微粉中药“藿芪散”对小鼠外周血T 细胞亚群（CD4+/CD8+）的影响

刘 迎，史万玉

（1.河北交通职业技术学院 050091；2.河北农业大学中兽医学院 071001）

黄芪是多年生草本植物，具有补脾气，固表止汗，利尿消肿，脱毒生肌等功效。 淫羊藿能补肾壮阳，祛风除湿。 治阳痿不举，小便淋沥，筋骨挛急，半身不遂，腰膝无力，风湿痹痛，四肢不仁。

藿芪散由中药淫羊藿和黄芪按照一定比例配伍而成，本试验通过研究 “藿芪散” 对小鼠外周血T 淋巴细胞亚群 （CD4+/CD8+）比例的影响情况，来探讨该复方对动物机体细胞免疫功能的调节作用， 同时比较分析超微粉制剂相较于中药传统制剂的优势， 为随后开发藿芪散超微粉成为饲料添加剂提供了科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 中药“藿芪散”

试验用淫羊藿和蒙古黄芪均购自河北安国药材市场。 中药“藿芪散”由淫羊藿和黄芪按一定比例组方后，用普通粉碎机粉碎，过24 目筛即得到普通粗粉；再将普通粗粉用进行超微粉碎，过300 目筛即为微粉。

藿芪散微粉与粗粉与分别用药锅武火熬制沸腾，再用文火水煎煮30min，经8 层纱布过滤，重复上述煎药过程一次，合并两次中药煎液，浓缩至每毫升相当于原生药1g，置4°冰箱备用。

1.1.2 试验动物

昆明雌性小鼠49 只，体重22～25g，购自河北医科大学实验动物中心。

1.1.3 主要试剂及药品

小鼠CD4-FITC、CD8-PE 单克隆抗体：为Pharmingen 产品

1.1.4 主要仪器设备

BFM-6 贝利微粉机 济南倍力粉技术有限公司

Epics-XL II 型流式细胞仪 Beckman coulter 公司

1.2 分组与给药

49 只雌性昆明小鼠，随机等分为7 组，即生理盐水对照组(NS 组)、粗粉低剂量组（CL 组）、粗粉中剂量组（CM 组）、粗粉高剂量组（CH 组）、微粉低剂量组（WL 组）、微粉中剂量组（WM 组）、微粉高剂量组（WH 组）。生理盐水对照组小鼠经胃灌服生理盐水0.4mL 只/天，低、中、高剂量组每只小鼠每天分别经胃灌服1:1 的“藿芪散”粗粉、微粉煎液0.2mL、0.4mL 和0.6mL/只/天，共灌药6d。

1.3 CD4+/CD8+的测定

于给药6d 后的24h，摘除小鼠眼球采血，用肝素抗凝(50U/mL )， 每管0.1mL， 分为2 管， 分别加入小鼠CD4-FITC 单抗和CD8-PE 单抗，充分混合，室温下避光孵育45min，用细胞洗液洗涤2 次，1 000rpm， 2min， 弃上清液， 加稀释的荧光标记抗体0.1mL，室温下避光孵育45min，洗1 次，弃上清液，余约0.5mL 细胞悬液，加固定液50μL.以上操作在室温下进行，标本以台盼蓝染色，死细胞＜5%。 在EPICS-XLII 型流式细胞仪上测定，用Expo32ADC 进行免疫荧光数据分析。

1.4 数据处理

试验数据用SPSS 20.0 软件包进行处理， 并进行统计学分析。

2 结果

2.1“藿芪散”对小鼠CD4+/CD8+的影响

表1 “藿芪散”对小鼠CD4+/CD8+的影响

表1 结果表明，“藿芪散” 粗粉和微粉的各个剂量均不同程度的提高小鼠外周血T 淋巴细胞亚群CD4+/CD8+的比例， 其中超微粉低剂量组和粗粉中剂量组均显著升高了小鼠外周血T 淋巴细胞亚群CD4+/CD8+的比例(P＜0.01，或P＜0.05 )。原因可能是中药经超微处理后，比表面积增大，粒度更加细微均匀，药物与胃粘膜的接触面积增大；同时细胞破壁率高，有效成分溶出率加大，从而被小鼠更好的吸收利用，而微粉的中、高剂量可能又超过了合适剂量。 相对于超微粉中药，粗粉中药的粒度较大，有效成分溶出较低，所以微粉低剂量便达到了粗粉中高剂量的效果。

3 讨论

机体免疫的重要途径之一是细胞免疫，尤其是依赖T 淋巴细胞亚群的相互协作和相互制约，其中CD4+、CD8+T 细胞的免疫调节作用尤为至关重要。 正常动物体内CD4+，CD8+淋巴细胞存在一定比例，使机体免疫功能处于平衡稳定的状态。 从中兽医角度理解，即为“阴平阳秘，精神乃治”。 一旦这种平衡被打乱，则导致T 淋巴细胞亚群比例失衡。 若CD4+/CD8+比例升高，说明正相免疫调节占优势，机体处于高的免疫状态；CD4+/CD8+比例下降，说明负相免疫调节占优势，可导致机体免疫状态失衡，产生免疫功能紊乱，可能导致免疫疾病发生[1]。

已有研究结果表明， 淫羊藿和黄芪作为饲料添加剂混入畜禽饲料中，可提高动物免疫力和生产性能，促进生长发育等方面的作用。

范领斌[2]在雏鸡的饮水中连续42d 分别加入不同剂量的淫羊藿水煎液(0.5、1.0、1.5、0g/kg·d)，测鸡的增重、料肉比和免疫器官指数。 结果表明，淫羊藿可使鸡的体重增加，料肉比降低和免疫指数升高。 张运强[3]等在基础日粮上按日粮重量比例添加制备的黄芪与淫羊藿多糖硫酸酯， 研究表明该中药混合物可以在不影响小鼠体质量的同时在一定程度上调节小鼠的免疫指标和提升血清的总抗氧化水平。 王小玲[4]等研究表明，淫羊藿苷能有效促进股骨骨折大鼠骨折愈合，且药物浓度越高作用越好。 刘国林[5]等研究表明，围产期奶牛日粮中添加100g/(头·d)黄芪(1∶1)时能提高奶牛的免疫力。 王宪举[6]等研究表明，在日粮中添加黄芪粉可以提高藏羊生产性能并改善羊肉品质。 安胜英[7]等研究表明，在基础日粮中添加0.1%黄芪提取物，能明显提高蛋鸡产蛋率，降低畸形蛋数、料蛋比。

现代医学研究表明，黄芪含丰富的黄芪多糖、氨基酸、甙类、氨基酸等多种有效成分，可活化机体免疫系统，增强机体免疫功能。 淫羊藿含黄酮类化合物、木脂素、生物碱、挥发油等成分，能促进造血功能和免疫功能，具有抗衰老、抗肿瘤等功效。

本试验结果中藿芪散可显著提高小鼠外周血T 淋巴细胞亚群CD4+/CD8+的比例，这可能与方剂中富含上述成分有关。

综上所述，藿芪散能显著提高小鼠外周血CD4+/CD8+T 淋巴细胞亚群的比例， 微粉低剂量即可达到与粗粉中高剂量相当的效果。 本试验为藿芪散超微粉成为饲料添加剂方面提供了科学的参考依据。