌的发病机制尚未完全阐明。

Nectin是近年来发现的一类Ca2+不依赖的免疫球蛋白超家族分子，主要包括Nectin 1～Nectin 4[3]。Nectin 1～Nectin 3主要分布在正常组织中，而Nectin 4主要在肿瘤组织中过表达[4]。Nectin 4属于细胞膜表面受体，可以影响细胞间紧密连接，参与细胞间粘附，进而调控细胞运动、分化及病毒入侵等活动。许多研究证实，Nectin 4分子在肺癌、胃癌、乳腺癌及卵巢癌组织中表达水平升高，并与肿瘤进展及预后密切相关[5]。本研究首先通过数据库分析乳腺癌大样本中Nectin 4的表达及其与生存时间的关系，同时选择2017年3月—2018年6月本院乳腺外科手术治疗的62例乳腺癌及59例乳腺良性肿瘤患者，检测组织及血清中Nectin 4的表达水平，探讨Nectin 4检测在乳腺癌诊断及病情监测中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料行外科手术的121例乳腺疾病女性患者，其中经病理诊断为乳腺癌62例，年龄32～79岁，平均54.7岁，其中导管癌52例，粘液腺癌1例，小叶癌2例，上皮不典型增生2例，髓样癌1例，粉刺癌1例，其它癌变3例。良性乳腺疾病59例，年龄17～84岁，平均40.6岁，其中纤维腺瘤44例。随机抽取本院同期女性体检健康者40例，年龄24～68岁，平均47.8岁。

1.2 检测方法（1）血清Nectin 4表达：抽取受检对象早晨空腹肘静脉血4 mL，加入无任何抗凝剂的真空采血管中，室温放置2 h，3 000 r/min离心15 min，取血清置-70℃冰箱保存待测。采用ELISA法检测，严格按照试剂盒（R&B公司）说明书操作。（2）组织Nectin 4表达：采用免疫组织化学法。将石蜡切片置于新鲜二甲苯中浸泡脱蜡2次，然后依次置于100%、95%、85%、60%梯度酒精中，再置于蒸馏水中，脱二甲苯和水化。加入抗原修复液，高压锅煮沸修复。取出玻片，PBS缓冲液冲洗，加入鼠抗人Netcin 4抗体，4℃孵育过夜。PBS缓冲液冲洗后加入二抗，室温孵育30 min。PBS缓冲液冲洗，加入显色剂显色5 min。苏木素复染，流水冲洗后放入85%、95%、100%梯度酒精中脱水，二甲苯中透明，中性树胶和盖玻片封片。

1.3 统计学处理应用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析。计量资料以±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用t检验。采用ROC曲线分析血清Nectin 4对乳腺癌的诊断价值。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 TCGA数据库中Nectin 4在乳腺癌中的表达水平及其与生存时间的关系TCGA数据库中乳腺癌大样本的测序结果显示，乳腺癌患者Nectin 4 mRNA水平明显高于正常对照组（图1A），Nectin 4与乳腺癌患者总生存率无明显相关性（图1B）。

图1 Nectin 4在乳腺癌中表达水平及其与预后的关系

2.2 乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者组织Nectin 4表达比较本研究对62例乳腺癌及59例乳腺良性肿瘤患者的石蜡切片进行免疫组化检测，显示Nectin 4在乳腺癌组织中表达明显增高，而乳腺良性肿瘤组织中未观察到明显的Nectin 4表达（图2）。

图2 乳腺癌及乳腺良性肿瘤组织中Nectin 4免疫组化检测结果

2.3 乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者血清Nectin 4表达比较乳腺癌患者血清Nectin 4水平高于乳腺良性肿瘤组及正常对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05），而乳腺良性肿瘤组血清Nectin 4水平与正常对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者血清Nectin 4水平ng/L

2.4 不同临床分期乳腺癌患者血清Nectin 4表达比较III/IV期乳腺癌患者血清Nectin 4水平高于I/II期患者，但差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 不同临床分期乳腺癌患者血清Nectin 4水平ng/L

2.5 血清Nectin 4水平与乳腺癌淋巴结转移的关系乳腺癌淋巴结转移组血清Nectin 4水平高于未转移组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 血清Nectin 4水平与乳腺癌淋巴结转移的关系ng/L

2.6 血清Nectin 4在乳腺癌诊断中的价值ROC曲线分析发现，血清Nectin 4对乳腺癌诊断的灵敏度为77.4%，特异度为67.8%，阳性似然比2.4，阴性似然比33.3%，曲线面积（AUC）为0.722，标准误为0.047，95%可信区间下限0.630，上限0.814，Youden指数0.45，表明血清Nectin 4可以辅助诊断乳腺癌（图3）。

图3 血清Nectin 4 ROC曲线分析

3 讨 论

尽管外科手术联合放疗化疗明显改善了乳腺癌患者的预后，但晚期转移及乳腺癌复发患者的病死率仍较高[6]。因此，寻找新的乳腺癌分子标志物以及治疗方案是提高患者生存率的必经之路。Nectin 4主要通过调节上皮细胞及内皮细胞的连接来介导细胞间黏附[7]。有研究报道，Nectin 4还是犬科病毒的上皮细胞受体，并与细胞毒性相关[8]。Nectin 4在成年人正常组织中多不表达，而在肿瘤组织中高表达[9]。过表达的Nectin 4通过活化AKT信号通路促进上皮间质转化（EMT），导致甲状腺癌的增殖、迁移和侵袭[4]。Nectin 4高表达与卵巢癌不良预后有关[10]；Nectin 4蛋白在非小细胞性肺癌中的表达水平明显升高，有望成为肺癌诊断及治疗的分子靶点[11]。

本研究对TCGA数据库中乳腺癌大样本测序结果进行分析，发现乳腺癌组织中Nectin 4 mRNA表达水平明显升高。本研究结果显示，乳腺癌组织中Nectin 4表达呈强阳性，乳腺癌患者血清中Nectin 4水平明显高于乳腺良性肿瘤和正常对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05），与其它文献报道的结果一致，提示Nectin 4高表达可能与乳腺细胞的恶性进展有关。目前有报道Nectin 4表达水平与乳腺癌组织病理类型相关，但由于本研究样本量小，且大多数为浸润性导管癌，其它类型乳腺癌较少，无法进行统计分析。本研究结果显示，乳腺癌淋巴结转移组血清Nectin 4水平高于未转移组，差异有统计学意义（P＜0.05），说明Nectin 4与乳腺癌淋巴结转移密切相关。其机制可能是Nectin 4高表达有利于细胞间黏附断裂，细胞运动增强，从而引起肿瘤细胞向周围组织浸润及远处转移。ROC曲线分析发现，血清Nectin 4对乳腺癌诊断的灵敏度为77.4%，特异度为67.8%。

综上所述，乳腺癌组织及血清中Nectin 4高表达，淋巴结转移患者Nectin 4表达更高，提示Nectin 4高表达与乳腺癌的发生发展有关，并促进乳腺癌细胞的浸润及转移，Nectin 4有可能成为乳腺癌诊断和预后监测的潜在分子标志物。