慢性牙周炎龈沟液IL-10、IL-23、MCP-1与牙周指数的相关性分析

颜孟雄 黄婧 杨再波

慢性牙周炎（chronic periodontitis，CP）为口腔科最常见的牙周类疾病，也是我国成人失牙的首要病因。慢性牙周炎不仅危害患者局部口腔健康，且致病菌经咀嚼等多种途径进入血液循环后可使机体出现炎症反应，对全身多处系统产生不良影响［1］。牙周炎局部炎症微环境及其包含的各类炎性分子是造成牙周支持组织炎症、进行性附着丧失及骨吸收的主要原因［2］。其中白介素-10（interleukin-10，IL-10）、白介素-23（interleukin-23，IL-23）、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemo attractant protein-1，MCP-1）被证实与牙周炎发病有密切关系［3］。本文主要分析慢性牙周炎患者龈沟液IL-10、IL-23、MCP-1 水平及其与牙周指数的相关性，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选取2017年5月至2020年4月本院口腔诊疗中心患者134例。纳入标准：①慢性牙周炎者符合相关诊断标准［4］，牙龈炎者符合相关诊断标准［5］；②近12 周内未应用抗生素、免疫治疗药物、非甾体抗炎药等；③半年内未接受过洁治、系统性牙周治疗，测定牙无龋洞。排除标准：①合并系统性炎症性疾病、肝肾损伤；②近4 周内有相关感染性疾病、牙周炎病史；③近期吸烟饮酒史或正畸治疗史。依据口腔情况分为对照组（n=30，牙周健康，无牙周治疗史或与牙周炎相关的全身性疾病、无吸烟酗酒史）、牙龈炎组（n=48）、慢性牙周炎组（n=56），对照组中男14例，女16例，平均年龄（40.15±4.23）岁，牙龈炎组中男25例，女23例，平均年龄（40.24±4.18）岁，慢性牙周炎组中男29例，女27例，平均年龄（40.34±4.16）岁，依据相关标准［4］进行严重程度分级，本次慢性牙周炎患者分为轻度病变亚组30例，中重度病变亚组26例。3 组的性别、年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05），有可比性。本研究获得本院伦理委员会批准，入组对象均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 牙周指数检查

对全口余留牙齿进行牙周情况检查，包括菌斑指数（plaque index，PLI）、出血指数（blood index，BI）、PD、AL，参照相关标准［6］进行评估。

1.2.2 龈沟液标本采集

所有入选对象均选取6 颗指数牙（16、11、26、36、31、46），取6 颗指数牙的近中颊位点牙周指标均值代表该患者牙周情况，均无龋齿、牙髓、根尖病变或咬合创伤，不符合条件者取邻牙。佩戴无菌手套进行临床操作，小心去除待取部位的龈上菌斑、牙石，无菌干棉卷隔湿，以气枪吹干牙面10 s，将吸潮纸轻插入受试牙的近中颊位点，在遇轻微阻力时即停止，30 s 后取出（如被血污染则弃除）。将取完龈沟液后的6 根吸潮纸尖一同放入原EP 管称重，减去原记录重量则为龈沟液重量，按1 g/mL换算成体积，记录后EP 管封口置于-80℃冻存备用，标本采集均由同一人独立完成。

1.2.3 龈沟液IL-10、IL-23、MCP-1 水平测定

PBS 缓冲液200 μL 浸润待测龈沟液纸尖末端，离心半径10 cm，12 000 r/m 速率离心5 min，取上清2 μL，采用酶联免疫吸附试验（武汉博士德公司）检测IL-10、IL-23、MCP-1 水平，将试剂盒中标准液稀释至10 μg/mL，取96 孔板，每孔加入标准液0.1 mL，经4℃过夜，将待测样本与试剂盒一起平衡至室温；次日加入待测样品，100 μL PBS 缓冲液以5 000 r/min 速率离心5 min，去除滤纸条，保留上清液，在37℃下孵育1 h，加入双抗，经37℃孵育30 min，检测450 nm 波长处光密度（optical density，OD）值［7］。

1.3 观察指标

①比较对照组、牙龈炎组、慢性牙周炎组PLI、BI、PD、AL；②比较对照组、牙龈炎组、慢性牙周炎组龈沟液中IL-10、IL-23、MCP-1 水平；③比较不同严重程度慢性牙周炎患者牙周指数及龈沟液中IL-10、IL-23、MCP-1 水平；④分析慢性牙周炎患者沟液中IL-10、IL-23、MCP-1水平与牙周指数的相关性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 23.0 软件对数据进行统计学处理，计量资料以（±s）表示，多组间比较采取单因素方差分析，组间进一步两两比较采用LSD-t检验，两组间比较采用独立样本t检验，相关性采用Pearson相关分析，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3 组PLI、BI、PD、AL 比较

3 组PLI、BI、PD、AL 比较：慢性牙周炎组＞牙龈炎组＞对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 3 组PLI、BI、PD、AL 比较（±s）Table 1 Comparison of PLI，Bi，PD and Al in 3 groups（±s）

表1 3 组PLI、BI、PD、AL 比较（±s）Table 1 Comparison of PLI，Bi，PD and Al in 3 groups（±s）

注：与对照组比较，aP＜0.05；与牙龈炎组比较，bP＜0.05。

组别对照组牙龈炎组慢性牙周炎组F/t 值P 值n 30 48 56 PLI 0.77±0.08 0.96±0.11a 1.10±0.12ab 90.921＜0.001 BI 0.57±0.06 0.78±0.08a 0.98±0.12ab 185.132＜0.001 PD（mm）2.41±0.26 3.15±0.34a 4.35±0.48ab 267.529＜0.001 AL（mm）0 1.85±0.19 3.52±0.37 28.229＜0.001

2.2 3 组龈沟液IL-10、IL-23、MCP-1 水平比较

牙龈炎组、慢性牙周炎组龈沟液IL-10 低于对照组，IL-23、MCP-1 水平高于对照组，慢性牙周炎组龈沟液IL-10 低于牙龈炎组，IL-23、MCP-1 水平高于牙龈炎组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.3 不同严重程度慢性牙周炎患者牙周指数及IL-10、IL-23、MCP-1 水平比较

轻度病变亚组龈沟液IL-10 高于中重度病变亚组，PLI、BI、PD、AL、IL-23、MCP-1 水平低于中重度病变亚组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表2 3 组龈沟液IL-10、IL-23、MCP-1 水平比较（±s）Table 2 Comparison of the levels of IL-10，IL-23 and MCP-1 in gingival crevicular fluid among 3 groups（±s）

注：与对照组比较，aP＜0.05；与牙龈炎组比较，bP＜0.05。

组别对照组牙龈炎组慢性牙周炎组F 值P 值n 30 48 56 IL-10（μg/L）724.15±73.58 697.41±70.51a 524.69±53.49ab 132.054＜0.001 IL-23（μg/L）6.36±0.65 7.27±0.78a 12.44±1.35ab 468.221＜0.001 MCP-1（pg/μL）20.59±2.18 40.18±4.26a 62.55±6.37ab 736.530＜0.001

2.4 慢性牙周炎患者龈沟液IL-10、IL-23、MCP-1水平与牙周指数相关性

相关分析显示，慢性牙周炎患者龈沟液IL-10 水平与牙周指数各项呈负相关（P＜0.05），IL-23、MCP-1水平均与牙周指数各项呈正相关（P＜0.05）。见表4。

3 讨论

慢性牙周炎为常见口腔疾病［7］。牙龈上皮细胞与免疫细胞在牙周致病菌作用下，出现炎症反应，其中IL-10、IL-23、MCP-1 与慢性牙周炎发展的关系受到了关注。IL-23 可起到前炎性因子作用，发挥促炎作用并影响机体免疫反应；IL-10 与高加索人和亚洲人的牙周炎易感性有关［8］；MCP-1 作为一种单核细胞与巨噬细胞特异性炎性趋化因子也被发现与炎症疾病相关［9］。因此IL-10、IL-23、MCP-1 可能与慢性牙周炎的发展有密切关系，明确其相关性有重要意义。

本研究发现牙龈炎组、慢性牙周炎组IL-10 低于对照组，这与国外Bi 等［10］的报道结果一致，表明IL-10 可在一定程度上对慢性牙周炎患者起到保护作用。IL-10 可抑制黏附因子表达，使促有丝分裂物质作用减少，降低机体内生长因子、炎性因子水平。Th17 细胞可放大炎症反应，而IL-23 为Th17细胞产生作用的关键因子［11］。本次实验结果这与国外Sadeghi 等［12］的报道结果相似。当牙龈炎发生炎症时活化的中性粒细胞、单核巨噬细胞及树突状细胞可产生大量IL-23，从而发挥前炎症因子作用，加重牙周组织的炎症程度。早期Boström等［13］报道，牙周炎患者血清及炎症牙龈结缔组织MCP-1 水平高于健康牙龈组织，MCP-1 与牙周炎有明显相关性，本研究结论与之一致。MCP-1 过表达可趋化大量单核巨噬细胞游走于牙周组织的龈沟液中，分泌黏附分子等炎性介质，形成局部炎症微环境，导致牙周软组织炎性破坏［14］。

表3 不同严重程度慢性牙周炎患者牙周指数及IL-10、IL-23、MCP-1 水平比较（±s）Table 3 Comparison of periodontal index and levels of IL-10，IL-23 and MCP-1 in patients with chronic periodontitis of different severity（±s）

表3 不同严重程度慢性牙周炎患者牙周指数及IL-10、IL-23、MCP-1 水平比较（±s）Table 3 Comparison of periodontal index and levels of IL-10，IL-23 and MCP-1 in patients with chronic periodontitis of different severity（±s）

病变严重程度轻度病变亚组中重度病变亚组t 值P 值n 30 25 PLI 0.99±0.12 1.13±0.14 4.030＜0.001 BI 0.84±0.08 1.02±0.11 7.066＜0.001 PD（mm）3.88±0.39 4.41±0.45 4.722＜0.001 AL（mm）2.06±0.23 3.67±0.38 19.468＜0.001 IL-10（μg/L）645.15±65.89 506.48±52.64 8.608＜0.001 IL-23（μg/L）10.56±1.18 14.21±1.43 10.465＜0.001 MCP-1（pg/μL）58.16±5.79 63.01±6.45 2.965 0.004

表4 慢性牙周炎患者龈沟液IL-10、IL-23、MCP-1 水平与牙周指数相关性Table 4 Correlation between the levels of IL-10，IL-23，MCP-1 in GCF and periodontal index in patients with chronic periodontitis

相关性分析结果表明，IL-10、IL-23、MCP-1 与慢性牙周炎患者牙周指数有一定关系。IL-10 是最重要的炎症抑制因子，IL-10 水平异常时可导致机体免疫功能紊乱及病理损伤，因此其与牙周指数有一定关联［15］。IL-23 水平和自身免疫病及炎症反应密切相关［16］，因此IL-23 与牙周指数也有密切关联，可反映牙周组织损伤程度。MCP-1 则可趋化大量单核巨噬细胞，其可经自分泌方式产生大量MCP-1蛋白，加重炎症微环境，此外龈沟液中MCP-1 高表达也可进一步趋化碱性粒细胞至反应区域，引起牙槽骨吸收，加重牙周组织破坏，因此MCP-1 与牙周指数也存在关联。本研究也有一定不足之处，所取龈沟液样本量有限，未进行重复检测，由于酶联免疫吸附试验变异系数（Coefficient of Variation，CV）较大，可能导致本次结果有局限性，此外每组样本例数较少，得出的研究结论有片面性。后期将扩大样本量，对慢性牙周炎患者龈沟液重复采集龈沟液样本进行检测，以进一步验证本次结论。

综上所述，慢性牙周炎患者龈沟液中IL-10 呈低表达，而IL-23、MCP-1 水平升高，且三者均与牙周指数（PLI、BI、PD、ALI）有密切关系，临床可加以监测。