ACTL6A在宫颈癌中的表达及意义

牛丽娟 刘俊霞 苗立坤

（1.漯河市郾城区人民医院，河南 漯河 462300；2.漯河市中心医院，河南 漯河 462000）

宫颈癌是全球第四大最常见的女性恶性肿瘤，鳞状细胞癌和腺癌是最常见的组织学亚型，分别占子宫颈癌的70%和25%左右。尽管过去十年中在预防、筛查、诊断和治疗宫颈癌方面取得了进步，但该病发病率和致死率仍然很高。因此，早期针对宫颈癌特定的分子标记物进行测定尤其重要[1]。肌动蛋白样蛋白6A（Actin-like 6A，ACTL6A），也称为BAF53a/Arp4/INO80K，是一种肌动蛋白样蛋白，是ATP依赖的SWI / SNF样BAF染色质重塑复合物的成员，该复合物编码肌动蛋白相关蛋白家族[2]。研究显示ACTL6A与各种细胞过程有关，包括染色质重塑、转录调控、囊泡运输和核迁移[3]。最近一项研究发现，ACTL6A与神经祖细胞的分化和增殖有关[4]，而且在鳞状细胞癌细胞的增殖中也起重要作用，参与表皮和鳞状细胞癌的分化过程[5]。但是，ACTL6A在宫颈癌中的作用尚未见报道。

本研究采用免疫组化法检测宫颈癌及相应癌旁组织中ACTL6A的表达情况，分析其与临床病理参数之间的关系，以期为乳腺癌早期诊断及预后评估提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2012年1月至2015年1月在我院手术切除并保存的93例宫颈癌癌组织和癌旁组织（距离癌组织≧1 cm）石蜡标本进行研究。所有患者均经病理确诊，术前均未接受化疗和放疗，年龄25~83岁，中位年龄58岁。研究实施前均告知并签署知情同意书，并获医院伦理委员会批准。

1.2 免疫组织化学染色测定组织ACTL6A的表达

常规切片、脱蜡、水化、及抗原修复后，用Tris缓冲盐水（TBS，pH7.6）洗涤，并以80%甲醛浸泡20 min阻断过氧化物酶活性，再用TBS洗涤两次，滴加ACTL6A兔抗人抗体（1: 50，Santa Cruz Biotechnology）4℃下孵育过夜（8 h）；TBS洗涤两次，滴加稀释度为1：200的二抗（抗山羊抗体，Santa Cruz Biotechnology）30 min，TBS洗涤两次，滴加DAB，并在室温下放置5 min后洗涤、苏木精复染，然后脱水、透明、封片、镜检。以PBS代替一抗作为阴性对照。ACTL6A主要表达于细胞核，染色为黄色颗粒即阳性细胞。

1.3 判定标准

由两位病理科医师结合阳性细胞比例和染色强度做出判断。阳性细胞比例评分：阳性细胞<1%为0分，1%-24%为1分，25%-49%为2分，50-74%为3分，75-100%为4分；染色强度记分：无染色细胞为0分，黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分，两者相乘≥3分为阳性。总积分0-2分：-，3-4分：+，5-8分：++，9-12分：+++。-/+低表达，++/+++高表达。

1.4 统计学分析

采用SPSS20.0进行统计学分析。计量资料以均数±标准差（±SD）表示，采用t检验。计数资料用率（%）表示，采用X2检验，应用Kaplan-Meier生存曲线和log-rank检验进行生存分析，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 癌组织和癌旁组织中ACTL6A的表达差异

癌组织和癌旁组织ACTL6A蛋白表达水平呈现明显差异（F=11.278，P<0.05），其中宫颈癌癌组织ACTL6A阳性表达率明显高于癌旁组织（63.5% vs 27.9%，X2=9.126，P<0.05），见图1。

图1 免疫组化测定ACTL6A蛋白表达（×100）

表1 ACTL6A蛋白的表达率（例（%），n=93）

2.2 ACTL6A蛋白表达与宫颈癌临床病理参数的关系

ACTL6A蛋白高表达与宫颈癌的淋巴结转移、组织学分解、TNM分期相关，而与患者年龄、肿瘤大小无关，见表2。

2.3 ACTL6A与宫颈癌生存的相关分析

所有患者均接受门诊或电话随访，随访时间3-60个月。在宫颈癌癌组织中，ACTL6A蛋白高表达患者总生存明显低于低表达患者（X2=7.126，P=0.038），见图2。

2.4 多因素Cox回归分析

Cox逐步多因素分析显示，淋巴结转移、组织学分级、TNM分期和ACTL6A均是宫颈癌患者预后的独立影响指标，见表3。

3 讨论

宫颈癌是全球女性中第四大常见癌症，发病率和致死率较高，目前临床上主要还是采用手术、放疗、化学疗法或联合疗法进行治疗，但临床效果不明显。ACTL6A是ATP依赖的SWI/SNF样BAF染色质重塑复合物的成员，在调节核转移、染色质重塑和转录调节中起着至关重要的作用。

图2 生存曲线

ACTL6A在祖细胞和干细胞中的表达升高，并且在促进细胞自我更新和抑制分化中起重要作用；同时也是多种癌症中潜在的致癌基因，在横纹肌肉瘤、肝细胞癌、神经胶质瘤和结肠癌等多种癌组织中高表达[6]。本研究中，宫颈癌癌组织的ACTL6A阳性表达率明显高于癌旁组织，说明ACTL6A高表达与宫颈癌的发生存在一定的联系。而且，研究结果显示ACTL6A蛋白高表达与宫颈癌的淋巴结转移、组织学分解、TNM分期相关，其中发生淋巴结转移、组织学分级G2+G3期、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期中ACTL6A表达水平较高，说明ACTL6A参与宫颈癌的进展，并与癌细胞的迁移和浸润相关。

表2 ACTL6A蛋白表达与宫颈癌临床病理参数的关系（例（%））

表3 多因素Cox回归分析

研究发现，ACTL6A的过表达促进结肠癌细胞的迁移和侵袭，说明ACTL6A在体外可促进结肠癌的发生、发展[8]。而且Xiao等研究发现，ACTL6A在肝细胞癌细胞和组织中明显上调，这种高水平ACTL6A与侵袭性临床病理特征相关，是肝癌患者总体生存和独立不良预后因素，同时ACTL6A异位表达在体外显著促进HCC细胞迁移、侵袭[9]。

本研究多因素Cox回归分析显示淋巴结转移、组织学分级、TNM分期和ACTL6A均是宫颈癌患者预后的独立影响指标，说明ACTL6A参与了宫颈癌的发生、发展，宫颈癌癌组织中ACTL6A的表达可作为判断宫颈癌病理类型的参考指标。而且在宫颈癌癌组织中，ACTL6A蛋白高表达患者与低表达患者相比，总生存较差，提示ACTL6A可以反映宫颈癌患者预后，并可以作为宫颈癌治疗的新的靶点。

总之，ACTL6A与宫颈癌的发生和进展关系密切，是判断宫颈癌患者预后的重要指标，并可能成为宫颈癌治疗的新靶点。