枯草芽孢杆菌对热应激肉鸡睾丸抗氧化功能影响

熊永洁，贺绍君，刘德义，王喜峰，魏 霖，李 静，胡倩倩（安徽科技学院动物科学学院 233100）

当前， 规模化肉鸡的饲养几乎都是采用集约化的养殖模式，长途运输、疫苗免疫、温度变化、饲养密度等众多因素往往会引起鸡群的应激[1]。 热应激作为夏季肉鸡养殖生产过程中最为常见的一种不利应激， 应激发生后通常会引起鸡的采食量急剧降低、生长与增重缓慢、免疫抑制。 持续或严重的热应激甚至能够造成鸡只的大量死亡。 热应激发生后，动物机体自身原有的氧化与抗氧化的平衡状态被破坏，抗氧化功能出现紊乱，最终引起鸡群发病[2]。 枯草芽孢杆菌作为一种益生菌，相关研究表明枯草芽孢杆菌能够有效提高热应激时肉鸡的采食量，降低料肉比，进而提高鸡群的整体成活率，并能显著提高屠体的肉品质量[3]。 为进一步研究枯草芽孢杆菌在热应激引起肉鸡繁殖性能下降过程中的保护作用，本实验从睾丸抗氧化的角度出发，研究在鸡的日粮中添加适量的枯草芽孢杆菌对热应激时鸡睾丸抗氧化功能的影响， 以期为防治夏季热应激对鸡繁殖性能造成的危害提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

枯草芽孢杆菌饲料添加剂（有效含量：2×1010CFU/g，北京科为博公司）；GSH-Px、SOD、MDA 快速实验室检测试剂盒（南京建成生物公司）。 其余所用试剂均为国产分析纯，由安徽科技学院动物医学实验中心统一采购提供。

1.2 方法

1.2.1 鸡的饲养与管理 21 日龄的健康科宝肉鸡60 只，随机分为三组：正常组（Con）、热应激组（HS）、热应激+枯草芽孢杆菌组(HS+BS)。 正常组按照商品化肉鸡饲养技术标准的正常温度饲养， 热应激组、 热应激+枯草芽孢杆菌组的饲养温度为33℃±1℃，相对湿度55%±5%。 试验期间各组均为自由饮水，正常组和热应激组饲喂商品化的日粮，热应激+枯草芽孢杆菌组在商品化日粮中添加300mg/kg 的枯草芽孢杆菌制剂，试验进行21d。

1.2.2 睾丸组织采集与抗氧化功能指标的测定 在鸡饲养至42d 结束时， 于每组鸡中随机选择5 只进行采样前的预处理，即禁食12h，禁水8h。 预处理后处死采集睾丸，迅速置于液氮罐内保存。 随后按照GSH-Px、SOD、MDA 检测试剂盒中附带的说明书，分别进行相应抗氧化指标的测定。

1.2.3 数据统计与分析 使用SPSS17.0 统计分析软件进行数据统计与分析，单因素方差分析法（LSD 法）进行组间的多重分析比较，P＜0.05 表示差异显著，P＞0.05 表示无明显差异。

2 结果与分析

2.1 各组间GSH-Px 活力分析与比较

不同处理组的鸡睾丸组织中GSH-Px 的活力见表1。

表1 枯草芽孢杆菌对热应激鸡睾丸组织中GSH-Px 活力的影响（U/mL）

从表1 可以看出，在鸡42d 时，热应激处理组的鸡睾丸组织中的GSH-Px 酶活力与正常饲养组相比显著下降(P＜0.05)；但热应激+枯草芽孢杆菌组与热应激处理组相比较，GSH-Px 的酶活力显著上升(P＜0.05)。

2.2 各组间SOD 活力分析与比较

不同处理组的鸡睾丸组织中SOD 的活力见表2。

从表2 可以看出，在鸡42d 时，热应激处理组的鸡睾丸组织中的SOD 酶活力与正常饲养组相比显著下降(P＜0.05)；但热应激+枯草芽孢杆菌组与热应激处理组相比较，SOD 的酶活力显著上升(P＜0.05)。

表2 枯草芽孢杆菌对热应激鸡睾丸组织中SOD 活力的影响（U/mL）

2.3 各组间MDA 含量检测与比较

不同处理组的鸡睾丸组织中MDA 的含量见表3。

表3 枯草芽孢杆菌对热应激鸡睾丸组织中MDA 含量的影响（nmol/mL）

从表3 可以看出，在鸡42d 时，热应激处理组的鸡睾丸组织中的MDA 含量与正常饲养组相比显著上升(P＜0.05)； 但热应激+枯草芽孢杆菌组与热应激处理组相比较，MDA 含量显著降低(P＜0.05)。

3 结论与讨论

鸡发生热应激时，机体中一系列的生理生化、机能代谢均会受到严重影响而发生紊乱，最终导致机体产生大量的自由基，当过量的自由基超过机体的处理与清除能力时， 就会进一步干扰和破坏动物正常的生理生化代谢过程和生理功能。 对于饲养的种鸡， 热应激对繁殖功能造成的损伤往往严重影响鸡的种用价值，进而降低养殖的经济效益。 本实验研究了枯草芽孢杆菌对热应激饲养条件下鸡的睾丸抗氧化功能关键指标的影响，为科学、合理地使用枯草芽孢杆菌制剂防治家禽热应激提供理论依据。

3.1 枯草芽孢杆菌对热应激鸡睾丸组织中GSH-Px 活性的影响

GSH-Px 是动物体内分解和清除过氧化物的一种重要抗氧化酶，其通过分解GSH 形成GSSG，从而使体内有害的过氧化物转变为无毒无害的化合物，同时加速过氧化氢的分解，使细胞膜在氧化条件下能够维持结构的完整性， 并保持正常的生理功能不受氧化因子的侵害[4]。 热应激能够引起机体组织器官中GSHPx 的酶活力降低，导致动物组织器官的抗氧化能力下降。本试验的研究结果显示， 热应激显著降低了鸡睾丸组织中GSH-Px 的酶活力，而在日粮中添加300mg/kg 的枯草芽孢杆菌制剂可以显著增强睾丸组织中的GSH-Px 酶活力， 表明枯草芽孢杆菌能够通过增强睾丸中GSH-Px 的酶活力进而提高鸡睾丸的抗氧化能力，从而降低热应激对公鸡繁殖性能造成的危害。

3.2 枯草芽孢杆菌对热应激鸡睾丸组织中SOD 活性的影响

SOD 作为生物体内抗氧化酶家族的重要成员之一，能够使超氧阴离子自由基发生歧化反应形成氧和过氧化氢， 从而调节机体的氧化与抗氧化平衡。 动物机体在新陈代谢等一系列生理生化反应过程中会不，同程度地产生有害的自由基，但由于体内SOD 对自由基能够起到清除作用，不会引起自由基的过量蓄积，最终使机体内自由基的产生和清除处于一种动态平衡之中。 但是， 一些病理因素如应激常常会引起体内自由基的大量异常增加。 当自由基的产生速度超过SOD 对其的清除能力时，动物的细胞、组织和器官等就会出现氧化损伤，进而表现出疾病等异常症状。 本研究结果显示，鸡在热应激的环境中，其睾丸组织中的SOD 酶活力明显降低。 表明鸡在面临热应激时，其体内的SOD大量消耗，SOD 的产生以及代谢活性受到了热应激的影响。而在日粮中添加300mg/kg 的枯草芽孢杆菌制剂能够显著提高鸡睾丸组织中SOD 的酶活力，增强睾丸的抗氧化能力。

3.3 枯草芽孢杆菌对热应激鸡睾丸组织中MDA 含量的影响

现有研究已经证明， 机体在遭受热应激时会产生大量的自由基， 自由基与组织中的脂质发生过氧化反应后进一步产生大量的MDA，最终导致组织中的蛋白质和核酸等功能性分子发生交联聚合化反应，从而损伤组织器官正常的生理功能。 有研究显示应激能够引起家禽体内脂质过氧化反应的产物MDA 的含量升高、诱发氧化损伤而影响组织器官生理功能的正常发挥。 本试验结果显示，热应激时鸡睾丸中的MDA 含量显著增加，这与前人的研究结果相一致。日粮中添加300mg/kg 的枯草芽孢杆菌制剂可显著降低鸡睾丸组织中MDA 的含量，表明枯草芽孢杆菌能通过抑制热应激时鸡睾丸中MDA 的产生，进而缓解热应激对鸡睾丸生理功能的损伤。

以上结果表明，鸡发生热应激后，睾丸的抗氧化能力显著降低，日粮中添加300mg/kg 的枯草芽孢杆菌可有效增强睾丸的抗氧化能力，提高鸡的种用价值。