辛伐他汀对狼疮性肾炎小鼠肾组织中IL17、HMGB1、TLR4表达的作用研究

蓝梅金

(龙岩市第二医院肾内科，福建 龙岩 364030)

系统性红斑狼疮(SLE)作为常见的自身免疫性疾病中，其主要是因狼疮性肾炎(LN)引发，严重时会导致残疾、死亡等后果[1-2]。目前研究分析发现HMGB1(细胞因子高迁移率族蛋白1)为重要致病因素，而TLR4受体细胞及IL17表达也与病症的致炎有着紧密的关系[3-4]。为分析辛伐他汀对狼疮性肾炎小鼠肾组织中IL17、HMGB1、TLR4的影响，本文进行分组对照，报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验设计

选取14只16周龄雄性BSXSB小鼠为LN试验模型，体质量均在18～24g之间，随机标号均分成对照组(7只)和研究组(7只)，研究组根据用药剂量不同分为研究A组(3只)、研究B组(2只)和研究C组(2只)，另外同时选取相同周龄7只C57BL/6小鼠为正常组，体质重18～24g，所有选取小鼠均引种自美国Jackson实验室，实验前先饲养一周，饲养期间均给予相同的环境，均自由饮食、饮水，实验时间段：12～16周龄末。

1.2 主要试剂

免疫组化试剂盒、免抗小鼠TLR4多克隆抗体、免疫小鼠HMGB1多克隆抗体、免抗小鼠IL17多克隆抗体、辛伐他汀。

1.3 实验及标本采集方法

1.3.1实验方法

三组模型小组建立后，其中对照组和正常组小鼠均予常规饲养，不予其他处理，而研究组小鼠于试验起点时，开始灌服含有辛伐他汀的0.1%PBS溶液，研究A组剂量为5mg·kg-1·d-1；研究B组剂量为10·kg-1·d-1，研究C组剂量为15mg·kg-1·d-1，每天灌服一次，直至实验末期。

1.3.2标本采集方法

三组小鼠均于实验终点时，行眼眶取血，常规血清分离致死。然后取小鼠肾皮质组织，用多聚甲醛(4%)和戊二醇(2%)固定。同时，部分组织被切割和冷冻，并储存在-72℃下供日后使用。

1.4 检测方法

对三组小鼠BUN水平进行检测，同时对样本肾脏组织中的IL17、HMGB1及TLR4蛋白的表达水平进行检测：行常规切片→脱蜡水化→HE染色→抗原修复→稀释后IL17多克隆抗体、HMGB1多克隆抗体及TLR4多克隆抗体处理→4℃过夜；阴性对照用PBS代替一抗，观察和记录阳性信号。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 BUN水平对比

对照组显著高于正常组(P<0.05)。研究A组(8.34±0.80)、研究B组(7.67±0.82)、与对照组及正常组相比差异显著(P<0.05)。研究C组与对照组相比差异显著(P<0.05)，但与正常组相比差异较小(P>0.05)。病理图如图1，各组小鼠BUN水平见表1。

表1 各组小鼠BUN水平对比情况

2.2 肾组织中IL17、7、HMGB1、TLR4蛋白表达水平对比

研究组三项均值显著低于对照组，但显著高于正常组，组间比较差异显著(P<0.05)。其中研究C组IL17、7、HMGB1、TLR4均显著优于研究A组及B组(P<0.05),与正常组比较差异不显著(P>0.05)。详细见下表2、图2、图3。

表2 三组小鼠肾组织中IL17、HMGB1、TLR4蛋白表达水平对比

研究组(400×)对照组(400×)图1 两组小鼠肾组织IL17蛋白的表达

3 讨论

狼疮肾炎是SLE患者最常见的并发症，病理改变多样且不均匀，以肾小球、血管、小管和间质损伤为特征。急性或慢性进展为肾纤维化甚至肾功能衰竭是SLE患者死亡的主要原因之一[5]。

系统性狼疮肾炎的发病机制复杂，与遗传、T淋巴细胞和B淋巴细胞功能等诸多因素有关。此外，本病的早发相对隐蔽或突然，起病危险，治疗后易复发，给临床治疗带来困难[6-7]。目前，关于狼疮性肾炎的发病机制还没有得到证实和可重复的结论。大多数学者认为[8]，某些外来抗原(如逆转录病毒)和内源性抗原(如DNA、基本免疫蛋白和淋巴细胞表面抗原)具有异常免疫调节功能的患者导致B淋巴细胞高度活跃的增殖和大量自身抗体的产生。与相应抗原相关的免疫复合物沉积在肾小球是狼疮性肾炎的主要发病机制[9-10]。DNA与肾小球基底膜结合，并与循环抗DNA抗体形成原位免疫复合物，这也可能与狼疮性肾炎有关[11]。某些补体成分也会增加免疫复合物在组织中的沉积，加重组织损伤[12]。补体激活、趋化因子形成、白细胞聚集以及一系列炎症介质和细胞因子的释放导致小血管炎症和肾小球损伤[13]。

狼疮性肾炎的常规治疗药物是糖皮质激素与环磷酰胺，但疗效并不稳定，长期使用还会导致感染、高血糖和肝毒性、性腺损害等不良反应[14-15]。辛伐他汀是HMG-CoA还原酶抑制剂，据报道，它可以减少蛋白尿和肾小球损伤。表1中的数据分析表明，狼疮性肾炎可直接导致小鼠血液中BUN含量增加，表明该疾病可直接损害小鼠的肾功能[16]。但经辛伐他汀治疗后，小鼠组BUN水平较对照组有所下降，表明辛伐他汀有助于改善小鼠肾功能，并且根据数据可知，剂量越大，肾功能改善越明显[17-18]。而表2的数据分析显示，与正常组相比，狼疮性肾炎模型小鼠肾组织中IL17、HMGB1和TLR4蛋白表达水平显著升高，提示三者可能在肾脏炎症中起一定的炎症作用，且三者具有协同作用。此外，研究小组在给小鼠服用辛伐他汀后，发现这组小鼠肾组织中三项指标的蛋白表达水平明显低于对照组，表明辛伐他汀治疗效果显著，可抑制上述蛋白表达，具有抗炎作用，结果得到相关证实[19-20]。

综上，辛伐他汀能抑制IL17、HMGB1、TLR4在肾脏组织中的表达，预防狼疮性肾炎，且剂量越大，效果更优，可作临床参考。