间接免疫荧光法检测IgG型抗内皮细胞抗体在川崎病诊断中的意义

2021-03-24刘丽莎,韩晶晶,殷丝雨等

安徽医药 2021年3期

川崎病（Kawasaki disease）是一种以全身血管炎为主要病变的急性自限性发热性疾病，主要累及中小动脉，尤其是冠状动脉，多发于5岁以下儿童，常见并发症为冠状动脉病变（Coronary arteries lesions，CAL），包括冠状动脉扩张（Coronary arteries dilation，CAD）或冠状动脉瘤（Coronary arteries aneurysm，CAA），后期则可发生冠状动脉狭窄或血栓，甚至发生心肌梗死。目前，川崎病已取代风湿热，成为儿童后天性心脏病的首位病因。抗内皮细胞抗体（anti-endothelial cell antibody，AECA）是存在于循环中的一组异质性自身抗体，与炎症介导的血管壁损伤相关的多种自身免疫病的发生、发展及预后转归密切相关。近年来，关于AECA在川崎病中的临床意义的研究并未得到广泛深入的开展，鉴于研究样本大小及检测方法不同，国内外文献报道对此存在较大分歧。本研究采用间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence analysis，IIF）检测川崎病病儿外周血中IgG型AECA（IgG-AECA）水平，以期探讨IgG-AECA在川崎病诊断中的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

80例于2019年1—5月在南京医科大学附属儿童医院明确诊断为川崎病病儿，所有病例临床诊断符合日本川崎病委员会修订的诊断标准（2002年修订第5版）。所有病儿就诊前均未使用过免疫抑制剂或免疫调节剂，并除外先天性或遗传性疾病，其中，合并冠状动脉损伤者29例、未合并冠状动脉损伤者51例。同时选取该院同期就诊的40例因呼吸道感染发热病儿（一般发热组）和30例择期手术病儿（正常对照组）作为对照组，各组儿童性别、年龄差异无统计学意义（

＞0.05）。以上标本的收集均获得病儿近亲属知情同意，本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求。

表1 儿童川崎病80例各组性别、年龄情况分析

1.2 标本采集

分别于川崎病急性期（病程范围为1～10 d）和恢复期（病程范围为21～60 d）采集病儿静脉血3 mL，同时抽取对照组儿童等量静脉血，常规分离血清，-70℃冻存待用。

1.3 血清IgG

AECA检测

采用间接免疫荧光试剂盒（德国欧蒙医学诊断有限公司），以人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）为底物，样本1∶10稀释后检测血清中IgGAECA，荧光显微镜下在细胞质中可见绿色颗粒荧光判定为阳性，颗粒型荧光在靠近细胞核的位置上颗粒显得更丰富。同时分别设置阴、阳性对照用于判断实验的有效性。

2 结果

2.1 各组血清IgG

AECA阳性率

川崎病病儿急性期IgG-AECA阳性率为41.2%（33/80），明显高于一般发热组［15.0%（6/40）］和（

=8.376，

=0.004）正常对照组［0%（0/30）］（

=17.680，

＜0.001）。川崎病病儿恢复期IgG-AECA阳性率为20.0%（16/80），较急性期明显下降（

=8.502，

=0.004）。

2.2 川崎病病儿合并CAL与否IgG

AENA阳性率的比较

结果显示，川崎病合并CAL时IgG-AECA阳性率为55.2%（16/29），不合并CAL病儿IgG-AECA阳性率为29.0%（15/51），差异有统计学意义（

=5.169，

=0.023）。

2.3 川崎病急性期IgG

AECA阳性组与IgG

AECA阴性组常见炎性指标的比较

IgG-AECA阳性组急性期川崎病病儿外周血白细胞总数（WBC）、C反应蛋白（CRP）和血细胞沉降率（ESR）均高于IgG-AECA阴性组病儿（

＜0.05），结果见表2。

表2 儿童川崎病80例急性期IgG型抗内皮细胞抗体（IgG-AECA）水平不同者炎性指标的比较/±s

2.4 IgG

AECA不同滴度组川崎病急性期病儿外周血WBC、CRP和ESR结果比较

将IgG-AECA阳性病儿根据其滴度不同分组，分析IgG-AECA滴度与常见炎性指标的关系，可见不同滴度组儿童WBC、CRP和ESR结果差异有统计学意义（

＜0.05）。IgG-AECA高滴度组病儿外周血WBC、CRP和ESR检测结果高于低滴度组（

＜0.05），表明随着外周血中IgG-AECA滴度的增加，病儿炎症反应越强烈，结果见表3。

3 讨论

川崎病是一种急性自限性全身血管炎性疾病，早期表现为全身微血管炎，后期为动脉内膜炎和动脉周围炎，并发症以冠状动脉损伤最为严重，是影响预后的主要因素。AECA是一组针对血管内皮细胞表面不同抗原决定簇的异质性抗体，其可在多种与血管炎性疾病有关的免疫性疾病（如系统性红斑狼疮、川崎病、冠状动脉粥样硬化性心脏病、混合性结缔组织病、移植免疫、系统性血管炎、干燥综合征、韦格纳肉芽肿等）病人的外周血中表达，可作为一种有用的自身抗体指标用于疾病诊断和预后判断，特别是对疾病的活动性评估具有重要意义。本研究结果显示，川崎病急性期病儿外周血中IgG-AECA阳性率明显高于一般发热病儿和正常儿童，且合并CAL时IgG-AECA阳性率高于未合并CAL病儿，表明IgG-AECA参与到川崎病疾病发生发展过程，对川崎病早期诊断具有一定的临床意义。此外，本研究发现，IgG-AECA阳性病儿外周血中WBC、CRP和ESR等反映炎症程度强弱的指标均高于IgG-AECA阴性病儿，IgG-AECA高滴度组病儿外周血WBC、CRP和ESR高于低滴度组，表明IgGAECA在川崎病早期的炎症性病变其中起着一定的促进作用。综上，IgG-AECA参与了川崎病的发病过程，且与疾病的活动性呈正相关，通过检测病儿外周血中IgG-AECA的表达情况，可以揭示其在临床疾病诊断、治疗和预后评估中的应用价值，特别是预测并发症具有重要的意义。

表3 儿童川崎病80例急性期IgG型抗内皮细胞抗体（IgGAECA）不同滴度组外周血白细胞总数（WBC）、C反应蛋白（CRP）和血细胞沉降率（ESR）结果比较/±s