陕北地区六种小米中叶酸含量的检测

严 烨，邹 力，樊 璐，惠卫甲，杨 雯，吕名蕊

（1.西安悟空检测科技有限公司，陕西西安 710065；2.陕西省产品质量监督检验研究院，陕西西安 710048）

0 引言

叶酸，为维B9，是人体正常发育所需的水溶性维生素之一[1]，也是一种外源性维生素，人体不能自身合成。叶酸可以从日常的食物中摄取，谷物中含有一定量的叶酸。

小米作为一种日常食用的小杂粮，其有较高的叶酸含量[2-3]，陕西省小米产地集中在陕北地区，为了对该地区小米中的叶酸含量进行初步了解，从市场上采购6 种不同产地的小米进行检测。现将试验方法和结果总结如下。

叶酸检测商用试剂盒的原理和国标法[4-5]类似，将样品溶液和叶酸检测培养基加入包被有鼠李糖杆菌（Lactobacillus rhamnosus）的微孔中培养，菌的生长量和叶酸含量呈正比，测定吸光度并计算。

1 仪器和试剂

粉碎机，武艺海纳电器有限公司产品；生化培养箱，上海新苗医疗器械制造有限公司产品；酶标仪，上海永创医疗器械有限公司产品。

鸡胰腺（冻干粉），上海物竞化工科技有限公司提供；叶酸检测试剂盒，德国拜发R-Biopharm 公司提供。

2 试验方法[6]

（1）样品前处理。干燥小米经粉碎机研磨粉碎，过80 目筛。

（2）样品待测液制备。称取1.000 g 样品和10 mg鸡胰腺（含有叶酸轭合酶，水解叶酸多谷氨酸盐至双谷氨酸盐）置于50 mL 具塞离心管中，加入20 mL左右磷酸盐缓冲液（7.8 g 磷酸二氢钠和1 g 抗坏血酸钠溶解于1 L 蒸馏水中，校正pH 值至7.2，每天新配缓冲液）复溶混匀，再添加磷酸盐缓冲液至40 mL刻度；同时，制备鸡胰腺冻干粉对照管；盖塞于黑暗条件下37 ℃，150 r/min 振荡水解2 h；后于95 ℃下水浴保存30 min，期间振荡3 次；迅速冷却至30 ℃下，以转速8 000 r/min 离心5 min，吸取上清液在1.5 mL 离心管中梯度稀释至300 倍。

（3）培养基制备。将10 mL 无菌水和1 mL 试剂盒中缓冲液加入自带培养基瓶中，涡旋振荡混匀，置于95 mL 水浴保温5 min，迅速冷却，过0.22 μm无菌膜备用。

（4）标注溶液制备。用自带标准溶液配制6 个梯度，0，160，320，640，960，1 280 ng/100 g。

（5）加样。按照需要取适量孔板，移取150 μL叶酸培养基至微孔中，移取150 μL 标准品或稀释的样品至指定的微孔中，用粘合箔盖住板条微孔。

（6）培养。在37±1 ℃黑暗条件下孵育48 h。

（7）测量。酶标仪550 nm 条件下读取吸光度。

（8）使用 Originlab 软件计算结果。

3 结果与分析

3.1 标准曲线

标准曲线检测结果[5]见表1，叶酸检测标准曲线见图1。

图1 叶酸检测标准曲线

3.2 结果及分析

邵丽华等人[5，7]采用间接荧光分析法得出山西地区小米中叶酸含量为1.6～1.9 μg/g。赵平等人[8]采用微生物法测得大米中叶酸含量为12.4 μg/100 g。侯思宇等人[9]采用HPLC 法测得山西、河北、河南及辽宁地区小米中叶酸含量为0.23～2.89 μg/g。张娟等人[10]采用差时脉冲法测得小米中叶酸含量为1.0 μg/g；张海明等人[11]采用间接荧光光谱法测得长治市不同县区小米中叶酸含量为1.54～1.92 μg/g。以上检测方法和本次试验有较大差异。

6 种小米中叶酸含量检测结果见表2。

从表2 检测结果来看，6 种小米中叶酸含量分别为 60.3，47.8，42.8，40.6，49.9，72.5 μg/100 g；RSD 值均小于5%。6 种小米中的叶酸有较大的差异，同国内其他地区小米中叶酸含量也有差异。

3.3 回收率试验

同时取一批次小米样品5 份，2 份做样品中叶酸本体含量，3 份进行加标试验，检测并计算加标回收率，分别为93.3%，101.9%，98.4%，平均回收率为96.9%。

表2 6 种小米中叶酸含量检测结果

4 结论

采用试剂盒微孔法对陕北地区6 种小米中叶酸进行检测，含量分别为60.3，47.8，42.8，40.6，49.9，72.5 μg/100 g，RSD 值均小于4%。从中可以发现，同一地区不同产地小米中叶酸含量有所差异，且差异较大，原因可能和当地环境、土壤及栽培技术有很大的关系。日常食用小米，可以摄取一定量的叶酸。该结果也为后续研究陕北地区小米营养成分提供参考依据。