PTEN和KDR及Beclin1在宫颈癌中的表达及其临床病理意义

李昱，葛阳清

（湖南师范大学医学院附属岳阳医院，岳阳市二医院妇科，湖南 岳阳 414000）

宫颈癌是一种十分常见的女性恶性肿瘤，在全世界女性恶性肿瘤中位于第2 位，且近年来，宫颈的发病年龄呈年轻化趋势，发病率和死亡率也有逐渐升高趋势，严重威胁女性身体健康[1]。由正常的宫颈组织发展为宫颈上皮内瘤变至为宫颈癌的过程中，多基因、多因素起协同作用。为给诊疗宫颈癌提供临床依据，本研究收集宫颈癌标本85份、正常宫颈组织标本30份，并采用免疫组化法分别对癌变标本、正常组织标本中的PTEN、KDR、Beclin1 表达水平进行检测，分析与宫颈癌临床病理的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源 收集2013年6月至2015年6月本院住院手术或者门诊活检的病理标本共115份，其中宫颈癌标本85份、正常宫颈组织30 份。宫颈癌患者年龄23～73 岁，平均（43.18±7.93）岁；宫颈组织正常者年龄24～75 岁，平均（45.23±8.12）岁。宫颈癌中鳞癌63例，腺癌22例。临床分期按照FIGO分期，Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分别为17例、43例、19 例、6 例。30 例宫颈组织正常者经病理检查确诊为子宫肌瘤。

1.2 检测方法 兔抗人PTEN单抗、鼠抗人KDP单抗、兔抗人Beclin1 多抗，试剂采购于武汉金开瑞生物工程有限公司，于4 ℃冰箱保存，工作浓度为1∶75。使用免疫组化SP法，离体组织保存于10%福尔马林，石蜡包埋，组织薄层切片，使用二甲苯进行脱蜡，再进行梯度乙醇脱水，免疫组化染色过程参照说明书，DAB显色，使用苏木精再次染色，使用中性树胶封片，PBS 代替一抗当作阴性对照，生物公司提供的阳性切片作为阳性对照。

1.3 免疫组化结果判定 使用半定量积分法对表达情况进行判定，从染色强度、阳性细胞占比进行计分判定：①染色强度：未着色、浅着色、重度着色、深着色分别计为0 分、1 分、2分、3分；②阳性细胞百分比：随机选取5个高倍镜（400×）视野，在每个视野内计数细胞100个，计算平均阳性百分比，阳性细胞占比＜5%、5%～24%、25%～49%、≥50%分别计为0 分、1分、2分、3分。依据以上两项分数之和将PTEN、KDR、Beclin1的检测结果划分为4 级：阴性（-）为0 分，弱阳性（+）为1～2分，阳性（++）为3～4分，强阳性（+++）为5～6分。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0统计软件进行数据分析，计数资料用百分比（%）表示，比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PTEN、KDR、Beclin1的表达 PTEN在癌变组织、正常宫颈组织的阳性表达率分别为37.65%（32/85）、100%（30/30），KDR在癌变组织、正常宫颈组织的阳性表达率分别为68.24%（58/85）、10.00%（3/30），Beclin1 在癌变组织、正常宫颈组织的阳性表达率分别为29.41%（25/85）、73.33%（22/30）；PTEN、Beclin1在癌变组织的阳性表达率明显低于正常宫颈组织（P＜0.05），KDR 癌变组织的阳性表达率明显高于正常宫颈组织（P＜0.05）。

2.2 PTEN、KDR、Beclin1 在宫颈癌中的表达和临床病理的关系 PTEN、KDR、Beclin1 的表达水平与癌变组织的分化程度、是否有淋巴结转移有关（P＜0.05），与年龄、临床分期、组织学类型无关，见表1～3。

表1 PTEN的表达水平和临床病理的关系Table 1 The expression of PTEN and its relationship with clinicopathology

表2 KDR的表达水平和临床病理的关系Table 2 The expression of KDR and its relationship with clinicopathology

表3 Beclin1的表达水平和临床病理的关系Table 3 The expression of Beclin1 and its relationship with clinicopathology

3 讨论

PTEN是人类最早发现的既有脂质磷酸酶活性又有蛋白磷酸酶活性的抑癌基因。PTEN 广泛表达于人体的正常组织，该基因的缺失、突变、低表达和恶性肿瘤的预后、发生、发展密切相关。Sharad Purohit 等[2]对宫颈癌的临床病理和PTEN的关系进行研究，发现宫颈癌是否有淋巴结转移、癌变浸润程度、组织分化程度和PTEN蛋白的表达关系密切，表明PTEN 在宫颈癌病变的进展中发挥一定的作用，判定肿瘤的进展情况及恶性程度的作用。李海平等[3]也进行类似的研究，结果显示，不同临床分期的宫颈癌和PTEN 的异常甲基化、失活有相关性。本研究中，免疫组化法检测的PTEN阳性呈棕黄色颗粒状，主要存在于细胞膜或者细胞浆；其在宫颈癌组织和正常宫颈组织中的阳性表达率分别为37.65%（32/85）、100%（30/30），差异有统计学意义（P＜0.05）；在临床病理中，组织分化程度、淋巴结是否转移和PTEN的阳性表达有关（P＜0.05）。表明PTEN 蛋白表达水平的降低和发生宫颈癌密切相关，在淋巴结转移、宫颈癌的分化过程中发挥一定的作用。

KDR是血管内皮细胞生长因子受体家族中的其中之一，血管内皮细胞生长因子发挥其生物活性促进血管内皮细胞的增殖主要通过与KDR的结合实现[4]。KDR的控制基因位点在人染色体4q31.2～q32，全长含有氨基酸1 356 个[5]，能诱导血管的生成、提高血管的通透性[6]。近年来，多项研究[7-9]显示子宫内膜癌、肝癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤的病程进展、预后和血管内皮生长因子及其相应受体密切相关。有报道[10-11]显示在部分女性生殖系统的恶性肿瘤、甲状腺癌的细胞内均能检测出KDR的表达。在宫颈癌中也能检测出KDR 的表达，但是其表达意义仍无一致结论[12]。本研究中，KDR在宫颈癌组织和正常宫颈组织中的阳性表达率分别为68.24%（58/85）、10.00%（3/30），差异有统计学意义（P＜0.05）；在临床病理中，组织分化程度、淋巴结是否转移和KDR的阳性表达有关（P＜0.05）。表明PTEN蛋白表达水平的升高会增加淋巴结发生转移、宫颈癌低分化的发生率。

Beclin1是一种正向调控自噬的基因，能调节细胞的自噬过程，作为一种抑癌基因在肿瘤的病情进展中发挥重要的作用[13]。Beclin1抑制肿瘤主要通过如下途径：防止和癌相关的基因发生突变；对肿瘤细胞有诱导作用，使其发生自噬性凋亡；对肿瘤组织的血管生成有抑制作用[14]。David等[15]使用宫颈癌细胞在体外进行肠转移培养，结果显示Beclin1能抑制转移细胞株Caski 细胞的转移及入侵，这和Beclin1对细胞增殖的抑制作用相关。另有研究[16]显示，子宫颈癌的病情进展和Beclin1 的表达水平降低有关。本研究中，Beclin1 在宫颈癌组织和正常宫颈组织中的阳性表达率分别为29.41%（25/85）、73.33%（22/30），差异有统计学意义（P＜0.05）；在临床病理中，组织分化程度、淋巴结是否转移和Beclin1 的阳性表达有关（P＜0.05）。表明Beclin1 蛋白表达水平的降低使淋巴结发生转移、宫颈癌出现低分化的的概率增大。

综上所述，在宫颈癌组织中PTEN、Beclin1 的表达水平明显低于正常宫颈组织（P＜0.05），而KDR 的表达水平则明显高于正常宫颈组织（P＜0.05）。在低、中分化的癌细胞中，PTEN、Beclin1 的阳性表达率明显低于高分化的癌细胞，而KDR 的阳性表达率则明显高于高分化的癌细胞（P＜0.05），表明PTEN、Beclin1的低表达、KDR的高表达会对肿瘤的恶性程度升高有促进作用；在有淋巴结转移的癌细胞中PTEN、Beclin1的阳性表达率明显低于没有淋巴结转移的癌细胞，而KDR 的阳性表达率则明显高于没有淋巴结转移的癌细胞（P＜0.05），表明PTEN、Beclin1的低表达、KDR的高表达和淋巴结转移密切相关。