幽门螺杆菌感染胃炎患儿胃黏膜ASICs表达在胃肠道动力中的作用

2021-04-13王金坤袁丽萍李欢肖红云

实用医学杂志 2021年6期

王金坤袁丽萍李欢肖红云

1安徽医科大学附属阜阳医院（安徽阜阳236000）；2安徽医科大学第一附属医院（合肥230022）

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）与慢性胃炎及消化性溃疡、胃癌、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤、胃食管反流病、功能性消化不良的发病机制密切相关已被公认［1］。Hp感染在儿童中非常常见，近年来有越来越多的病例被报道［2］。正常情况下，Hp在pH ＜4 的酸性环境下无法存活。研究发现，感染了Hp的患儿其胃内的pH 值比没有感染的患儿高［3］。

酸敏感离子通道（acid-sensing ion channels，ASICs）是细胞外酸化激活的离子通道，属于上皮钠通道ENaC（epithelial sodium channels）∕退化因子基因DEG（degenerin）家族，在神经组织中高表达［4］。ASICs 与细胞外H+的变化密切相关，在正常和病理条件下都能精确地感受到pH 值的变化［5］。本研究探讨了胃黏膜ASICs 的表达及其在Hp感染患者胃肠功能中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取30 例主诉反复腹痛、恶心、呕吐于2017年5月至2018年12月在我院儿科进行上消化道内镜检查的30 例住院患儿为研究对象。本研究纳入22 例经内镜检查诊断为胃炎的患者，分为Hp阳性组（n= 11）和阴性组（n= 11）。采用快速脲酶或C13 呼气试验来明确Hp感染。如果其中一项测试结果呈阳性，则被认为是Hp感染。22 例患者均取胃窦黏膜活检标本，用甲醛固定。所有患儿内镜检查前均无服药史。本研究经医院伦理委员会批准，并取得患儿父母书面知情同意。

1.2 免疫组化法检测胃窦黏膜ASIC1a、ASIC2 和ASIC3 表达按照免疫组化试剂盒说明书对胃炎患儿胃黏膜ASIC1a、ASIC2、ASIC3表达进行评估［6］。以上皮细胞胞浆呈棕黄色染色为阳性细胞，取每张切片的3 个视野在400 倍显微镜下观察并计算免疫组化分数。免疫组化分数=阳性细胞平均光密度值×染色阳性的黏膜面积∕总黏膜面积。

1.3 ELISA 方法测定血清中CCK、SP、GAS 和MTL 水平住院患儿于次日上午8 ～10 时采血，1 300 ×g离心10 min，分离血清-80 ℃保存待测。按照ELISA 试剂盒说明书测定血清中CCK、SP、GAS 和MTL 水平，用ng∕mL 表示。

1.4 统计学方法血清CCK、SP、GAS 和MTL 以及胃黏膜ASICs 表达以均数±标准差表示，采用t检验进行统计学分析。采用Pearson 相关性分析ASIC3表达与血清胃肠激素的相关性。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况分析22 例胃炎患儿，男14 例，女8 例，年龄6 ～14 岁，平均（10.32 ± 2.18）岁。Hp阳性组男7 例，女4 例，年龄（10.72 ± 2.18）岁；Hp阴性组男7 例，女4 例，年龄（9.91±2.11）岁。两组间性别、年龄差异无统计学意义。

2.2 胃窦黏膜组织中ASIC1a、ASIC2 和ASIC3 表达ASIC1a、ASIC2 和ASIC3 阳性细胞主要分布在胃炎患儿胃黏膜的内膜上皮和腺管中，在细胞膜内可见褐色或黄色表达颗粒。在所有胃炎患儿胃黏膜中可见散在、稀疏的ASIC1a 和ASIC2 表达的阳性细胞（图1B-C、E-F）。然而，Hp（+）患儿胃黏膜中ASIC3 表达阳性细胞较多，而Hp（-）患儿胃黏膜中ASIC3 表达阳性细胞较少（图1A，D）。此外，ASIC1a、ASIC2、ASIC3 表达半定量证实胃窦黏膜ASIC3 蛋白表达在Hp感染与非Hp感染患者之间差异有统计学意义（P＜0.01）。见表1。

图1 免疫组化法检测胃炎患儿胃窦黏膜ASIC1a，ASIC2 和ASIC3 表达（×400）Fig.1 Expression of ASIC1a，ASIC2 and ASIC3 in gastric antrum mucosa of children with gastritis detected by immunohistochemistry（×400）

2.3 血清中CCK、SP、GAS 和MTL 水平Hp（+）组患儿血清CCK 和SP 水平明显高于Hp（-）组患儿（图2A-B）。Hp（+）组患儿血清MTL 水平明显高于Hp（-）组患儿（图2D）。但Hp（+）与Hp（-）组患儿血清GAS 水平差异无统计学意义（图2C）。

表1 胃炎患儿胃窦黏膜ASIC1a、ASIC2 和ASIC3 表达分析Tab.1 Expression analysis of ASIC1a，ASIC2 and ASIC3 in gastric antrum mucosa of children with gastritis±s

注：与Hp（-）组比较，**P ＜0.01

免疫组化分数（%）组别Hp（+）组Hp（-）组例数11 11 ASIC1a 0.138±0.042 0.129±0.044 ASIC2 0.202±0.049 0.185±0.039 ASIC3 0.304±0.028**0.230±0.030

2.4 ASIC3 表达与血清CCK、SP、GAS、MTL 水平的关系分析ASIC3与血清胃肠激素的关系结果表明，ASIC3 的表达与血清CCK、SP 和MTL 的分泌有显著相关性（R= 0.539，P= 0.01；R= 0.516，P=0.014；R=0.495，P=0.019），见图3。

3 讨论

图2 ELISA 法测定血清CCK、SP、GAS 和MTL 水平Fig.2 Serum levels of CCK，SP，GAS and MTL were determined by ELISA

ASICs 属于DEG∕ENaC 家族成员，是一种由细胞外酸激活的阳离子通道。ASICs 已被证实参与多种生理病理过程，如肿瘤、炎症、缺血损伤、胃肠道疾病等［7-9］。有实验研究表明，ASIC3 在胃炎和消化性溃疡的情况下可促进胃酸过敏和疼痛，也参与结肠过敏［10］。

Hp感染是儿童慢性胃炎的病因之一［1］。正常儿童胃液pH 值＜4.0，可以抑制大部分细菌的生长，在胃内形成相对无菌的环境［11］。然而，Hp可以通过激活存在人胃中的一种细胞质脲酶，这种酶将尿素分解为CO2和NH3，从而增加胃腔的局部pH 值［12］。此外，日本男性患者的研究显示，Hp对酸性分泌有较强的抑制作用［13］。PARK 等［14］报道，Hp感染儿童的pH（pH ＞4）高于胃正常pH（pH ＜4）。ASIC3 对细胞外pH 最敏感，其激活阈值为pH 7.2左右［15］。本研究发现感染Hp的胃炎患儿胃黏膜中ASIC3 的表达较未感染Hp的患儿显著增加，而ASIC1a 和ASIC2 的表达却没有增加，提示胃内Hp可上调胃黏膜ASIC3 的表达。

据报道，ASICs 与功能性胃肠疾病相关［10］。本研究测定了CCK、SP、GAS 和MTL 胃肠激素水平来探讨ASICs 与胃肠功能的关系。CCK 能刺激胆囊收缩和胰腺分泌，促进肠道运动，抑制幽门括约肌收缩；对餐后胃运动有抑制作用，对胃排空有延缓作用［16］。SP 是存在于胃肠道系统肌肠和黏膜下神经丛的一种神经肽，实验研究表明，SP 在胃肠道中发挥肌肉收缩、上皮离子转运、血管通透性和免疫功能调节等作用［17］。本研究表明，与未感染Hp的患儿相比，Hp感染的患儿血清CCK 和SP 水平显著升高。此外，CCK 和SP 的释放与胃炎患儿胃黏膜ASIC3 的表达密切相关。